人血浆中儿茶酚胺及其代谢物测定的整体解决方案

肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）和多巴胺（DA）均属于儿茶酚胺类物质，对人体起着重要的作用。同时，变肾上腺素（MN）、去甲变肾上腺素（NMN）和3-甲氧基酪胺（3-MT）作为它们的代谢产物，亦与人体的健康和疾病密切相关。因此，临床研究者通常都很关注血浆中儿茶酚胺及其代谢物的测定。

安谱实验对人血浆基质进行加标，并使用 E-Gen WCX 96孔板（SBVD-CF000801）针对上述 6 种儿茶酚胺及其代谢产物进行富集净化，再用儿茶酚胺专用柱色谱分离，最 后进行串联质谱测定。结果表明本实验前处理方法步骤简单，耗时较短，能获得较好的回收率。

一、实验方法

01、前处理操作

前处理

采用50 mM乙酸铵溶液按照1:1比例稀释加标血浆，混合后，待上样

活化平衡

200 µL甲醇，200 µL水

上样

稀释后的血浆250 µL全部上样

淋洗1

200µL 25mM乙酸铵水溶液

淋洗2

200 µL乙腈-异丙醇（1：1），

淋洗完成后，正压约30s，将溶剂压干

洗脱

2×75 µL含有2%甲酸的乙腈/水（85/15，V/V），待重力流出，合并收集，洗脱完成后正压约30s，将洗脱液全部压至96孔收集板

氮吹复溶 

常温下温和氮吹至近干，用125 µL 0.1%甲酸水溶液复溶，涡旋后离心，待进样LC/MS/MS

96 孔正压固相萃取装置

备注：

a、上样、淋洗时注意控制流速约2-3s/滴；

b、氮吹时间30min左右；

c、国产D品牌 （3 mg）和进口W品牌（2 mg）也按照以上方法进行测试。

02、仪器条件

PerkinElmer三重四级杆质谱联用仪(质谱：QSight 220;液相：QSight LX50)

二、实验谱图

图1. (A) 320 pg/mL 的儿茶酚胺及其代谢物标准品、(B)200 pg/mL 的人血浆样品加标经E-Gen WCX 96孔板SPE纯化富集后检测的色谱图。

三、实验数据

表3 儿茶酚胺及其代谢物在人血浆基质中200 pg/mL加标浓度时的回收率

表4 采用微孔板从人血浆中提取儿茶酚胺及其代谢物的基质效应

四、实验结论

本实验使用E-Gen WCX 96孔板和儿茶酚胺专用柱对人血浆中儿茶酚胺及其代谢物进行提取和分析。E-Gen WCX 96孔板在活化、平衡过程中的流速明显快于某进口品牌W，且E-Gen WCX 96孔板的回收率良好，基质效应较低。

因此，可以得出E-Gen WCX 96孔板在测试血浆中儿茶酚胺及其代谢物的实验中可以保证良好的回收率和稳定性，同时基质效应较低，可与进口品牌对标。

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