动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

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动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书主要用途动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在通过低速差速离心和化学渗压休克处理纯化血小板、以及物理或化学破膜和高速差速离心的方法，直接从动物血细胞中分离出完整而纯化的血小板线粒体细胞器，并在蛋白酶YZ混合剂的帮助下，使已纯化的线粒体膜结构破裂而获得线粒体内活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于人体和各种动物全血（鼠、猪、羊等）中血小板线粒体可溶性总蛋白的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和营养学等的研究。可直接用于特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富的细胞色素氧化酶系统和细胞凋亡相关蛋白等。通过机械或化学方法破裂细胞，进而差速离心获得线粒体，然后通过特殊裂解液和蛋白酶YZ混合剂防止裂解后线粒体内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留线粒体内蛋白质的免疫和生物学活性，Z后进行相关蛋白的独立分析。产品内容清理液（ReagentA）500毫升裂解液（ReagentB）80毫升净化液（ReagentC）20毫升强化液（ReagentD）10毫升保存液（ReagentE）200毫升破膜液（ReagentF）2毫升活性液（ReagentG）20微升上样液（ReagentH）3毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentG）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于样品保存的容器4℃台式离心机：用于样品操作4℃超速离心机：用于样品操作DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞超声仪：用于裂解细胞实验步骤物理处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板加入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆帮匀化细胞（约10下）（注意：参见注意事项11）将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管（选择步骤）置于超声仪枪头下，离心管在冰槽里（选择步骤）超声功率为60％（或150赫兹）猝击10秒，间隙30秒，10个循环放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳1）移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管2）加入20微升上样液（ReagentH）3）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交化学处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）（选择步骤）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g（选择步骤）小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液(ReagentA)，混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次加入500微升预冷的强化液（ReagentD）涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项12）加入5毫升预冷的保存液（ReagentE），轻轻摇动试管混匀放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管加入20微升上样液（ReagentH）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交注意事项本产品为20次（10至20毫升全血）操作其它实际操作的全血容量与试剂使用量按比例调整：例如40毫升全血，试剂用量加倍操作时，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）操作时，须戴手套建议使用新鲜全血：2小时内的全血为理想状态，不要超过24小时全血样品采集须使用全血样品采集须使用EDTA二钾血液抗凝液（12059.1）、ACD血液抗凝液（12059.4），或肝素钠血液抗凝液（12059.5）建议使用足够的样品量血小板提取量因人而异；如果不足，建议增加全血量线粒体操作均须在4℃或以下状态下进行建议严格控制操作时间通常匀化次数为10下（或细胞颗粒群消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数物理处理法是优先推荐的技术处理通常每毫升全血平均可获得2X108血小板通常10毫升全血的血小板线粒体含量为10至25微克线粒体蛋白16．如果需检测不可溶性线粒体蛋白，可保留线粒体裂解后的沉淀物，直接加入10微升上样液（ReagentH）和10微升无离子水，然后继续操作二的步骤3至6本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定无蛋白酶污染本产品经鉴定蛋白萃取产量高本产品经鉴定纯化程度高

