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动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书
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本文由 上海科学仪器有限公司 整理汇编
2018-11-18 10:00 428阅读次数
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动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织(肝或脑组织)和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高,活性保证,可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用:**,通过机械或化学方法破裂细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器;第三,通过高速差速离心获得线粒体;甚至,第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升净化液(ReagentC)毫升强化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升活性液(ReagentF)微升产品说明书1份保存方式保存净化液(ReagentC)和活性液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液(12028)或PBS缓冲溶液(12033):用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于细胞脱离完全细胞培养液(12052):用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管:用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管:用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管:用于保存线粒体4℃台式离心机:用于沉淀细胞4℃超速离心机:用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离(组织匀浆法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和4毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量(注意:实验前**使动物空腹12至24小时)2.(选择步骤)放进预冷的50毫升锥形离心管3.(选择步骤)加入适量的(1克组织需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.即刻用刀片切碎组织5.放进一个预冷的15毫升锥形离心管6.加入预冷的xx毫升裂解工作液7.涡旋震荡5秒,充分混匀8.即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)(注意:参见注意事项8)9.将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管,10.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g11.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g13.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)15.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g16.(选择步骤)小心抽去上清液17.加xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀18.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离(化学处理法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量(注意:实验前**使动物空腹12至24小时)2.(选择步骤)放进预冷的50毫升锥形离心管3.(选择步骤)加入适量的(1克组织需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.移入一个液氮冻存管5.即刻放进液氮罐过夜6.次日从液氮罐里取出,即刻(Z快速度)碾碎组织(注意:切莫使组织冻融)7.放进一个15毫升锥形离心管8.加入预冷的xx毫升裂解工作液9.涡旋震荡5秒,充分混匀10.在冰槽里孵育2分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11.加入预冷的xx微升强化液(ReagentD)12.涡旋震荡5秒,充分混匀13.在冰槽里孵育5分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒(注意:参见注意事项9)14.加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混匀15.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g16.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g18.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)20.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g21.(选择步骤)小心抽去上清液22.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀23.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离(细胞匀浆法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞(5X107),直至细胞生长铺满整个培养表面2.分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面,3.小心抽去清洗液4.重复实验步骤2至3一次5.加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面6.放进37℃培养箱孵育3分种7.手击震动培养瓶,使细胞脱落8.分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9.全部移入到一个50毫升锥形离心管10.放进台式离心机离心10分钟,速度为200g11.小心抽去上清液12.加入xx毫升预冷的清理液(ReagentA),混匀细胞13.放进台式离心机离心10分钟,速度为300g14.小心抽去上清液15.加入预冷的xx毫升裂解工作液16.涡旋震荡5秒,充分混匀细胞颗粒群17.即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用研磨棒匀化细胞(约80下)(注意:参见注意事项8)18.将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g20.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g22.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)24.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g25.(选择步骤)小心抽去上清液26.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀27.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离(化学处理法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞(5X107),直至细胞生长铺满整个培养表面2.分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面28.小心抽去清洗液3.重复实验步骤2至3一次4.加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面5.放进37℃培养箱孵育3分种6.手击震动培养瓶,使细胞脱落7.分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8.全部移入到一个50毫升锥形离心管9.放进台式离心机离心10分钟,速度为200g10.小心抽去上清液11.加入xx毫升预冷的清理液(ReagentA)12.放进台式离心机离心10分钟,速度为300g13.小心抽去上清液14.加入预冷的xx毫升裂解工作液15.涡旋震荡5秒,充分混匀16.在冰槽里孵育2分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17.加入预冷的xx微升强化液(ReagentD)18.涡旋震荡5秒,充分混匀19.在冰槽里孵育5分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒(注意:参见注意事项9)20.加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混匀21.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g22.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g24.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)26.