动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书

本文由 上海一基实业有限公司 整理汇编

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• 动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书

  动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2024-09-17 19:14

  专利

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• 线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性YZ剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reducednicotinamideadeninedinucleotidecoenzymeQreductase；NADH-CoQreductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reducednicotinamideadeninedinucleotidedehydrogenase；NADHdehydrogenase），是线粒体电子传递链中Zda的结构成分：含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:QReductase）。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的**步。基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm波长），由此定量测定NADH－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性YZ剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reducednicotinamideadeninedinucleotidecoenzymeQreductase；NADH-CoQreductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reducednicotinamideadeninedinucleotidedehydrogenase；NADHdehydrogenase），是线粒体电子传递链中Zda的结构成分：含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:QReductase）。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的**步。基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm波长），由此定量测定NADH－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  课件

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• 线粒体呼吸链复合物 II 活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书免费下载，下载后方可查看！！[详细]

  2018-10-01 10:01

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• 线粒体呼吸链复合物V活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  MB50083v.A线粒体呼吸链复合物V活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物V（F0F1-ATP酶/ATP合成酶）活性光度法定量检测试剂是一种旨在使用丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定与ATP合成对应的ATP水解产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的F0F1-ATP酶/ATP合成酶的特异性活性检测。可用于心肌、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATPsynthase）、F型ATP酶（FtypeATPase）和F1F0ATP酶（F1F0ATPase），是线粒体氧化磷酸化的反应。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP（oligomycinsensitiveconferringprotein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其Z特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于产生大部分细胞所需的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时，呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质，激活F1催化活性结构域，促使ATP合成。该酶异常会导致心肌和神经系统疾病。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1F0ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvatekinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F1F0ATP酶活性。其反应系统为：F1F0ATPaseATP=ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+（高吸收峰）（低吸收峰）产品内容缓冲液（ReagentA）20毫升反应液（ReagentB）2.5毫升阴性液（ReagentC）2毫升底物液（ReagentD）500微升专性液（ReagentE）250微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentB），避免光照，有效保证6月用户自备比色皿：用于光度分析的容器分光光度仪：用于光度分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（ReagentB）注意避光。然后进行下列操作。测定准备准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为340nm，间隔30秒，读数11次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentA）室温下均衡温度背景对照测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入100微升阴性液（ReagentC）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟样品总活性测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟样品非特异活性测定实验开始前，移取100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）到1.5毫升离心管，加入20微升专性液（ReagentE），混匀后，放进30℃培养箱里孵育15分钟。然后置于冰槽里备用移取760微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）放进30℃培养箱里孵育3分钟加入120微升上述预处理的待测样品上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：340波长读数0分钟－340波长读数1分钟或5分钟计算样品活性1）样品活性（总活性和非特异活性）【（样品读数－背景读数）X1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X6.22（毫摩尔吸光系数X1或5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔NADH/分钟2）样品特异活性样品总活性－样品非特异活性＝样品特异活性[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-CoenzymeQReductase；SuccinateDehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavinadeninedinucleotide；FAD）和三个铁硫ZX（Fe-Sclusters），以及细胞色素b亚单位，其Z特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：ComplexIISUCCINATE+DCPIP+CoQ→FUMARATE+DCPIPH2+CoQH2蓝色无色↑Abs600nm↓Abs600nm产品内容缓冲液（ReagentA）20毫升反应液（ReagentB）2.5毫升阴性液（ReagentC）2毫升底物液（ReagentD）500微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD），避免光照，有效保证6月用户自备比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（ReagentA）室温预热；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD）注意避光。然后进行下列操作。测定准备准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零背景对照测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升阴性液（ReagentC）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟样品活性测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟计算样品活性【（样品读数－背景读数）X1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X21.8（毫摩尔吸光系数X1或5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔二氯酚靛酚/分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• CK-E植物线粒体呼吸链复合物IV（MRCC-IV）说明书

