从细胞培养或血清等复杂样品中纯化蛋白质需要多个层析步骤,纯化过程中的每一步都需要优化,以最大限度地提高目标蛋白质的产量和纯度。因此,在开发和优化阶段要进行小规模纯化实验,以保留珍贵的样品,同时提供关键信息。
图1:使用多孔滤板进行纯化过程
1、平衡:使用样品缓冲液;2、装载样品;3、清洗未结合的样品;4、洗脱感兴趣的蛋白质;5、CIP
使用带有1.2 μm Supor膜的AcroPrep Advance过滤板(PN8039)和Pall的混合模式层析树脂HEA HyperCel,在多孔板抽滤装置(PN5017)和真空泵(PN13158)的负压过滤条件下可高效分离混合样品中的三种蛋白质。
图2:用1.2 μm Supor膜的AcroPrep Advance过滤板(PN8039)从蛋白质混合物中高效回收溶菌酶、人IgG和牛血清白蛋白
为了克服传统填料的传质限制,获得更好的流量分布、更快的流速和更高的可及性,从而快速纯化目标蛋白质或去除污染物,Pall AcroPrep Advance过滤板提供两种IEX膜,分别为Mustang Q(强阴离子)和Mustang S(强阳离子)。
图3:使用带有Mustang Q膜(左图)和Mustang S膜(右图)的AcroPrep Advance滤板进行目标蛋白分离
从细胞培养物中回收单克隆抗体(mAB)等胞外蛋白时经常需要离心及过滤进行澄清。对于在24孔板中培养细胞的实验室来说,这些步骤既费时又费钱。利用具有Seitz深层过滤介质和Supor EKV(0.65/0.2 μm PES)滤膜的AcroPrep 24孔滤板,可替代离心/过滤/絮凝的方法来澄清细胞培养物,回收上清液中的蛋白质。
图4:使用AcroPrep 24孔板对细胞培养液一步完成澄清和无菌过滤
表1:用Acroprep 24孔澄清/除菌滤板(PN97026)从高密度CHO细胞培养物(26x106 个/mL)中收集IgG(数据为平均值)
表2:分别用AcroPrep 24孔澄清/除菌滤板(PN97026)和AcroPrep 24孔除菌滤板(PN97027)从高密度HEK293T细胞培养物(2-4x106 个/毫升)中收集蛋白(数据为平均值)
裂解物中的生物大分子浓度比较高,往往比感兴趣的目标分子高出数百万倍。
离心是沉淀细胞碎片的主要方法;
沉淀法在许多需要小规模、高通量处理的应用中存在一些限制;
过滤法很容易实现自动化,速度相对较快,并允许使用额外的清洗步骤来最大限度地回收样本。
图5:利用带有3.0 μm GF/0.2 μm Supor滤膜的AcroPrep Advance 96孔过滤裂解物后,样品浊度降低了95%以上
使用AcroPrep Advance过滤板对裂解液进行澄清后,可以用过滤板进行下游应用,如:
使用AcroPrep Advance NAB过滤板进行质粒DNA的核酸纯化;
使用带有Omega膜的AcroPrep Advance过滤板进行超滤脱盐;
使用AcroPrep Advance NAB过滤板进行核酸纯化的RNA分离。
图6:利用AcroPrep Advance 96孔核酸结合过滤板从HEK293和CHO细胞中分离和纯化基因组DNA,用于实时qPCR和新一代测序文库构建等下游应用
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