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动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书主要用途动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在通过低速差速离心和化学渗压休克处理纯化血小板、以及物理或化学破膜和高速差速离心的方法，直接从动物血细胞中分离出完整而纯化的血小板线粒体细胞器，并在蛋白酶YZ混合剂的帮助下，使已纯化的线粒体膜结构破裂而获得线粒体内活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于人体和各种动物全血（鼠、猪、羊等）中血小板线粒体可溶性总蛋白的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和营养学等的研究。可直接用于特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富的细胞色素氧化酶系统和细胞凋亡相关蛋白等。通过机械或化学方法破裂细胞，进而差速离心获得线粒体，然后通过特殊裂解液和蛋白酶YZ混合剂防止裂解后线粒体内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留线粒体内蛋白质的免疫和生物学活性，Z后进行相关蛋白的独立分析。产品内容清理液（ReagentA）500毫升裂解液（ReagentB）80毫升净化液（ReagentC）20毫升强化液（ReagentD）10毫升保存液（ReagentE）200毫升破膜液（ReagentF）2毫升活性液（ReagentG）20微升上样液（ReagentH）3毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentG）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于样品保存的容器4℃台式离心机：用于样品操作4℃超速离心机：用于样品操作DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞超声仪：用于裂解细胞实验步骤物理处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板加入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆帮匀化细胞（约10下）（注意：参见注意事项11）将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管（选择步骤）置于超声仪枪头下，离心管在冰槽里（选择步骤）超声功率为60％（或150赫兹）猝击10秒，间隙30秒，10个循环放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳1）移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管2）加入20微升上样液（ReagentH）3）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交化学处理法实验开始前，将试剂盒里的净化液（ReagentC）冻融，然后移出1毫升净化液（ReagentC）到4毫升的裂解液（ReagentB）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。准备1个无菌的50毫升锥形离心管轻轻混匀10至20毫升新鲜（2小时内抽取的静脉血）的抗凝全血样品移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群用手指轻弹离心管2至3下，使细胞颗粒群松动加入10毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进台式离心机离心15分钟，速度为200g小心移取上清液合并到上述50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）（选择步骤）放入含有上清液的离心管到台式离心机离心15分钟，速度为200g（选择步骤）小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管，留下200微升液体，以防抽取松动的细胞颗粒群（扔掉含有细胞颗粒群的离心管）――此步骤获得血小板富集血清放入含有上清液的离心管到台式离心机离心20分钟，速度为2000g可见白色沉淀颗粒群，小心抽掉上清液加入10毫升预冷的清理液(ReagentA)，混匀细胞颗粒群放入台式离心机离心20分钟，速度为2000g小心抽去上清液（注意：如果暂时停止操作，须暂时放进－70℃冰箱里）――此步骤获得纯化的血小板入5毫升预冷的裂解工作液涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次加入500微升预冷的强化液（ReagentD）涡旋震荡5秒，充分混匀在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项12）加入5毫升预冷的保存液（ReagentE），轻轻摇动试管混匀放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除未溶解的细胞放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物（选择步骤）加入3毫升预冷的保存液（ReagentE）（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g（选择步骤）小心抽去上清液加入100微升破膜液（ReagentF）到线粒体颗粒样品中加入1微升活性液（ReagentG）涡旋震荡15秒置入冰槽中孵育15分钟涡旋震荡60秒放进微型台式离心机离心2分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里继续进行下列操作：操作一、线粒体总蛋白定量检测1．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）操作二、可溶性线粒体蛋白电泳移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升离心管加入20微升上样液（ReagentH）涡旋震荡15秒放进微型台式离心机离心10秒，速度为500g（或2000RPM，例如eppendorf5415）煮沸5分钟上样，进行电泳操作和西方杂交注意事项本产品为20次（10至20毫升全血）操作其它实际操作的全血容量与试剂使用量按比例调整：例如40毫升全血，试剂用量加倍操作时，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）操作时，须戴手套建议使用新鲜全血：2小时内的全血为理想状态，不要超过24小时全血样品采集须使用全血样品采集须使用EDTA二钾血液抗凝液（12059.1）、ACD血液抗凝液（12059.4），或肝素钠血液抗凝液（12059.5）建议使用足够的样品量血小板提取量因人而异；如果不足，建议增加全血量线粒体操作均须在4℃或以下状态下进行建议严格控制操作时间通常匀化次数为10下（或细胞颗粒群消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数物理处理法是优先推荐的技术处理通常每毫升全血平均可获得2X108血小板通常10毫升全血的血小板线粒体含量为10至25微克线粒体蛋白16．如果需检测不可溶性线粒体蛋白，可保留线粒体裂解后的沉淀物，直接加入10微升上样液（ReagentH）和10微升无离子水，然后继续操作二的步骤3至6本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定无蛋白酶污染本产品经鉴定蛋白萃取产量高本产品经鉴定纯化程度高[详细]
2018-11-19 10:00
产品样册
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动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书

主要用途Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化，通过比色测定其Zda吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量极ng确。技术背景考马斯亮蓝染料G－250（CoomassieBrilliantBlueG－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐（anionsulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下，其Zda吸收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的Zda优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之Lowry，Hartree-Lowry和BCA技术，更为敏感。[详细]
2018-11-18 10:00
产品样册
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动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）

