CELL REP:压力驱动的线粒体转移途径产生所需遗传组合和命运的哺乳动物细胞

本文由 北京心动康达信息技术有限公司 整理汇编

2024-09-28 04:03 714阅读次数

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• CELL REP:压力驱动的线粒体转移途径产生所需遗传组合和命运的哺乳动物细胞

  产生具有所需线粒体DNA（mtDNA）序列的哺乳动物细胞有助于研究线粒体、疾病建模和潜在的再生疗法。美国研究人员Alexander N. Patananan等开发了一种高通量线粒体转移装置——MitoPunch，通过将小鼠或人类细胞分离出的线粒体转移到原代或永生的mtDNA缺陷（ρ0）细胞中，产生具有特定mtDNA-nDNA （核DNA）组合的细胞。稳定的分离线粒体受体（stable isolated mitochondrial recipient, SIMR）细胞经限制性培养基分离，能够永久保留供体mtDNA并重新获得呼吸作用。然而，尽管在限制性培养基中生长，SIMR成纤维细胞仍保持ρ0样细胞代谢组和转录组。研究人员将非永生的SIMR成纤维细胞重新编程为诱导多能干细胞（iPSC），随后分化为多种功能细胞类型，包括间充质干细胞（MSC）、脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。重编程和分化后，SIMR成纤维细胞在分子和表型上与对照成纤维细胞类似。因此，使用MitoPunch能够生产具有独特mtDNA-nDNA组合的SIMR细胞，可用于多种细胞类型的研究和应用。[详细]

  2024-09-28 04:03

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• BT产品应用（36）快速筛选高表达细胞膜蛋白的哺乳动物细胞克隆

  ClonePix 2 技术使细胞在半固体培养基中生长形成悬浮的细胞克隆，然后利用荧光检测和标志物对这些克隆成像。此篇应用文章将介绍该技术的一个新应用，即基于细胞表面蛋白表达量的细胞克隆筛选。[详细]

  2024-10-09 10:19

  应用文章

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• Cell亮点论文：新遗传筛选方法

  Cell亮点论文：新遗传筛选方法[详细]

  2024-09-16 02:45

  专利

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• 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书

  动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升活性液（ReagentF）微升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentF）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管：用于保存线粒体4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和4毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g11．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g13．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）15．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g16．（选择步骤）小心抽去上清液17．加xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀18．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．移入一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx毫升裂解工作液9．涡旋震荡5秒，充分混匀10．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）12．涡旋震荡5秒，充分混匀13．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）14．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀15．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g16．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）20．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g21．（选择步骤）小心抽去上清液22．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀23．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离（细胞匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，3．小心抽去清洗液4．重复实验步骤2至3一次5．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．放进37℃培养箱孵育3分种7．手击震动培养瓶，使细胞脱落8．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9．全部移入到一个50毫升锥形离心管10．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g11．小心抽去上清液12．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞13．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g14．小心抽去上清液15．加入预冷的xx毫升裂解工作液16．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群17．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）（注意：参见注意事项8）18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面28．小心抽去清洗液3．重复实验步骤2至3一次4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面5．放进37℃培养箱孵育3分种6．手击震动培养瓶，使细胞脱落7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8．全部移入到一个50毫升锥形离心管9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g10．小心抽去上清液11．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA）12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）18．涡旋震荡5秒，充分混匀19．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）20．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g22．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）26．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g27．（选择步骤）小心抽去上清液28．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀29．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里注意事项1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）或50次（200毫克动物组织或1X107细胞）操作2．实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一3．所有操作均须在4℃或以下状态进行4．操作时，须戴手套5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）6．建议使用足够的样品量7．建议严格控制操作时间8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数9．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11．通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解13．本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g，可以提高粗提的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少14．如果需要获得99％以上纯度的线粒体，使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒－10006.315．线粒体正常活性测定方法是：CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17．本公司提供线粒体套餐：ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18．本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3．本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]

  2018-11-18 10:00

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• BT产品应用（32）快速GX地筛选高表达重组蛋白的哺乳动物细胞

  ClonePix系统的技术可以挑选出高表达分泌蛋白的细胞。借助荧光偶联抗体，通过荧光成像和精密的机械设计筛选并挑取分泌表达单体蛋白的CHO细胞和HEK293细胞可以显著提升工作效率，精简工作流程，ZZ获得高表达目标蛋白的优质细胞株。[详细]

  2024-09-18 18:09

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• J MOL CELL CARDIOL：心肌细胞的线粒体结构取决于心肌细胞形态和胞外基质硬度

  心肌细胞收缩依赖于线粒体产生的能量。众所周知，在心脏发育和疾病过程中，心肌细胞线粒体网络的结构和功能与许多其他因素一起发生重构，包括：营养利用率的变化，血流动力学负荷，细胞外基质(ECM)的硬度，细胞形状和其他细胞内结构的成熟。但是，这些因素中的每一个因素对线粒体网络结构的单独影响尚不明确。[详细]

  2024-09-28 02:24

  应用文章

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• 动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

  主要用途Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化，通过比色测定其Zda吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量极ng确。技术背景考马斯亮蓝染料G－250（CoomassieBrilliantBlueG－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐（anionsulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下，其Zda吸收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的Zda优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之Lowry，Hartree-Lowry和BCA技术，更为敏感。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 润滑油泡沫的产生和危害

