土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法

　　土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 天津本生

　　中文名称:土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒

　　储存条件2-8℃

　　单位盒

　　有效期6个月

　　英文名称Soil Acid Protease Activity Assay Kit

　　检测方法可见分光光度法 Spectrophotometer

　　规格50T/24S

　　产品组成：使用请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

　　试剂名称 规格 保存条件

　　试剂一 液体 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂二 粉剂×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂三 液体 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂四 液体 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂五 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂六 液体 15 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存

　　溶液的配制：

　　1、 试剂二：临用加入 10 mL 试剂六，沸水浴搅拌溶解后待用，用不完的试剂 2-8°C保存 1 个月。

　　2、 标准品：20μmol/mL 酪氨酸溶液。

　　产品说明：

　　土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源。土壤酸性蛋白酶在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。酸性条件下，土壤酸性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

　　Casein Tyrosine Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

　　注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

　　增加样本量进行检测。

　　需自备的仪器和用品：

　　可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、台式离心机、研钵、蒸馏水、30-50

　　目筛。

　　操作步骤：

　　一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)新鲜土样自然风干或 37°C烘箱风干，过 30~50 目筛。

　　二、测定步骤

　　Soil acid protease，H+OH-

　　1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

　　2、 标准溶液的稀释：取10μL  20μmol/mL酪氨酸标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.2μmol/mL标准液使用，现用现配。(实验中每管需要220μL，为减小实验误差，故配制大体积。)

　　3、 样本测定

　　试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管

　　风干土样(g) 0.1 0.1 - -

　　试剂一(μL) 200 200 - -

　　试剂二(μL) 100 - -

　　充分混匀后，37°C水浴/恒温培养箱中反应24h，期间振荡5-6 次，

　　使土样与反应液充分接触。 - -

　　试剂三(μL) 200 200 - -

　　试剂二(μL) - 100 - -

　　混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液待测 - -上清液(μL) 220 220 - -

　　0.2μmol/mL标准液(μL) - - 220 -

　　蒸馏水(μL) - - - 220

　　试剂四(μL) 650 650 650 650

　　试剂五(μL) 130 130 130 130

　　混匀，40°C水浴或恒温培养箱培养 10min，10000rpm 室温离心 10min，取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A，分别记为 A  测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA标准=A 标准管-A 空白管。(标准管、空白管只需测 1-2   次，每个测定管需设一个对照管)

　　三、土壤酸性蛋白酶活性计算

　　单位定义：每天每g土样中产生1μmol的酪氨酸为一个土壤酸性蛋白酶活力单位。

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W

　　C标准：标准管浓度，0.2μmol/mL;V反总：反应体系总体积，0.5mL;T：反应时间，1d;W：样本质量，g。

　　注意事项：

　　当吸光值大于1时，建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。

　　实验实例：

　　1、 分别称取 2 份 0.1g 土样于 1.5mLEP 管中，分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作，使用 1mL 玻璃比色皿 测 定 吸 光 度  ， 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.206-0.178=0.028 ， ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白  管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g 土样。

　　2、 分别称取 2 份 0.1g 三叶草土样于 1.5mLEP 管中，分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作，使用 1mL   玻璃比色皿测定吸光度，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.831-0.612=0.219，ΔA 标准=A 标准管-A   空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

　　土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g 土样。

　　相关系列产品：

　　BC0270/BC0275 土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒

　　BC0880/BC0885 土壤碱性蛋白酶(S-ALPT)活性检测试剂盒

　　测定意义：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源。S-ACPT  在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

　　测定原理：酸性条件下，S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm 有特征吸收峰。

　　所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

　　备注：

　　以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。

　　土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 本生生物公司供应：荧光定量PCR耗材，细胞培养类，核酸提取耗材，试剂包装类，生物试剂，色素，原料，抗原抗体，试剂盒等，通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。