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转膜仪

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转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。,因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。

转膜仪
湿电转膜仪操作规程

湿电转膜仪操作规程

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,...[查看全部]

湿电转膜仪操作规程

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。,因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


操作步骤:

1、转膜时,1张5.5×8.5cm的PVDF膜以及2张6.5×10cm的滤纸需要被准备,由于膜会受到手上的蛋白的污染,必须要戴手套切滤纸和膜。在甲醇中浸没切好的PVDF膜超过15秒即可。


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2、将浸过的PVDF膜、两张滤纸、两块海绵垫以及转膜用的夹子放置于加有转移液的搪瓷盘里。


3、将夹子打开,在转膜液中放入黑的一面,海绵、滤纸、分离胶、PVDF膜、滤纸、海绵由下往上依次放入。


4、合好夹子,放入转移槽中,使夹的白面对着槽的红面,夹的黑面对槽的黑面,将电接通,电转移时会有热产生。有较大空隙在槽的一边,降温将事先准备好的冰盒放入。在一个大的盛满冰的容器中放入整个电泳槽(建议使用大的塑料泡沫盒子)。


注意:

1、在转膜液中进行整个过程,在铺每一层时,气泡要用刮子赶掉,一定不能有气泡留在胶与膜之间。


2、要轻轻地撬玻璃板剥胶,用刮子轻轻刮去浓缩胶,将分离胶小心剥下,往滤纸上盖,用手调整使其与滤纸对齐。


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转膜仪使用方法

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


准备工作

1、准备对缓冲液进行转移,缓冲液的pH值.不要无故调整,如果仪器过热出错,那么可能选择了不适合的缓冲液。


2、通电以后,凝胶在转移缓冲液中平衡,平衡能够将电泳缓冲液中的盐和清洁剂从凝胶中除去。若不将盐去除,将对缓冲液产生很大的影响,并且使得仪器在转移过程中过热。除此以外,在缓冲液中,低浓度的凝胶(<12%的聚丙烯酰胺)会缩水。平衡调整凝胶在最终大小,,为电泳转移提供便利。凝胶的浓度决定了平衡所需时间。


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3、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,在缓冲液中通过4545度夹角缓慢滑入膜,并且浸泡15-30分钟,从而湿润完全,不然的话,那么会容易起对转移起到阻滞作用的气泡。应当使用镊子或者带手套来避免污染膜。


4、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,2张加厚型滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸被需要,将滤纸在转移缓冲液中浸透完全。


5、若一次转膜多张,使用透析膜隔开。也应当完全浸透透析膜。


使用方法

1、本过程请带手套操作,从而避免污染膜。


2、将外盖和不锈钢电极板打开。


3、首先将预先没泡过的厚滤纸放置在铂金阳极板上。在移液管或玻璃棒滤纸表面滚动,对气泡进行驱赶,将空气排出。


4、放置预先浸泡过的转移膜,将空气排出。


5、放置预先浸泡过的厚滤纸,将空气排出。


6、放置平衡过的凝胶,排出空气。在膜的中间放置凝胶。


7、如果将多余1张全大小的膜同时转移,应当使用预先浸泡过的透析膜隔开,之后再继续2-5步。如果凝胶比较小,能够将它们挨着平铺在一起转膜。将所有空气排出。


8、将电极板小心的装上,将电极板装好,使啮合,然而滤纸堆不要弄。


9、将外盖安上,将电源插上,若是阴极到阳极,黑色插黑色,黑色插黑色,那么转膜正常。不要弄饭,不然

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与转膜仪使用方法相关文章

湿电转膜仪注意事项

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。,因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


注意事项:

1.缓冲液的准备非常重要。除非另有说明,否则请勿通过添加酸或碱来调节转移缓冲液ph。 缓冲液的准备不当会导致过热和安全隐患。 仅使用优质试剂等级甲醇。 污染的甲醇可导致转移缓冲液电导率增加,以及大分子的转移不良。


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2.电泳后,在转移缓冲液中平衡凝胶。 平衡有助于去除电泳缓冲液和去污剂。如果不去除盐,它们将增加转移缓冲液的电导率和转移过程中产生的热量。 同样,低百分比的凝胶(<12%丙烯酰胺)会在含甲醇的缓冲液中收缩。 平衡允许凝胶在电泳转移之前调节至其最终尺寸。平衡所需的时间长短取决于凝胶厚度。 例如,对于0. 75 mm SDS-PAGE凝胶,需要15分钟。低分子量大分子10,000道尔顿)可能更容易从凝胶中扩散出来。通过在电泳过程中多次改变预平衡缓冲液,可以允许适当的凝胶预平衡。 预平衡期相对较短。 这将有助于限制低分子量大分子的扩散,同时提供有效的减盐效果。