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g27.(选择步骤)小心抽去上清液28.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀29.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里注意事项1.本产品为10次(1克动物组织或5X107细胞)或50次(200毫克动物组织或1X107细胞)操作2.实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整:例如200毫克动物组织:试剂用量是标准用量的五分之一3.所有操作均须在4℃或以下状态进行4.操作时,须戴手套5.操作时,须无菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(ReagentB)和保存液(ReagentE)6.建议使用足够的样品量7.建议严格控制操作时间8.通常匀化次数为80下达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加匀化次数9.通常孵育5分钟达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10.对于难以裂解的细胞,例如HeLa细胞,采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11.通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12.如果需要计量线粒体,稀释后数分钟内完成,否则线粒体将分解13.本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g,可以提高粗提的线粒体纯化程度,但线粒体产量相应减少14.如果需要获得99%以上纯度的线粒体,使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒-10006.315.线粒体正常活性测定方法是:CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16.线粒体内外膜完整测定方法是:CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17.本公司提供线粒体套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18.本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能长期稳定2.本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3.本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4.本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
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动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书
- 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织(肝或脑组织)和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高,活性保证,可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用:**,通过机械或化学方法破裂细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器;第三,通过高速差速离心获得线粒体;甚至,第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升净化液(ReagentC)毫升强化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升活性液(ReagentF)微升产品说明书1份保存方式保存净化液(ReagentC)和活性液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液(12028)或PBS缓冲溶液(12033):用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于细胞脱离完全细胞培养液(12052):用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管:用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管:用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管:用于保存线粒体4℃台式离心机:用于沉淀细胞4℃超速离心机:用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离(组织匀浆法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和4毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量(注意:实验前**使动物空腹12至24小时)2.(选择步骤)放进预冷的50毫升锥形离心管3.(选择步骤)加入适量的(1克组织需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.即刻用刀片切碎组织5.放进一个预冷的15毫升锥形离心管6.加入预冷的xx毫升裂解工作液7.涡旋震荡5秒,充分混匀8.即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)(注意:参见注意事项8)9.将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管,10.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g11.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g13.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)15.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g16.(选择步骤)小心抽去上清液17.加xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀18.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离(化学处理法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量(注意:实验前**使动物空腹12至24小时)2.(选择步骤)放进预冷的50毫升锥形离心管3.(选择步骤)加入适量的(1克组织需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.移入一个液氮冻存管5.即刻放进液氮罐过夜6.次日从液氮罐里取出,即刻(Z快速度)碾碎组织(注意:切莫使组织冻融)7.放进一个15毫升锥形离心管8.加入预冷的xx毫升裂解工作液9.涡旋震荡5秒,充分混匀10.在冰槽里孵育2分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11.加入预冷的xx微升强化液(ReagentD)12.涡旋震荡5秒,充分混匀13.在冰槽里孵育5分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒(注意:参见注意事项9)14.加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混匀15.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g16.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g18.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)20.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g21.(选择步骤)小心抽去上清液22.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀23.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离(细胞匀浆法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞(5X107),直至细胞生长铺满整个培养表面2.分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面,3.小心抽去清洗液4.重复实验步骤2至3一次5.加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面6.放进37℃培养箱孵育3分种7.手击震动培养瓶,使细胞脱落8.分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9.全部移入到一个50毫升锥形离心管10.放进台式离心机离心10分钟,速度为200g11.小心抽去上清液12.加入xx毫升预冷的清理液(ReagentA),混匀细胞13.放进台式离心机离心10分钟,速度为300g14.小心抽去上清液15.加入预冷的xx毫升裂解工作液16.涡旋震荡5秒,充分混匀细胞颗粒群17.即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用研磨棒匀化细胞(约80下)(注意:参见注意事项8)18.