  CK-E植物线粒体呼吸链复合物IV(MRCC-IV)说明书[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 兔子线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸-辅酶Q还原酶）试剂盒使用说明书

  兔子线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸-辅酶Q还原酶）试剂盒使用说明书[详细]

  2014-09-01 00:00

  选购指南

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• 纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographicsystem）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolvedoxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的ZX。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。呼吸控制率（respiratorycontrolratio或respiratorycontrolindex；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP合成功能损伤，呼吸障碍；RCR意味着细胞活动旺盛，代谢加快。产品内容介质液（ReagentA）毫升态底物液（ReagentB）微升态底物液（ReagentC）微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。1．加入xx毫升介质液（ReagentA）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）

  动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  操作手册

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• 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：产品内容清理液（ReagentA）XX毫升裂解液（ReagentB）XX毫升缓冲液（ReagentC）XX毫升反应液（ReagentD）XX毫升底物液（ReagentE）XX毫升阴性液（ReagentF）XX微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentD）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（ReagentE），避免光照；有效保证3月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器4℃（微型）台式离心机：用于样品处理DOUNCE匀浆器：用于裂解组织恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育比色皿：用于比色测定的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentE）注意避光。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入XX毫升清理液（ReagentA）清洗（选择步骤）抽去清洗液移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）放进一个15毫升锥形离心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液（ReagentB），混匀颗粒群移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备准备好待测样品，置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentC）在室温下均衡温度背景对照测定移取XX微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入XX微升反应液（ReagentD）加入XX微升底物液（ReagentE）放进25℃培养箱里静置3分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

  产品样册

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• 兔子线粒体呼吸链复合物IV（正铁细胞色素C-氧化还原酶）elisa试剂盒使用说明书

  兔子线粒体呼吸链复合物IV（正铁细胞色素C-氧化还原酶）elisa试剂盒使用说明书[详细]

  2014-02-14 00:00

  应用文章

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• 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书

  呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书[详细]

  2015-04-29 00:00

  安装说明

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• 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒

  呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒[详细]

  2015-04-29 00:00

  产品样册

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• 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒

  主要用途呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在线粒体氧化条件下，选择性阻止膜电位，所产生的荧光，来定量检测线粒体内膜电位依赖性活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体功能、氧化激发和YZ机理等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluoresceindiacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。三氟甲氧基苯腙羧基氰化物（carbonylcyanide4－rifluoromethoxyhenylhydrazone；FCCP）使线粒体膜化学离子梯度消失。[详细]

  2018-11-18 10:00

  产品样册

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• 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书

  动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升活性液（ReagentF）微升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentF）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管：用于保存线粒体4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和4毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g11．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g13．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）15．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g16．（选择步骤）小心抽去上清液17．加xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀18．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．移入一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx毫升裂解工作液9．涡旋震荡5秒，充分混匀10．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）12．涡旋震荡5秒，充分混匀13．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）14．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀15．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g16．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）20．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g21．（选择步骤）小心抽去上清液22．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀23．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离（细胞匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，3．小心抽去清洗液4．重复实验步骤2至3一次5．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．放进37℃培养箱孵育3分种7．手击震动培养瓶，使细胞脱落8．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9．全部移入到一个50毫升锥形离心管10．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g11．小心抽去上清液12．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞13．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g14．小心抽去上清液15．加入预冷的xx毫升裂解工作液16．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群17．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）（注意：参见注意事项8）18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面28．小心抽去清洗液3．重复实验步骤2至3一次4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面5．放进37℃培养箱孵育3分种6．手击震动培养瓶，使细胞脱落7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8．全部移入到一个50毫升锥形离心管9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g10．小心抽去上清液11．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA）12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）18．涡旋震荡5秒，充分混匀19．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）20．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g22．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）26．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g27．（选择步骤）小心抽去上清液28．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀29．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里注意事项1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）或50次（200毫克动物组织或1X107细胞）操作2．实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一3．所有操作均须在4℃或以下状态进行4．操作时，须戴手套5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）6．建议使用足够的样品量7．建议严格控制操作时间8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数9．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11．通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解13．本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g，可以提高粗提的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少14．如果需要获得99％以上纯度的线粒体，使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒－10006.315．线粒体正常活性测定方法是：CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17．本公司提供线粒体套餐：ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18．本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3．本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]

