鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4295鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒

　　产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，专用于体外定量检测鸡血清、血浆或组织匀浆样本中抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)的浓度。适用于科研实验。

　　试剂盒组成

　　预包被微孔板：96孔(或48孔)，含固定化鸡AT-Ⅲ捕获抗体。

　　标准品：冻干粉，需复溶后使用，提供已知浓度梯度。

　　酶标记抗体：HRP标记的检测抗体，避光保存。

　　显色底物：TMB溶液，室温避光保存。

　　终止液：酸性溶液(如2M H₂SO₄)。

　　洗涤缓冲液：浓缩液，需稀释后使用。

　　样本稀释液：用于处理血清/血浆样本。

　　封板膜：用于温育时密封微孔板。

　　储存条件

　　未开封试剂盒：2–8℃避光保存，有效期6个月。

　　开封后：剩余试剂及时密封，2–8℃短期保存。

　　实验步骤

　　样本准备：

　　血清/血浆：采集后室温静置30分钟，离心(3000×g，10分钟)取上清，避免溶血。

　　组织匀浆：按比例加入生理盐水匀浆，离心取上清。

　　样本稀释：用样本稀释液按比例稀释(建议1:5–1:10)。

　　试剂准备：

　　洗涤缓冲液：浓缩液按说明书稀释，摇匀备用。

　　标准品：加入标准品稀释液复溶，静置10分钟，涡旋混匀后梯度稀释。

　　加样与温育：

　　每孔加入100μL标准品或稀释样本，设空白对照孔。

　　37℃恒温箱温育90分钟，避免震动。

　　洗涤：

　　甩尽孔内液体，用洗涤缓冲液注满每孔，静置30秒后拍干，重复5次。

　　酶标记抗体反应：

　　每孔加入100μL酶标记抗体(避光操作)。

　　37℃避光温育30分钟，重复洗涤步骤。

　　显色与终止：

　　每孔加入90μL显色底物(TMB)，室温避光反应15–20分钟。

　　加入50μL终止液终止反应，溶液变黄。

　　测定：

　　30分钟内用酶标仪测定450nm波长吸光度(OD值)。

　　结果计算

　　以标准品浓度(横坐标)与OD值(纵坐标)绘制标准曲线。

　　根据样本OD值在标准曲线上对应浓度，乘以稀释倍数即为样本实际浓度。

　　注意事项

　　操作前：仔细阅读说明书，穿戴防护装备(手套、口罩)。

　　环境要求：避免强光、酸碱蒸汽或灰尘环境，室温稳定。

　　试剂处理：

　　微量移液器吸嘴不可混用，防止交叉污染。

　　显色底物加入后需避光，强光影响结果准确性。

　　样本与废弃物：视为潜在传染性物质，按生物安全规范处理。

　　质量控制：每批次实验设空白对照和质控样本，确保数据可靠。

　　常见问题解答

　　显色异常：检查底物是否失效或污染。

　　标准曲线不佳：复溶标准品时充分混匀，避免气泡。

　　高背景值：洗涤步骤需彻底，防止残留液体

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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