将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g20.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g22.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)24.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g25.(选择步骤)小心抽去上清液26.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀27.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离(化学处理法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(ReagentF)冻融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升净化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为裂解工作液,放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1.准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞(5X107),直至细胞生长铺满整个培养表面2.分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面28.小心抽去清洗液3.重复实验步骤2至3一次4.加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面5.放进37℃培养箱孵育3分种6.手击震动培养瓶,使细胞脱落7.分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8.全部移入到一个50毫升锥形离心管9.放进台式离心机离心10分钟,速度为200g10.小心抽去上清液11.加入xx毫升预冷的清理液(ReagentA)12.放进台式离心机离心10分钟,速度为300g13.小心抽去上清液14.加入预冷的xx毫升裂解工作液15.涡旋震荡5秒,充分混匀16.在冰槽里孵育2分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17.加入预冷的xx微升强化液(ReagentD)18.涡旋震荡5秒,充分混匀19.在冰槽里孵育5分钟,其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒(注意:参见注意事项9)20.加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混匀21.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1500g22.小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23.放进4℃超速离心机离心10分钟,速度为10000g24.小心抽去上清液,保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25.(选择步骤)加入预冷的xx毫升保存液(ReagentE)26.(选择步骤)放进4℃超速离心机再次离心5分钟,速度为10000g27.(选择步骤)小心抽去上清液28.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混匀29.即刻移入1.5毫升离心管,放进-70℃冰箱里注意事项1.本产品为10次(1克动物组织或5X107细胞)或50次(200毫克动物组织或1X107细胞)操作2.实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整:例如200毫克动物组织:试剂用量是标准用量的五分之一3.所有操作均须在4℃或以下状态进行4.操作时,须戴手套5.操作时,须无菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(ReagentB)和保存液(ReagentE)6.建议使用足够的样品量7.建议严格控制操作时间8.通常匀化次数为80下达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加匀化次数9.通常孵育5分钟达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10.对于难以裂解的细胞,例如HeLa细胞,采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11.通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12.如果需要计量线粒体,稀释后数分钟内完成,否则线粒体将分解13.本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g,可以提高粗提的线粒体纯化程度,但线粒体产量相应减少14.如果需要获得99%以上纯度的线粒体,使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒-10006.315.线粒体正常活性测定方法是:CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16.线粒体内外膜完整测定方法是:CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17.本公司提供线粒体套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18.本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能长期稳定2.本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3.本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4.本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]
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2018-11-18 10:00
产品样册
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动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-05-19 00:00
操作手册
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动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书
- 主要用途Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G-250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化,通过比色测定其Zda吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质(动物、人体、植物、微生物等)的含量检测。产品即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感,定量极ng确。技术背景考马斯亮蓝染料G-250(CoomassieBrilliantBlueG-250)是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲烷(triphenylmethane)基团,主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐(anionsulfonate)基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸,尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下,其Zda吸收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的Zda优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之Lowry,Hartree-Lowry和BCA技术,更为敏感。[详细]
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2018-11-18 10:00
产品样册
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动物细胞高纯内质网分离试剂盒产品说明书