  2018-11-18 10:00

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• Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。产品内容缓冲液（ReagentA）6毫升反应液（ReagentB）6毫升底物液（ReagentC）6毫升阴性液（ReagentD）6毫升标准品（reagentE）6微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底物液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器微型台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析酶标仪：用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）置入冰槽里融化。底物液（ReagentC）避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一：血浆样品1．准备好ACD抗凝管（注意：避免使用肝素或EDTA抗凝管）2．抽取2毫升血液，置于抗凝管里3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择二：血清样品1．准备好不含抗凝剂的储存管2．抽取2毫升血液，置于储存管里3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为5000g5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存7．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择三：组织样本准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品，置于冰槽里2.设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm三、样本测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔2．分别移取50微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液（ReagentD）4．分别加入50微升反应液（ReagentB）5．轻轻摇动96孔酶标板6．在37℃温度下孵育2分钟7．放进酶标仪，置零8．取出酶标板，分别加入50微升底物液（ReagentC）9．轻轻摇动酶标板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和5分钟读数）四，样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度[详细]

  2024-09-29 05:34

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• 组织肉毒碱棕榈酰转移酶I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途组织肉毒碱棕榈酰转移酶I（CARNITINEPALMITOYL-TRANSFERASEI）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过肉碱和脂酰辅酶A以及特定YZ剂反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）肉毒碱棕榈酰转移酶I的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景脂肪酸β氧化过程（β-oxidation）在动物组织的线粒体发生的脂肪酸代谢通路，可概括为活化、转移、β氧化及Z后经三羧酸循环被彻底氧化生成CO2和H2O，并释放能量等四个阶段。大于10个碳（C10）的活化型长链脂酰辅酶A是不能直接透过线粒体内膜，需要借助肉碱（camitine），即L-3羟-4-三甲基铵丁酸，而被转运入线粒体内，在线粒体内膜的外侧及内侧分别有肉碱脂酰转移酶（carnitinepalmitoyltransferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。位于内膜外侧的酶Ⅰ，促进脂酰CoA转化为脂酰肉碱，后者可借助线粒体内膜上的转位酶（或载体），转运到内膜内侧，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉碱释放肉碱到胞浆，留下脂酰CoA。由此位于胞浆的活化脂肪酸―脂酰CoA穿过线粒体内膜进入基质而被氧化分解。肉碱脂酰转移酶缺失症导致机体无法代谢脂肪酸。基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A（malonylCoA）存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析丙二酰辅酶A敏感性肉碱脂酰转移酶I的特异活性。肉碱脂酰转移酶I反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 组织谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途组织谷氨酰胺酶（glutaminase）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶的酶偶联反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后吸光峰值的，即采用光度法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等）谷氨酰胺酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景谷氨酰胺酶（glutaminase；EC3.5.1.2）是一种氨基酸水解酶（amidohydrolase），将谷氨酰胺脱氨基（deaminating）转化为谷氨酸。其同工酶具有组织特异性：其功能在肝细胞中产生的氨，用于合成尿素；在肾小管上皮细胞中产生的氨通过氨离子分泌，调节肾的酸碱平衡；同时在胶质细胞（glialcell）和肠细胞中也有表达。谷氨酰胺酶在药物和食品工业方面应用广泛，例如调味品的生产和白血病ZL的药物等。基于底物谷氨酰胺在谷氨酰胺酶酶的作用下，转化为谷氨酸和氨气，进而在谷氨酸脱氢酶的催化下，伴随着氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidizednicotinamideadeninedinucleotide；NAD＋）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH），产生的吸光峰值的变化（340nm波长），来定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶联反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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