3.将膜切成凝胶尺寸。 将膜以45度角缓慢滑入转移缓冲液中并使其湿润浸泡15-30分钟。 膜的完全润湿对于确保适当的结合非常重要。 突然润湿会导致气泡滞留在基质中,这些气泡会阻止转移分子。 为避免膜污染,处理膜时请始终使用镊子或戴手套。


4.将滤纸切成凝胶尺寸。 两张超厚滤纸(或四张厚纸或六张纸,每个凝胶/膜三明治都需要每种凝胶都需要滤纸)。 通过浸入转移缓冲液完全浸透滤纸。


5、请勿在本仪器上颠倒极性,否则会导致不锈钢阴极腐蚀和生锈。 如果发生这种情况,则应使用温和的磨蚀性清洁剂清洁不锈钢以去除锈迹。


6.用本仪器不要超过25V。这可能会损坏电极。


7.除非另有特别说明,否则请勿调节转移缓冲液的pH值。 请仔细按照说明进行操作。 如果未指示,则调节转移缓冲液的pH值将导致增加缓冲液的电导率。 这表现为电源电流表显示的初始电流输出高于预期。 监控每次运行之前,请使用200/20型电源提供缓冲电阻,以确保适当的缓冲电导率。


8.不建议长时间转移。 请勿使本仪器保持连接状态。 在半干印迹过程中,焦耳热会迅速产生。 传输时间

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与湿电转膜仪注意事项相关文章

转膜仪的特点

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率,因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


特点

转印耗材即用

包含转印膜、滤纸和缓冲液的预制耗材包装配好,实验的时候仅需放入电泳好的凝胶,该耗材包不会污染环境,能够直接排放缓冲液。


使用界面直观

能够相当方便地选择和执行转印程序能够对预设转印程序自由使用或者由客户自行对预设转印程序进行设定。有25个客户自定义程序。


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转印全能

高度一致性的转印效率为全能型蛋白快速转膜仪所提供,分子量、转录后修饰及蛋白等电点等因素不会对其产生影响。CV误差减一半,信号强度增加到6倍。


蛋白质转印数量高

进行2D转印实验时,全能型蛋白快速转膜仪转印数量达到两倍。


效率高

全能型蛋白快速转膜仪相对于其它转印技术而言转印效率更加的高。


通量高

全能型蛋白快速转膜仪相对于现有技术,4块小型胶或者2块中型胶能够同时被转印。


模块化

独立设计了转印装配模块与主机,组合运用能够更加简便地进行操作。


兼容性好

全能型蛋白快速转膜仪不仅适合快速转印耗材,而且对传统的半干式转印耗材也兼容。


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与转膜仪特点相关文章

转膜仪转膜技术分类

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


分类

在转膜仪器制造商的网站上能够找到转膜流程的详细说明,按照系统存在差异而有所不同。然而每种方法的原理均一致。在电场中,SDS提供的带电荷的蛋白能够在凝胶中移动,由凝胶往膜上转移,将蛋白的“印迹”显示出来。早期的方法对于扩散有所依赖,如今标准方法即是在电场中进行印迹。


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转膜包括湿转和半干转。因为膜干燥,湿转湿转更不容易,特别建议大蛋白转膜使用。两种转膜方法,均是在凝胶旁边放置放置,在在滤纸中间夹着凝胶和膜,在固体载体之间夹着整个三明治结构,使得胶与膜之间保持紧密接触。


半干转

在半干转中,由滤纸、凝胶、滤纸组成三明治,将三明治浸入转膜缓冲液中,在正负电极之间直接放置,在转膜中,将凝胶和负极靠近,将膜和正极靠近,非常重要。半干转的转膜缓冲液中Tris和甘氨酸的比例不一定相同于湿转,48 mM Tris39mM甘氨酸、0.04%SDS、20%甲醇为标准配方,应当对仪器制造商的实验方案进行参考。


湿转

在湿转中,在海绵和滤纸之间紧紧地夹着在海绵和滤纸。(由下至上依次海绵、滤纸、凝胶、膜、滤纸、海绵),使气泡不会在凝胶与膜之间形成得以确保。在转膜缓冲液中浸泡这三明治结构,对其施加电场。负电荷蛋白移向正极,在膜上结合,并对其继续移动进行阻止。1tris甘氨酸缓冲液为湿转的标准缓冲液与跑胶缓冲液所使用的缓冲液,然而SDS却没有,并且将甲醇加入至终浓度20%,建议在转膜缓冲液中相对于分子量大于100kd的蛋白来说将终浓度为0.1%的SDS加入。


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