- 主要用途动物细胞高纯内质网分离试剂是一种旨在通过机械或化学处理、差速和等密度离心方法,从动物细胞中分离出活性完整而高度纯化的内质网细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其制备物产量高,活性保证,纯度可达99%。适合于各种动物原代和培养细胞(人体、老鼠、兔子等)内质网的制备。可以被用于细胞色素P450系统外源化合物(xenobiotics)代谢、脂类代谢、内质网膜蛋白和腔内蛋白等研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量高。技术背景内质网(endoplasmicreticulum;ER)是真核生物的细胞器组分,构成细胞内小管(tubules)、囊泡(vesicles)和小池(cisternae/sac)相互连接的网络结构,负责蛋白转译、折叠和转运成为细胞膜成分(例如跨膜受体和其它整合膜蛋白等)或分泌型蛋白(例如消化性酶),负责钙离子区隔(sequestration),以及糖原、固醇类和其它大分子的生产和储存等功能。内质网分成三种:粗面内质网(Roughendoplasmicreticulum;RER)、滑面内质网(Smoothendoplasmicreticulum;SER)和肌质网(sarcoplasmicreticulum;SR)。根据细胞代谢的需要,粗面内质网和滑面内质网会互相转换。粗面内质网通过核糖体合成蛋白质并分类;滑面内质网进行固醇、碳水化合物和药物代谢等。肌质网的主要功能为储存和释放钙离子。内质网的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一:**,通过机械或化学方法破裂组织细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器;第三,通过高速差速离心获得内质网;甚至,第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的内质网。[详细]
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2018-11-18 10:00
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动物细胞高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物细胞高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-03-30 00:00
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动物细胞高纯内质网分离试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物细胞高纯内质网分离试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-03-30 00:00
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动物细胞高纯高尔基体分离试剂盒
- 主要用途动物细胞高纯高尔基体分离试剂是一种旨在通过机械或化学处理、差速和等密度离心方法,从动物细胞中分离出活性完整而高度纯化的高尔基细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其制备物产量高,活性保证,纯度可达99%。适合于各种动物细胞,包括人体细胞等的高尔基体的制备。可以被用于受体循环、糖蛋白和脂蛋白合成,以及抗体释放机制等研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量高。技术背景高尔基体(Golgiapparatus或Golgibodies),又称为高尔基复合体(Golgicomplex),是一种细胞器,存在于大多数真核生物细胞中。高尔基体由扁平膜结合的高尔基堆(stacks),即小池(cisternae)组成,约有4至8层,分成3个功能区:顺面、中层、反面等,进一步地构成细胞膜、分泌泡、内涵体等。高尔基体整合各种大分子进行加工、分类和包装,然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。高尔基体参与糖蛋白质的糖基化、碳水化合物的合成、蛋白质的分泌、膜转化、溶酶体形成的细胞活动。高尔基体的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一:**,通过机械或化学方法破裂组织细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器;第三,通过高速差速离心获得高尔基体;甚至,第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的高尔基体。[详细]
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2018-11-18 10:00
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植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书(中文版)
- 植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-01-14 00:00
应用文章
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组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书
- 组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书主要用途组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Rhod-2,与钙离子结合后,其荧光强度显著增强,在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化,来测定组织线粒体中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织(动物、人体等)内线粒体钙离子的浓度检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感。技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质,占1150克。其中99%的钙以氟磷灰石钙(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式:一种是非弥散型蛋白结合钙,其构成约40%至50%的血清中的总钙含量;另一种为弥散型游离钙,其进一步分成具有活性的复合钙(complexedcalcium)和离子钙(ionizedcalcium)。钙对神经肌肉兴奋性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内,钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中线粒体钙离子在调节线粒体代谢、保持线粒体的ATP产量达到细胞需求,维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。线粒体钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技术,但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰,或者受限于仪器的特殊的要求,以及需要线粒体纯化。Rhod-2,罗丹明123(rhodamine123)的衍生产物,一种与钙离子结合产生荧光,同时其正电荷特性,特异性地聚集在线粒体里,由此用于测定线粒体内钙离子水平。在荧光分光光度仪下,激发波长550nm,散发波长590nm,来定量测定线粒体的钙浓度。产品内容清理液(ReagentA)40毫升染色液(ReagentB)30微升介导液(ReagentC)600微升饱和液(ReagentD)2毫升阴性液(ReagentE)2毫升产品说明书1份保存方式保存染色液(ReagentB)和介导液(ReagentC)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器细胞培养箱:用于染色孵育黑色96孔板:用于样品操作的容器荧光酶标仪:用于荧光分析实验步骤测定准备设定好荧光酶标仪(22℃):激发波长550nm,散发波长590nm准备好纯化的线粒体样品,置于冰槽里融化测定开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(ReagentB)室温下融化,然后分别移出30微升介导液(ReagentC)和1.5微升染色液(ReagentB)到新的1.5毫升离心管,标记为染色工作液,并放在暗室里备用。然后进行下列操作。二、荧光酶标仪检测准备1个黑色96孔板,标记为:线粒体样品孔、空白对照孔(不含线粒体)、Zda对照孔(不含线粒体)移取100微升纯化线粒体样品(100微克)到线粒体样品孔里加入100微升饱和液(ReagentD)到Zda对照孔里加入100微升阴性液(ReagentE)到空白对照孔里分别加入10微升染色工作液到所有孔里轻轻摇动黑色96孔板,混匀室温下(22℃),孵育30分钟,避免光照放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟,避免光照即刻放进荧光酶标仪测读:获得相对荧光单位(relativefluorescenceunit;RFU)计算样品线粒体钙离子浓度【(样品RFU-空白对照孔RFU)÷(Zda对照孔RFU-样品RFU)】X570(纳摩尔;解离常数)=纳摩尔/100微克线粒体注意事项本产品为20次操作操作时,须戴手套避免使用EDTA等处理样品孵育反应完成后即刻进行荧光测定如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围可以使用荧光分光光度仪检测本公司提供系列钙生化检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]
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2018-11-19 10:00
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冰冻切片组织碱性磷酸酶活性染色试剂盒产品说明书