动物硬组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]
2015-05-19 00:00
操作手册
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动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途动物硬组织线粒体粗提分离试剂是一种旨在从动物硬组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物硬组织（心脏或肌肉）的线粒体的制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升酶解液（ReagentF）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和酶解液（ReagentF）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备操作的容器1.5毫升离心管：用于保存线粒体的容器4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞[详细]
2018-11-18 10:00
产品样册
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细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途细胞可溶性总蛋白质制备试剂是一种旨在使用化学方法快速充分裂解细胞，并在蛋白酶YZ混合剂的帮助下，通过超速离心，收集所有细胞内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞（动物、人体）等样品。可直接用于核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA）、DNA足迹法检测、特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，收集效果好。技术背景通过特殊裂解液和蛋白酶YZ混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。[详细]
2018-11-18 10:00
产品样册
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动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书

动物线粒体呼吸链复合物I活性定量检测试剂盒产品说明书[详细]
2024-09-17 19:14
专利
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抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书

上海哈灵生物科技有限公司HL40029v.A抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书主要用途抗体/蛋白HRP标记制备试剂是一种旨在通过高碘酸氧化产生活化的辣根过氧化酶，与抗体或蛋白中氨基偶联反应，进一步还原和中和作用，确保复合体的稳定的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种种系的抗体、纯化蛋白的HRP标记。其应用于后续WESTERNBLOT、免疫组化、ELISA等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。技术背景辣根过氧化酶，分子量44Kd，常作为标记，用于免疫反应的定量检测（enzymeimmunoassay；EIA），例如免疫印迹WESTERNBLOT、免疫检测ELISA和免疫化学染色immunohistochemicalstaining等。辣根过氧化酶具有价廉、高纯、高特异活性、稳定等优点，成为主要的（占80％）抗体或蛋白缀和标记酶。基于辣根过氧化酶为糖蛋白，含有8个糖链，通过高碘酸避光氧化，使羟基和醛基分离后，活化的HRP既不失活，又能在碱性条件下，与所有蛋白或抗体存在的氨基进行偶联反应，形成席夫碱（Schiff'sbases），进而在酸性透析处理后去除剩余的高碘酸和预防自偶联。经过温和的硼氢化氰钠（sodiumcyanoborohydride）还原水合作用，以及乙醇胺（ethanolamine）或2-巯基乙胺（2-mercaptoethylamine）中和残余的醛基，使标记蛋白/抗体更加稳定。产品内容缓冲液（ReagentA）1毫升标记液（ReagentB）50微升还原液（ReagentC）200微升中和液（ReagentD）50微升保存液（ReagentE）1毫升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里；有效保证6月用户自备目标抗体或蛋白：用于HRP标记1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器震荡器：用于混匀反应物实验步骤移取10微升（总量100微克）用户自备的目标抗体或蛋白（分子量在160Kd左右或以下）加入90微升缓冲液（ReagentA），混匀加入10微升标记液（ReagentB），混匀室温下（25℃）孵育1小时或4℃冰箱里孵育16小时加入10微升还原液（ReagentC），混匀室温下孵育15分钟加入10微升中和液（ReagentD），混匀室温下孵育15分钟加入130微升保存液（ReagentE），混匀获得标记蛋白或抗体终浓度0.6毫克/毫升即刻放进-70℃保存或置于冰槽里备用或继续后续ELISA、WESTERNBLOT、IMMUNOHISTOLOGY等注意事项本产品为5次（100微克/次）操作操作时，须戴手套样品中避免含有叠氮化钠（sodiumazide）、Tris、甘氨酸（glycine）、氢氧化铵（NH4OH）等，否则干扰标记如果标记液（ReagentB）没有充分溶解，可以放在4℃冰箱里72小时或更长时间后使用如果需要增加标记量，则相应增加试剂用量如果标记500Kd以上的蛋白或抗体，则使用20微升标记液（ReagentB）即可标记效率取决于目标蛋白或抗体与活化HRP的分子摩尔浓度比例和结构关系HRP标记蛋白复合体在4℃温度下保持4周稳定；在－20℃温度下，保持6个月稳定标记抗体后续应用建议用量如下：应用标记抗体浓度ELISA250纳克/毫升至2.5微克/毫升WESTERNBLOT0.5微克/毫升至50微克/毫升IMMUNOHISTOLOGY2.0微克/毫升至5.0微克/毫升本公司提供系列蛋白/抗体标记试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定不含污染性蛋白酶[详细]
2018-11-19 10:00
产品样册
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红细胞可溶性膜蛋白（纯提）制备试剂盒产品说明书（中文版）