  润滑油泡沫的产生和危害[详细]

  2015-01-16 00:00

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• 禽流感的传播途径和流行方式

  上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]

  2018-10-08 10:00

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• 化肥质量提高的途径

  化肥质量提高的途径[详细]

  2014-11-14 00:00

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• 激光粒度仪样品制备所需的用品

  激光粒度仪样品制备所需的用品我公司推出的GJ03-系列激光粒度仪/激光粒度分布仪系统是集光、机、电、计算机为一体的高科技产品，采用进口半导体激光器，寿命长，单色性好；先进的机械设计与加工工艺和微电子集成电路技术；高灵敏度的光电池接收系统，全程米氏理论作为基础，结合优异的计算方法。使测试数据更加极ng确，快捷；是目前国内比较经济实用的一款激光粒度分布仪。检测前，我们需要对样品进行制备，制备的过程中应准备如下物品：蒸馏水（液体介质）：至少500ml，如无蒸馏水可使用去离子水或饮用纯净水等，水质的标准是透明无杂质且不能因为水中的矿物质与测试的样品发生化学反应而影响样品颗粒在悬浮液中存在的状态。如果所测试的样品与纯水发生溶解、絮凝、团聚、膨胀等物理反应或化学反应时，请准备与所要测试的样品不发生物理、化学反应的纯净、透明、无杂质的有机溶剂或样品的饱和溶液作为液体介质。如果所测试的样品通过此液体介质使物质优先附着于玻璃（样品池）表面时，请改变所选择的液体介质。注：如选择样品的饱和溶液作为液体介质时，饱和溶液必须在同一温度下准备和使用，否则，该溶液将变成不饱和状态，或在其中形成物质的结晶，饱和溶液的过滤同样很有必要，不可将含有样品颗粒的饱和溶液作为液体介质。烧杯（50ml或100ml）：至少一个。取样勺：取样。专用搅拌器：配置测试样品的悬浮液时使用。专用取样器：将测试样品的悬浮液加入到样品池中。优质纸巾：擦拭样品池用。分散剂：是指加入到液体介质中的少量的、能使介质表面张力显著降低，从而使颗粒表面得到良好润湿作用的化学物质。不同的样品需要用不同的分散剂。常用的分散剂有六偏磷酸钠、焦磷酸钠等。分散剂的作用有两个方面：一、加快“团粒”分解为单体颗粒的速度；二、延缓和阻止单个颗粒重新团聚成“团粒”。分散剂的用量为液体介质重量的千分之二至千分之五。使用时可先将分散剂按比例加到液体介质中，待充分溶解后即可使用。通常有机溶剂作为液体介质时，一般不用加分散剂，因为多数有机溶剂本身具有分散剂作用，此外还因为一些有机溶剂不能使分散剂溶解。超声波发生器：配套设备,功率：50W；频率：50KHz。配置样品的悬浮液时使用，利用超声波发生器使水所产生的气化作用进而使悬浮液中的样品颗粒形成单颗粒状，分散样品团粒的作用。注意：超声波发生器在使用时，其盛水容器至少放置三分之一的水。严禁超声波发生器盛水容器在无水的状态下启动超声波。[详细]

  2018-10-07 10:02

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• 小麦粉中破损淀粉的产生和测定

  小麦粉中破损淀粉的产生和测定[详细]

  2024-09-18 04:37

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• Isolation of Mitochondria from Cell Cultures by PCT for Proteomic Analysis 压力循环技术(PCT)分离细胞线粒体在蛋白质组学分析研究中的应用

  Isolation of Mitochondria from Cell Cultures by PCT for Proteomic Analysis 压力循环技术(PCT)分离细胞线粒体在蛋白质组学分析研究中的应用[详细]

  2009-10-15 00:00

  应用文章

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• 新型波动的产生

  新型波动的产生[详细]

  2011-02-26 00:00

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• GB 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机（恒速驱动）技术规范

  GB 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机（恒速驱动）技术规范[详细]

  2011-06-10 00:00

  操作手册

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• GB_T 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机（恒速驱动） 技术规范

  本标准规定了在恒定的驱动速度下工作的适用于橡胶、塑料和粘接材料试验用的拉伸试验系统的技术要求。本标准也适用于弯曲、剪切和压缩试验系统。 任一试验系统仅可适用于材料的某个有限的范围。[详细]

  2024-09-13 10:47

  标准

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• 筛查鉴定和定量分析潜在的遗传毒性化合物

  筛查鉴定和定量分析潜在的遗传毒性化合物[详细]

  2024-09-17 19:14

  实验操作

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• 线粒体医学的Zxin研究进展

  线粒体医学的Zxin研究进展[详细]

  2024-09-11 18:00

  操作手册

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• GBT 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机(恒速驱动)技术规范.pdf

  GBT 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机(恒速驱动)技术规范.pdf[详细]

  2015-04-01 00:00

  报价单

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• GBT 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机(恒速驱动)技术规范.pdf

  GBT 17200-2008 橡胶塑料拉力、压力和弯曲试验机(恒速驱动)技术规范.pdf[详细]

  2015-04-23 00:00

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