- 主要用途冰冻切片组织碱性磷酸酶活性染色试剂是一种旨在使用偶联偶氮技术,在底物存在的情况下,分析组织样本中碱性磷酸酶表达,而呈现亮红色沉淀现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于动物组织冰冻切片,同时也适合原生代或培养细胞的酶活性检测。尤其可用于骨组织病理生理的研究和干细胞分化能力的鉴定。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,灵敏牢固,显色清晰。技术背景碱性磷酸酶(ALKALINEPHOSPHATASE)在碱性环境下催化各种醇和酚的磷酸酯水解,存在于活跃运输的膜上,如毛细血管及毛细血管的动脉部分的内皮,肾近曲小管壁边缘和小肠上皮的纹状缘,胎盘组织,未分化的干细胞等表达含量Z为丰富。它与骨质的形成,维持细胞内磷酸酶的浓度,以及与经膜吸收和转运过程有关。偶联偶氮技术的基本原理为碱性磷酸酶水解底物(磷酸萘酯)释放出萘酚,立即为重氮盐所捕获而成为不溶性有色的偶氮染料。实验Z初(1944)应用β-萘磷酸盐作为底物,释放出的萘酚与重氮α-萘胺偶联,在酶的活动处形成有色沉淀。Burstone(1962)推荐使用替代萘酚,如萘酚AS-MX磷酸盐。重氮盐有很多种,但较适宜的有FastblueRR,FastredTR,FastvioletB,FastblueVRT和FastblackB。偶联偶氮技术孵育时间短;稳定,灵敏;在正常组织中因无萘酚,故不需要对照;反应产物为偶氮染料难以溶解,不易弥散因而图象清晰。[详细]
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2018-11-18 10:00
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动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书
- 动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书[详细]
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2024-09-11 17:46
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真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书
- 真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书[详细]
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2015-05-04 00:00
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活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书(中文版)
- 主要用途活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒体,并呈现红色,用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体(动物、人体、昆虫等)的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌,即到即用,活体检测,分辨率高,操作简捷,性能稳定,滞留持久。技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器,其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中,如动物的心肌,肝,肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取,或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针MitoTrackerRED,是一种含有硫醇(Thiol)氯甲基基团的荧光染料,自由通过细胞膜,选择性地聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色,在580nm波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线粒体。并可以分析线粒体膜电位,以检测线粒体活性。[详细]
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2018-11-18 10:00
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动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书(中文版)
- 主要用途动物硬组织线粒体粗提分离试剂是一种旨在从动物硬组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物硬组织(心脏或肌肉)的线粒体的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用:**,通过机械或化学方法破裂细胞;第二,通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器;第三,通过高速差速离心获得线粒体;甚至,第四,可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升净化液(ReagentC)毫升强化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升酶解液(ReagentF)毫升产品说明书1份保存方式保存净化液(ReagentC)和酶解液(ReagentF)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保证12月用户自备15毫升锥形离心管:用于线粒体初步制备操作的容器1.5毫升离心管:用于保存线粒体的容器4℃台式离心机:用于沉淀细胞4℃超速离心机:用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞[详细]
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2018-11-18 10:00
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动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-09-11 00:00
标准
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动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-08-26 00:00
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动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
- 动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2014-12-19 00:00
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组织谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书
- 主要用途组织谷氨酰胺酶(glutaminase)活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶的酶偶联反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原后吸光峰值的,即采用光度法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品(动物、人体、昆虫等)谷氨酰胺酶的活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一种氨基酸水解酶(amidohydrolase),将谷氨酰胺脱氨基(deaminating)转化为谷氨酸。其同工酶具有组织特异性:其功能在肝细胞中产生的氨,用于合成尿素;在肾小管上皮细胞中产生的氨通过氨离子分泌,调节肾的酸碱平衡;同时在胶质细胞(glialcell)和肠细胞中也有表达。谷氨酰胺酶在药物和食品工业方面应用广泛,例如调味品的生产和白血病ZL的药物等。基于底物谷氨酰胺在谷氨酰胺酶酶的作用下,转化为谷氨酸和氨气,进而在谷氨酸脱氢酶的催化下,伴随着氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD+)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH),产生的吸光峰值的变化(340nm波长),来定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶联反应系统为:[详细]
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2018-11-18 10:00
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细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书
- 细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书[详细]
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2015-08-25 00:00
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细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书
- 细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书[详细]
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2014-12-31 00:00
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