红细胞可溶性膜蛋白（纯提）制备试剂盒产品说明书（中文版）[详细]
2015-01-29 00:00
安装说明
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人线粒体促凋亡蛋白（SMAC）ELISA试剂盒说明书

电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人线粒体促凋亡蛋白（SMAC）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人SMAC/Diablo单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的SMAC与单抗结合，加入生物素化的抗人SMAC，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，SMAC浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中SMAC浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：20ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应SMAC含量。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的SMAC检测浓度小于30pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人SMAC。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]
2018-09-13 10:01
产品样册
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人可溶性血栓调节蛋白试剂盒使用说明书

人可溶性血栓调节蛋白试剂盒使用说明书[详细]
2015-05-29 00:00
其它
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纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）

纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）[详细]
2024-09-28 00:04
课件
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可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释II）试剂盒产品说明书

可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释II）试剂盒产品说明书主要用途可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释II）试剂是一种旨在使用化学稳定方法，使可溶性变性纯化蛋白重新折叠，恢复其蛋白功能和活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种可溶性纯化蛋白，尤其是细菌内重组蛋白（融合蛋白）以及盐酸胍或Sarkosyl可溶性处理的包涵体蛋白。可后续用于蛋白功能、酶活性等分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作便捷，复性效果理想。技术背景在蛋白纯化和融化过程中，特别是包涵体蛋白，变性剂（denaturant）提供了Z有效的手段，其获得的纯化蛋白属于变性蛋白（denaturedprotein）。为了使变性蛋白恢复为天然蛋白（nativeprotein），即具有蛋白质的自然结构和活性，需要进行蛋白复性（renaturation）或重新折叠（refolding）。蛋白复性是一个复杂的过程，诸如pH、离子强度、低分子添加剂、氧化还原电位（redoxpotential）和温度等物化因子，影响体外蛋白复性的效率。通常体外复性的方法包括稀释法和缓冲交换法。前者通过化学处理，而后者采用物理方法（例如透析、膜过滤（diafiltration）、凝胶过滤层析（gel-filtrationchromatography）等，以达到蛋白复性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜碱（sulfobetaine）、去垢剂、变性剂等将影响化学稀释复性处理的效率。产品内容稳定液（ReagentA）20毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品保存的容器恒温摇床：用于反应孵育实验步骤准备好可溶性纯化变性蛋白样品移取50微升蛋白样品（10毫克/毫升）到1.5毫升离心管加入950微升稳定液（ReagentA）放进20℃恒温摇床孵育2小时，速度为200RPM（选择步骤）移取10微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值即刻放进－70℃冰箱里保存注意事项本产品为20次操作操作时须戴手套本产品的复性效率达80％以上建议与本公司系列包涵体蛋白溶解试剂盒配套使用由于样品的特异性，用户可以优化温度、孵育时间、蛋白浓度，以获得Zda复性效率如果复性效率过低，建议使用可溶性包涵体蛋白复性（物理透析）试剂盒－HL30044.5如果获得满意的复性效果，用户可以按比例扩大复性容量本公司提供系列包涵体蛋白处理试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定无蛋白酶污染[详细]
2018-11-18 10:00
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人可溶性血栓调节蛋白（sTM）ELISA试剂盒说明书

人可溶性血栓调节蛋白（sTM）ELISA试剂盒说明书l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人可溶性血栓调节蛋白（sTM）的含量。l有效期：6个月l保存条件：2-8℃l本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人可溶性血栓调节蛋白（sTM）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人可溶性血栓调节蛋白（sTM）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。样本处理及要求1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶YZ剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。Z后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响Z后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本处理1.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。2.实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。3.若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。4.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。5.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。6.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。7.建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。需要而未提供的试剂和器材酶标仪（450nm）高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱蒸馏水或去离子水注意事项严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。在储存和温育时避免强光直接照射。平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。不能使用过期产品。如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。试剂盒性能1.检测范围：1.25ng/mL40ng/mL。2.灵敏度：Zdi检测浓度小于0.1ng/mL。3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。说明1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。2.Z终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到**的检测结果。[详细]
2018-11-16 10:02
产品样册
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人血小板反应蛋白1 （TSP-1）ELISA试剂盒使用说明书

