动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）

本文由 上海哈灵生物科技有限公司 整理汇编

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• 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）

  动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  操作手册

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• 动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）

  主要用途动物硬组织线粒体粗提分离试剂是一种旨在从动物硬组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物硬组织（心脏或肌肉）的线粒体的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升酶解液（ReagentF）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和酶解液（ReagentF）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备操作的容器1.5毫升离心管：用于保存线粒体的容器4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞[详细]

  2018-11-18 10:00

  产品样册

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• 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书

  动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升活性液（ReagentF）微升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentF）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管：用于保存线粒体4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和4毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g11．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g13．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）15．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g16．（选择步骤）小心抽去上清液17．加xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀18．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．移入一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx毫升裂解工作液9．涡旋震荡5秒，充分混匀10．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）12．涡旋震荡5秒，充分混匀13．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）14．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀15．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g16．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）20．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g21．（选择步骤）小心抽去上清液22．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀23．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离（细胞匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，3．小心抽去清洗液4．重复实验步骤2至3一次5．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．放进37℃培养箱孵育3分种7．手击震动培养瓶，使细胞脱落8．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9．全部移入到一个50毫升锥形离心管10．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g11．小心抽去上清液12．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞13．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g14．小心抽去上清液15．加入预冷的xx毫升裂解工作液16．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群17．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）（注意：参见注意事项8）18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面28．小心抽去清洗液3．重复实验步骤2至3一次4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面5．放进37℃培养箱孵育3分种6．手击震动培养瓶，使细胞脱落7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8．全部移入到一个50毫升锥形离心管9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g10．小心抽去上清液11．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA）12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）18．涡旋震荡5秒，充分混匀19．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）20．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g22．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）26．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g27．（选择步骤）小心抽去上清液28．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀29．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里注意事项1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）或50次（200毫克动物组织或1X107细胞）操作2．实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一3．所有操作均须在4℃或以下状态进行4．操作时，须戴手套5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）6．建议使用足够的样品量7．建议严格控制操作时间8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数9．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11．通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解13．本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g，可以提高粗提的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少14．如果需要获得99％以上纯度的线粒体，使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒－10006.315．线粒体正常活性测定方法是：CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17．本公司提供线粒体套餐：ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18．本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3．本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）

  植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-14 00:00

  应用文章

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• 活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）

  主要用途活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、昆虫等）的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针MitoTrackerRED，是一种含有硫醇（Thiol）氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色，在580nm波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：产品内容清理液（ReagentA）XX毫升裂解液（ReagentB）XX毫升缓冲液（ReagentC）XX毫升反应液（ReagentD）XX毫升底物液（ReagentE）XX毫升阴性液（ReagentF）XX微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentD）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（ReagentE），避免光照；有效保证3月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器4℃（微型）台式离心机：用于样品处理DOUNCE匀浆器：用于裂解组织恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育比色皿：用于比色测定的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentE）注意避光。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入XX毫升清理液（ReagentA）清洗（选择步骤）抽去清洗液移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）放进一个15毫升锥形离心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液（ReagentB），混匀颗粒群移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备准备好待测样品，置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentC）在室温下均衡温度背景对照测定移取XX微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入XX微升反应液（ReagentD）加入XX微升底物液（ReagentE）放进25℃培养箱里静置3分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书

  动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2024-09-17 19:14

  专利

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• 纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2024-09-28 00:04

  课件

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• 线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  课件

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• 线粒体呼吸链复合物V活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  MB50083v.A线粒体呼吸链复合物V活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物V（F0F1-ATP酶/ATP合成酶）活性光度法定量检测试剂是一种旨在使用丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定与ATP合成对应的ATP水解产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的F0F1-ATP酶/ATP合成酶的特异性活性检测。可用于心肌、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATPsynthase）、F型ATP酶（FtypeATPase）和F1F0ATP酶（F1F0ATPase），是线粒体氧化磷酸化的反应。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP（oligomycinsensitiveconferringprotein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其Z特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于产生大部分细胞所需的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时，呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质，激活F1催化活性结构域，促使ATP合成。该酶异常会导致心肌和神经系统疾病。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1F0ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvatekinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F1F0ATP酶活性。其反应系统为：F1F0ATPaseATP=ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+（高吸收峰）（低吸收峰）产品内容缓冲液（ReagentA）20毫升反应液（ReagentB）2.5毫升阴性液（ReagentC）2毫升底物液（ReagentD）500微升专性液（ReagentE）250微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentB），避免光照，有效保证6月用户自备比色皿：用于光度分析的容器分光光度仪：用于光度分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（ReagentB）注意避光。然后进行下列操作。测定准备准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为340nm，间隔30秒，读数11次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentA）室温下均衡温度背景对照测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入100微升阴性液（ReagentC）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟样品总活性测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟样品非特异活性测定实验开始前，移取100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）到1.5毫升离心管，加入20微升专性液（ReagentE），混匀后，放进30℃培养箱里孵育15分钟。然后置于冰槽里备用移取760微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入120微升上述预处理的待测样品上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟计算样品活性1）样品活性（总活性和非特异活性）【（样品读数－背景读数）X1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X6.22（毫摩尔吸光系数X1或5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔NADH/分钟2）样品特异活性样品总活性－样品非特异活性＝样品特异活性[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-CoenzymeQReductase；SuccinateDehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavinadeninedinucleotide；FAD）和三个铁硫ZX（Fe-Sclusters），以及细胞色素b亚单位，其Z特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：ComplexIISUCCINATE+DCPIP+CoQ→FUMARATE+DCPIPH2+CoQH2蓝色无色↑Abs600nm↓Abs600nm产品内容缓冲液（ReagentA）20毫升反应液（ReagentB）2.5毫升阴性液（ReagentC）2毫升底物液（ReagentD）500微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD），避免光照，有效保证6月用户自备比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（ReagentA）室温预热；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD）注意避光。然后进行下列操作。测定准备准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零背景对照测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升阴性液（ReagentC）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟样品活性测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟计算样品活性【（样品读数－背景读数）X1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X21.8（毫摩尔吸光系数X1或5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔二氯酚靛酚/分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）

