岁末年初，又到了年终总结和新年计划的时候。2021流式实验踩坑系列已盘点如下，《流式实验中的坑》续集，敬请期待！

01

“客户样本细胞采用病毒转染，其中病毒有GFP荧光，检测时发现阳性比例62.61%，而荧光显微镜下则是满视野的带绿光细胞，而且荧光非常强，但流式图中显示的GFP+细胞比例似乎不够，同时荧光并非特别强…… “

02

“CytoFLEX 2L6C的仪器，客户反馈做小鼠脾 脏细胞检测，预实验发现PE和PC5通道的补偿怎么也调节不好。当把PE,PC5通道单染管按顺序调节成“横平竖直”了，回头发现PE单染管的某些通道补偿又明显不对了……”

03

“Annexin V和PI双染法研究细胞凋亡是经典的流式实验之一，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）在正常细胞中存在细胞膜内侧，在细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸从细胞膜内侧外翻到细胞膜表面，与Annexin V-FITC结合。而PI是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在细胞凋亡发生中晚期，由于细胞膜通透性增加，PI透过细胞膜从而标记细胞核DNA。因此Annexin V和PI联合使用，可同时用来鉴定活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞以及核碎片……“

04

“样本为培养的细胞系，洗涤后作为阴性细胞上机检测，该实验选择CytoFLEX流式细胞仪，分析软件为CytExpert。在实际检测过程中，发现认为是完全阴性的细胞群体在FITC，PE，PC5.5等通道上出现阴性和阳性的分群，而且荧光信号随着时间发生偏移……”

05

“某高校一课题组涉及到人类样本，由于是第 一次做关于人源样本，经查询资料得知外周血溶血后在FSC/SSC散点图上会出现淋巴细胞/单核细胞/粒细胞三群（图一），所以设计了健康人CD4/CD3双色实验来研究淋巴细胞预实验，但是在检测时却发现自己的结果与资料上的并不一样，淋巴细胞的群体特别大，而单核和粒细胞以及淋巴细胞中CD3+T淋巴细胞比例也不正常……”