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化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项Zxin免疫测定技术。
影响因素
1.试剂
有很多生成化学发光免疫检测试剂的厂家,厂家不同,生产的试剂灵敏度与特异性也因此存在差异。如果使用的试剂劣质,那么就会造成假阳性或假阴性结果。所以结果准确的关键是选择高质量的试剂。在实验之前,首先从冰箱中取出实验中所需的所有试剂及待测样品,使用的时间为温度与室温(25℃)平衡1小时以上之后。需要在每次使用后将已开封试剂盒及时放回2~8℃冰箱内保存,试剂应当在开封后1个月内使用。为了避免混用导致重复性差,不能混用不同批号试剂盒中组分。
2.操作技术
不能准确地吸量,会造成测定的重复性差,从而对检测结果产生直接的影响。所以要经常清洗和定期校正加样器。加样过快会导致孔间污染。不要将样本加错。不要在孔壁上部非包被区添加样本及试剂,会导致重复性差。
3.标本
需要防止严重溶血的现象出现。血红素基团包含在血红蛋白中,其的活性和过氧化物类似。所以,在采用HRP为标记酶的酶促化学发光测定中,如果血清标本中有较高浓度的血红蛋白,那么在温育过程中其就很容易吸附于固相,从而导致后面加入的HRP底物反应值偏高,造成假阳性。
在对样本采集和血清分离的过程中,需要防止细菌污染。抗原抗体等蛋白可能会因为细菌生长所分泌的一些酶而分解。使用相应酶作标记的测定方法会受到一些细菌的内源性酶的非特异性干扰。对于机体的真实情况,新鲜标本的检测结果更能准确的反映,检测应当在采血后24小时内完成。在采集血液标本后必须使其充分凝固再对血清进行分离,如果依然有部分纤维蛋白原残留在血清中,那么容易导致假阳性结果。若采血后24小时内不能完成检测,则应当将血清分离后,在-20℃冰箱妥善保存,将原始记录做好。反复冻融,容易导致假阳性。
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