热点应用丨双光子成像——RMS1000共聚焦显微拉曼光谱仪新功能拓展

双光子显微是一种成像技术，其中两个红外光子被同时吸收以产生更短波长的荧光。双光子吸收是一个非线性过程，其吸收概率与激发强度成二次方关系。这导致荧光被限制在比单光子荧光显微镜小得多的焦点，因为焦点是空间中唯一具有足够光子密度以发生双光子吸收的点。这种局部激发与较长波长红外激发光的较低吸收和散射相结合，使双光子显微镜成为深入厚生物样品成像的理想选择。

双光子吸收需要非常高的激发强度，这只能通过飞秒激光器来实现。爱丁堡仪器 RMS1000 共聚焦拉曼显微镜具有外部激光耦合端口，可将飞秒激光耦合到显微镜中。下面显示了使用 RMS1000 进行双光子光谱和寿命显微镜的实验设置，其中 RMS1000 已配置有 CCD 相机和光子计数的光电探测器以及时间相关单光子计数 (TCSPC) 电子设备，用于光谱和寿命双光子显微成像中。