流式实验中的坑，我都帮你踩过了_正确圈门

病例介绍

样本利用Annexin V+7-AAD双染法检测细胞凋亡情况，依据空白样本调节好电压后，依据阴性群体圈门发现细胞都在早期凋亡以及凋亡区域如图1，这明显不符合常理而且也与显微镜下观察到的细胞状态不符合，这是什么原因？

图1.FS/SS圈定细胞群体后依据空白管来圈定阴性群体位置

小贝答疑

首先我们看到，该样本在Annexin V + 7-AAD双通道散点图上十字门的位置是依据空白管来设置的，这是不太合适的。通过Annexin V以及7-AAD的单染管来看，样本经过染色后细胞群体在散点图上的位置明显右移，这是由于染色造成的本底荧光增强造成的，这时我们需要依据染色后的群体分布来设定阴性和阳性群体的位置如图2。

图2.荧光通道依据单标管来确定阴阳性群体位置

小贝处 方

1、虽然把门更改到合适的位置，凋亡细胞的统计比例正常，但是在图片结果上仍然会造成细胞群体整体偏右偏阳性的效果，我们可以通过“图属性”里更改横纵坐标轴的显示范围，使细胞群体的分布在散点图视觉分布更合适如图3；

图3.改动坐标轴的显示范围来优化散点图群体的分布

2、如果不想更改坐标轴显示范围，那在后续实验中可以通过优化减少染色抗体浓度以及通过单标管优化通道电压来实现。