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细菌基因组dna提取时常遇到哪些问题怎样解决

Huuu06 2015-10-15 10:40:23 382  浏览
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  • 萧擎峰 2015-10-16 00:00:00
    二、设备   移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机,水浴锅。   三、试剂   1、CTAB/NaCl溶液:4.1g NaCl溶解于80ml H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。   2、其它试剂:氯仿:异戊醇(24:1),酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),异丙醇,70% 乙醇,TE,10% SDS,蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂),5mol/L NaCl。   四、操作步骤:   1. 100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。   2. 加9.5ml TE悬浮沉淀, 并加0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。   3. 加1.5ml 5mol/L NaCl, 混匀。   4. 加1.5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。   5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。   6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。   7. 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟,沉淀DNA。   8. 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。 佳学基因解码,专注于基因信息的解读和应用。通过提供符合不同年龄段的基因信息产品,将基因信息、基因工程、个性化医学、jing准医学等空洞的概念转化为可以增加生活品质的产品。通过个体化教育、培训、健康保健与jing准ZL给人们带来切实的价值。

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细菌基因组dna提取时常遇到哪些问题怎样解决
 
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大鼠粪便细菌基因组dna提取需要多少样品
 
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有关天根细菌基因组DNA提取试剂盒中第二步革兰氏阳性菌的问题
2.向菌体沉淀中加入200µl缓冲液GA,振荡至菌体彻底悬浮。注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第2步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入180µl缓冲液(20mMT... 2. 向菌体沉淀中加入 200 µl 缓冲液 GA,振荡至菌体彻底悬浮。 注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破 壁处理,具体方法为:加入 180µl 缓冲液(20mM Tris, pH8.0;2mM Na2-EDTA;1.2% Triton;终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌 酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37℃处理 30 分钟以上。 这个里面的缓冲液是不是需要自己配制?如果需要,如何配制? 展开
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在做植物基因组提取实验时遇到的问题
我在做植物基因组DNA提取实验时出了问题,但是没想出原因。加入酚氯仿离心之后,再加氯仿离心,此时发现上清呈综色,老师说颜色太深,不正常,还说可能是因为酚氯仿离心后取上清时不小... 我在做植物基因组DNA提取实验时出了问题,但是没想出原因。 加入酚氯仿离心之后,再加氯仿离心,此时发现上清呈综色,老师说颜色太深,不正常,还说可能是因为酚氯仿离心后取上清时不小心把蛋白质吸出来了,可我不明白为什么有蛋白质颜色就深了,而且我们Z后得到的DNA沉淀物是黑绿色的(搞不清是黑色还是绿色),这是因为什么呢?而且我们在往离心管里加酚的时候没有把枪头没入液体中,会不会当时氧化了才会呈棕色,到底是因为什么可不可以帮我分析分析,尤其是老师说的话是因为什么? 展开
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细菌DNA提取试剂盒
以前用过一种DNA提取试剂盒,提取细菌中的DNA,很快,我记得是有A,B,C三种溶液,半个小时左右就能提取出DNA,操作也很简单。但是我忘记是哪家公司的了,现在用的是TakaRa的,真的很麻... 以前用过一种DNA提取试剂盒,提取细菌中的DNA,很快,我记得是有A,B,C三种溶液,半个小时左右就能提取出DNA,操作也很简单。但是我忘记是哪家公司的了,现在用的是TakaRa的,真的很麻烦。希望哪位高人指点下,给我介绍中快速提取细菌DNA的试剂盒,不要那种操作很麻烦,需要几个小时的。谢谢 展开
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关于土壤细菌基因组DNA做PCR的问题!!!
各位能帮上忙的大侠们好,我用酚仿法从土壤中提取出基因组DNA用于做PCR,但就是没有产物,但是另外从大肠杆菌中提取的DNA扩增没有任何问题,效果非常好。所以可以说明是模板出了问题,... 各位能帮上忙的大侠们好,我用酚仿法从土壤中提取出基因组DNA用于做PCR,但就是没有产物,但是另外从大肠杆菌中提取的DNA扩增没有任何问题,效果非常好。所以可以说明是模板出了问题,可是模板到底出了什么问题,还请教大侠们告知一二,附图是我通过胶回收得来的土壤细菌的模板DNA,23000的marker!~ 感激!!! 展开
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怎样解决伺服电机震荡问题?
伺服电机采用位置控制模式,制动器一解锁就开始震荡,但是我利用试运行功能的话就不振荡。1.请问试运行算起什么控制模式呢?2.如果我换成速度或者转矩模式能解决震荡问题吗?不是闭环... 伺服电机采用位置控制模式,制动器一解锁就开始震荡,但是我利用试运行功能的话就不振荡。1.请问试运行算起什么控制模式呢?2.如果我换成速度或者转矩模式能解决震荡问题吗? 不是闭环,设备没运动,只是制动器解除就开始震荡,而且越来越大。 展开
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大肠杆菌基因组DNA提取和质粒DNA提取的异同点
 
