外泌体抑制剂——GW4869

GW4869是目前应用最普遍的外泌体抑制剂，又名鞘磷脂酶抑制剂，因外泌体的火热研究而被广泛使用。在外泌体的性质与功能研究中，常常需要设计抑制外泌体分泌的对照实验，因此GW4869常被研究人员作为外泌体抑制剂的首选化合物。

GW4869是由德国Mikael Simons教授于2008年发现，并发表在Science期刊上，首次发现GW4869可以抑制细胞分泌外泌体，这是GW4869作为外泌体抑制剂首次被报道。

GW4869具有细胞渗透性，是非竞争性的N-Smase（中性鞘磷脂酶）抑制剂，IC₅₀值为1 μM。它能阻断神经酰胺介导的多泡体萌芽从而抑制多泡体释放外泌体，是常用的抑制外泌体生成的药物。研究发现，GW4869在体内通过阻止外来体分泌减少淀粉样斑块形成，在达到抑制nSMase2引起的生理效应的浓度（即有效浓度）下，GW4869具有较少毒性。

下图是客户使用本产品发表的科研文献：

文章研究了HUCMSCs（人脐带间充质干细胞）和HUC-Exos（人脐带间充质干细胞来源的外泌体）对糖尿病伤口愈合的影响。文章利用HUC-Exos进行体外和体内实验，验证其在糖尿病伤口愈合调节中的作用。结果表明，HUCMSCs具有通过外泌体调节内皮细胞氧化应激损伤的能力，并在体外加速糖尿病皮肤伤口愈合。研究表明，HUC-Exos可加速糖尿病皮肤伤口愈合，为慢性糖尿病伤口修复提供有前景的治疗策略。

文章评估了HUCMSCs对HUVEC氧化应激损伤调节的影响，其中GW4869被用作外泌体分泌抑制剂来进行对照实验。研究团队为HUVEC建立了三组实验环境：第一组是在30 mM葡萄糖培养基中孵育的HUVEC；第二组是30 mM葡萄糖培养基中孵育的HUCMSC和HUVEC组成的硬币孵化系统；根据第二组的情况，在第三组中加入GW4869以抑制外泌体的分泌。

通过蛋白质印迹评估了72小时时间点每组NOX1和NOX4的表达水平。结果显示，第一组和第三组表现出氧化应激相关因子水平升高，而第二组表现出相反的结果（上图A)。ROS流式荧光试验表明，与其他组相比，HUCMSC降低了第二组的荧光。另一方面，第三组表现出强烈的荧光。（上图B-C)。管形成实验以评估HUVECs的毛细管网络形成。结果显示，第二组内皮细胞表现出更高的管形成能力，而第三组细胞在管形成方面几乎不比第一组好（上图D–F)。RT-qPCR作为补充，分析细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白D3的表达水平。结果表明，第二组增殖相关因子水平高于其他组（上图G)。为了评估炎症反应，随后使用RT-qPCR检测IL-1β、IL-6和TNF-α作为细胞损伤的替代标志物。结果显示，第2组炎症因子水平低于其他组，第3组与第1组差异无统计学意义（上图H–J)。这些数据表明，HUCMSCs通过源自HUCMSCs的外泌体改善了HUVECs的氧化应激损伤。

在这项研究中，研究团队发现HUCMSCs显着抑制了HUVECs中高葡萄糖诱导的氧化应激损伤，从而调节其活性，增殖和血管生成。HUCMSCs通过内吞作用分泌外泌体进入HUVECs。HUC-Exos通过抑制氧化应激和减少炎症反应来调节内皮细胞的活性和功能，从而在宏观水平上促进血管生成。此外，研究发现HUC-Exos主要通过调节上皮化，胶原蛋白沉积和ECM重塑来促进伤口愈合。综合这些结果，HUC-Exos通过减少氧化应激和炎症反应来调节内皮细胞功能，从而促进血管生成并最终加速糖尿病伤口愈合，为改善糖尿病提供了一种有前景的治疗策略。

产品GW4869，用DMSO制备1.5 mM存储溶液，并储存在−80°C。 使用前，将5% MSA溶解到GW4869储存溶液中，配置1.43 mM GW4869。将悬浮液充分混合并在37°C下加热至澄清。然后将GW4869抑制剂以10-20 μM的浓度范围加入细胞培养基中，并处理细胞约30分钟。