  全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-06-11 00:00

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• 动物全血线粒体粗提分离试 剂盒产品说明书

  主要用途动物全血线粒体粗提分离试剂是一种旨在通过化学溶解以纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物血细胞中的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的Z重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2016-03-15 00:00

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• 动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

  动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书主要用途动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在通过低速差速离心和化学渗压休克处理纯化血小板、以及物理或化学破膜和高速差速离心的方法，直接从动物血细胞中分离出完整而纯化的血小板线粒体细胞器，并在蛋白酶YZ混合剂的帮助下，使已纯化的线粒体膜结构破裂而获得线粒体内活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于人体和各种动物全血（鼠、猪、羊等）中血小板线粒体可溶性总蛋白的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和营养学等的研究。可直接用于特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富的细胞色素氧化酶系统和细胞凋亡相关蛋白等。通过机械或化学方法破裂细胞，进而差速离心获得线粒体，然后通过特殊裂解液和蛋白酶YZ混合剂防止裂解后线粒体内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留线粒体内蛋白质的免疫和生物学活性，Z后进行相关蛋白的独立分析。产品内容清理液（ReagentA）500毫升裂解液（ReagentB）80毫升净化液（ReagentC）20毫升强化液（ReagentD）10毫升保存液（ReagentE）200毫升破膜液（ReagentF）2毫升活性液（ReagentG）20微升上样液（ReagentH）3毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentG）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于样品保存的容器4℃台式离心机：用于样品操作4℃超速离心机：用于样品操作DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞超声仪：用于裂解细胞实验步骤物理处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板加入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆帮匀化细胞（约10下）（注意：参见注意事项11）将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管（选择步骤）置于超声仪枪头下，离心管在冰槽里（选择步骤）超声功率为60％（或150赫兹）猝击10秒，间隙30秒，10个循环放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳1）移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管2）加入20微升上样液（ReagentH）3）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交化学处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）（选择步骤）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g（选择步骤）小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液(ReagentA)，混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次加入500微升预冷的强化液（ReagentD）涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项12）加入5毫升预冷的保存液（ReagentE），轻轻摇动试管混匀放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管加入20微升上样液（ReagentH）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交注意事项本产品为20次（10至20毫升全血）操作其它实际操作的全血容量与试剂使用量按比例调整：例如40毫升全血，试剂用量加倍操作时，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）操作时，须戴手套建议使用新鲜全血：2小时内的全血为理想状态，不要超过24小时全血样品采集须使用全血样品采集须使用EDTA二钾血液抗凝液（12059.1）、ACD血液抗凝液（12059.4），或肝素钠血液抗凝液（12059.5）建议使用足够的样品量血小板提取量因人而异；如果不足，建议增加全血量线粒体操作均须在4℃或以下状态下进行建议严格控制操作时间通常匀化次数为10下（或细胞颗粒群消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数物理处理法是优先推荐的技术处理通常每毫升全血平均可获得2X108血小板通常10毫升全血的血小板线粒体含量为10至25微克线粒体蛋白16．如果需检测不可溶性线粒体蛋白，可保留线粒体裂解后的沉淀物，直接加入10微升上样液（ReagentH）和10微升无离子水，然后继续操作二的步骤3至6本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定无蛋白酶污染本产品经鉴定蛋白萃取产量高本产品经鉴定纯化程度高[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书

  真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书[详细]

  2015-05-04 00:00

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• 活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

  主要用途活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景心磷脂（Cardiolipin）是线粒体膜上的主要成分之一。它对细胞氧化特别敏感。线粒体脂类分解，致使心磷脂显著减少，Z终造成线粒体的严重损害。Nonyl-AcrydineOrange（NAO）是一种可自由通过细胞膜的染色剂，特异性地染色线粒体上的心磷脂，并发出荧光。一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化，其荧光显著减弱。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书（中文版）

  溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-03-30 00:00

  期刊论文

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• 人体血小板高纯分离试剂盒产品说明书（中文版）

  人体血小板高纯分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2016-03-17 00:00

  应用文章

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• 动物细胞高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书（中文版）

  动物细胞高纯高尔基体分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-03-30 00:00

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