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年终盘点 | 流式实验踩坑系列

发布:贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司
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       岁末年初,又到了年终总结和新年计划的时候。2021流式实验踩坑系列已盘点如下,《流式实验中的坑》续集,敬请期待!


01

“客户样本细胞采用病毒转染,其中病毒有GFP荧光,检测时发现阳性比例62.61%,而荧光显微镜下则是满视野的带绿光细胞,而且荧光非常强,但流式图中显示的GFP+细胞比例似乎不够,同时荧光并非特别强…… “


02

“CytoFLEX 2L6C的仪器,客户反馈做小鼠脾 脏细胞检测,预实验发现PE和PC5通道的补偿怎么也调节不好。当把PE,PC5通道单染管按顺序调节成“横平竖直”了,回头发现PE单染管的某些通道补偿又明显不对了……”


03

“Annexin V和PI双染法研究细胞凋亡是经典的流式实验之一,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine, PS)在正常细胞中存在细胞膜内侧,在细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸从细胞膜内侧外翻到细胞膜表面,与Annexin V-FITC结合。而PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在细胞凋亡发生中晚期,由于细胞膜通透性增加,PI透过细胞膜从而标记细胞核DNA。因此Annexin V和PI联合使用,可同时用来鉴定活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞以及核碎片……“


04

“样本为培养的细胞系,洗涤后作为阴性细胞上机检测,该实验选择CytoFLEX流式细胞仪,分析软件为CytExpert。在实际检测过程中,发现认为是完全阴性的细胞群体在FITC,PE,PC5.5等通道上出现阴性和阳性的分群,而且荧光信号随着时间发生偏移……”


05

“某高校一课题组涉及到人类样本,由于是第 一次做关于人源样本,经查询资料得知外周血溶血后在FSC/SSC散点图上会出现淋巴细胞/单核细胞/粒细胞三群(图一),所以设计了健康人CD4/CD3双色实验来研究淋巴细胞预实验,但是在检测时却发现自己的结果与资料上的并不一样,淋巴细胞的群体特别大,而单核和粒细胞以及淋巴细胞中CD3+T淋巴细胞比例也不正常……”



2022-01-07
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