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旋转蒸发仪遇到故障如何解决

旋转蒸发仪主要用于减压条件下连续蒸馏易挥发性溶剂,广泛应用于化学、生物医药等领域。作为平日经常要用到的仪器,难免会发生各种各样的故障,掌握故障排除解决的方法很重要。接下来带您了解下旋转蒸发仪的常见故障,遇到该如何解决。

1、打开电源开关,电源指示灯不亮

(1)检查电源线是否接通或接错。

(2)电源开关发生故障;请与厂家联系;

(3)电路板发生故障;请与厂家联系。

2、真空抽不上

(1)容器内有溶剂,受饱和蒸汽压限制;放空溶剂,空瓶试。

(2)真空泵抽真空能力减弱;检修真空泵。

(3)真空管松动;进行逐断排查。

3、运行时发出异常声音

(1)密封圈磨损,更换新的密封圈。

(2)电动机出现故障或者内部齿轮磨损,请与厂家进行联系。

4、浴锅不加热

(1)温控仪中"OUT"或"ON"绿色指示灯亮但不加热,更换加热圈,更换固态电器或继电板。

(2)温控仪上显示"OVER"或"000";检测探头接线或更新探头。


2020-10-27 11:03:39 729 0
空气发生器遇到故障如何解决?
       空气发生器采用全封闭式压缩机为动力,将自然空气经过三级净化,除去空气中的水份、油污和杂质,经稳压装置输出稳定、洁净的空气,具有输出压力稳定、噪音低、净化能力强的特点,是替代高压空气钢瓶的理想空气源。该产品不仅可以满足各种型号国产和进口及各类分析实验室的使用,而且也可以作为空气源。
  空气发生器气路系统采用稳压和过压保护装置,提高了气体压力的稳定性,确保了仪器使用的安全可靠。设有排水和粉尘过滤装置,并采用不锈钢储气罐代替碳钢储气罐,大大提高了压缩空气的纯净度,完全可以满足进口和国产气相色谱仪的配套使用。
  空气发生器特点:
  1、体积小,更大的集成度,节省实验室空间。
  2、空气输出两级稳压,三级过滤,氢气输出三级过滤,气体纯净。
  3、更长的寿命设计,替代钢瓶,经济划算。
  4、氢气电解池筒式结构,自动防返碱,气路系统设有过压保护装置,完全无安全隐患。
  5、本型号为碱液电解,进口压缩机。
  空气发生器的常见故障分析:
  1.仪器运行时有噪音:
  可能原因:压缩机响,声音大影响使用,要更换,一般属运输摔坏或使用周期长使压缩机缺油造成的。电磁阀响,调整电磁阀上方压帽松紧度,若不行,拆开电磁阀用酒精对内部件清洗(电磁阀位于仪器后上角)。
  2.输出压力不稳:
  可能原因:仪器后面板上黑色旋钮为稳压旋钮,顺时针方向升压逆时针方向降压,若达不到理想的效果,则需对稳压阀内部进行清洗,用开口17的扳手旋下后压帽取出弹簧、针,用棉花蘸酒精予以清洗,特别是小黑垫上一定要处理干净。
  3.开机不工作:
  空气发生器可能原因:工作指示灯不亮,应检查电源插座是否插牢、灯线是否脱落、保险是否烧掉。对于使用周期较长的过滤器,要定期清洗确保畅通。
2020-12-16 13:25:01 440 0

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