我司ELISA试剂盒现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒森贝伽。本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)水平。用纯化的人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)，再与HRP标记的血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：270ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180ng/ml，120ng/ml，60ng/ml，30ng/ml，15ng/ml）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：7ng/ml-260ng/ml保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]
2018-11-07 14:16
产品样册
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大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa试剂盒说明书

大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa试剂盒说明书[详细]
2024-10-08 05:29
操作手册
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人总蛋白S（TPS）ELISA试剂盒说明书

人总蛋白S（TPS）ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人总蛋白S（TPS）的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人总蛋白S（TPS）水平。用纯化的总蛋白S（TPS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总蛋白S（TPS），再与HRP标记的总蛋白S（TPS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人总蛋白S（TPS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人总蛋白S（TPS）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：360ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240ng/L，160ng/L，80ng/L，40ng/L，20ng/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：10ng/L-300ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]
2018-11-07 14:16
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动物全血线粒体粗提分离试剂盒产品说明书

主要用途动物全血线粒体粗提分离试剂是一种旨在通过化学溶解以纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物血细胞中的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的Z重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。[详细]
2018-11-18 10:00
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动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书

动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升活性液（ReagentF）微升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentF）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管：用于保存线粒体4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和4毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g11．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g13．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）15．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g16．（选择步骤）小心抽去上清液17．加xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀18．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．移入一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx毫升裂解工作液9．涡旋震荡5秒，充分混匀10．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）12．涡旋震荡5秒，充分混匀13．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）14．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀15．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g16．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）20．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g21．（选择步骤）小心抽去上清液22．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀23．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离（细胞匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，3．小心抽去清洗液4．重复实验步骤2至3一次5．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．放进37℃培养箱孵育3分种7．手击震动培养瓶，使细胞脱落8．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9．全部移入到一个50毫升锥形离心管10．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g11．小心抽去上清液12．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞13．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g14．小心抽去上清液15．加入预冷的xx毫升裂解工作液16．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群17．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）（注意：参见注意事项8）18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面28．小心抽去清洗液3．重复实验步骤2至3一次4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面5．放进37℃培养箱孵育3分种6．手击震动培养瓶，使细胞脱落7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8．全部移入到一个50毫升锥形离心管9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g10．小心抽去上清液11．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA）12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）18．涡旋震荡5秒，充分混匀19．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）20．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g22．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）26．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g27．（选择步骤）小心抽去上清液28．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀29．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里注意事项1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）或50次（200毫克动物组织或1X107细胞）操作2．实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一3．所有操作均须在4℃或以下状态进行4．操作时，须戴手套5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）6．建议使用足够的样品量7．建议严格控制操作时间8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数9．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11．通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解13．本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g，可以提高粗提的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少14．如果需要获得99％以上纯度的线粒体，使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒－10006.315．线粒体正常活性测定方法是：CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17．本公司提供线粒体套餐：ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18．本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3．本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]
2018-11-18 10:00
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ELISA试剂盒人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA试剂盒

人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1ELISA试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1.酶标仪（450nm）人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1ELISA试剂盒2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3.标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5.所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品（800ng/mL）0.6mL0.6mL按说明书进行稀释标准品稀释液6mL3mL无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：800、400、200、100、50、25ng/mL.试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2.灵敏度：Zdi检测浓度小于10ng/mL。3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1ELISA试剂盒[详细]
2024-09-29 02:39
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人总P53蛋白（Total P53）ELISA试剂盒说明书

电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人总P53蛋白（TotalP53）ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人P53单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的P53与单抗结合，加入生物素化的抗人P53，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，P53浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中P53浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：5ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成10ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入10ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）标本激活方法1.将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。2.加20ul1NHCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60±2分钟。3.加20ul1NNaOH,盖紧，上下混匀。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本P53的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）5.细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释（410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品1000、500、250、125、62、31、15.6、0PG/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应P53含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的P53检测浓度小于10pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人P53。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]
2018-09-13 10:01
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