鸡甘油三脂脂肪酶(ATGL)ELISA试剂盒实验使用说明书

   鸡甘油三脂脂肪酶(ATGL)ELISA试剂盒实验使用说明书

   BS-7278鸡甘油三脂脂肪酶(ATGL)ELISA试剂盒

   一、试剂盒组成

   预包被微孔板‌：96孔（8×12条），含抗鸡ATGL单克隆抗体。

   标准品‌：冻干粉状，需用标准品稀释液复溶，配制梯度浓度（如0.312-20ng/mL）。

   酶标抗体‌：HRP标记的抗鸡ATGL抗体，避光保存。

   显色底物‌：TMB溶液，避光保存。

   终止液‌：2M溶液。

   洗涤液‌：20×浓缩洗涤液，需用蒸馏水稀释。

   样本稀释液‌：用于稀释血清/血浆样本。

   封板膜‌：透明或白色遮光膜，用于孵育时密封微孔板。

   二、样本处理

   血清/血浆样本‌：

   采集后室温静置30分钟，4℃1000×g离心15分钟，取上清液。

   避免溶血，否则可能干扰检测。

   组织匀浆样本‌：

   称取0.1g组织，加入1mL预冷PBS，冰浴匀浆后离心取上清。

   保存条件‌：短期（≤3天）4℃保存，长期需分装后-20℃/-80℃冻存，避免反复冻融。

   三、实验步骤

   加样‌：

   设空白孔、标准孔、样本孔，每孔加入100μL样本或标准品。

   加样时移液枪垂直悬空，避免触碰孔壁。

   孵育‌：

   37℃孵育90分钟，用封板膜密封防止蒸发。

   洗涤‌：

   弃去孔内液体，每孔加入350μL洗涤液，静置1-2分钟后甩干，重复5次。

   加酶标抗体‌：

   每孔加入100μLHRP标记抗体，37℃孵育60分钟。

   再次洗涤‌：同步骤3。

   显色‌：

   每孔加入90μLTMB底物，37℃避光孵育15-20分钟（显色梯度明显时终止）。

   终止反应‌：

   每孔加入50μL终止液，溶液由蓝变黄。

   读数‌：

   30分钟内用酶标仪测定450nm波长吸光度（OD值）。

   四、结果计算

   绘制标准曲线‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，用四参数逻辑回归（4PL）拟合曲线。

   样本浓度计算‌：将样本OD值代入标准曲线公式，计算实际浓度。

   浓度单位‌：计算结果以ng/mL表示，需乘以稀释倍数（如样本稀释10倍，结果×10）。

   五、注意事项

   试剂保存‌：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月；开封后标准品需分装冻存。

   避免污染‌：使用一次性枪头，不同样本/标准品更换枪头。

   孵育条件‌：确保恒温孵育器温度均匀（37℃±1℃），避免边缘效应。

   显色控制‌：TMB显色时间严格控制在15-20分钟，避免过度显色导致OD值偏高。

   重复检测‌：建议每个样本设复孔，计算变异系数（CV）评估精密度（板内CV<10%）。

   六、常见问题解决

   OD值异常‌：检查洗涤是否彻底、试剂是否过期、孵育时间是否准确。

   标准曲线不佳‌：验证标准品稀释精度，确保复溶充分。

   样本值低于空白值‌：可能因样本基质干扰，建议稀释后重测。

   注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

   鸡甘油三脂脂肪酶(ATGL)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生试剂盒