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核酸的琼脂糖凝胶电泳为什么要用电泳缓冲液配制凝胶

yu湚乱 2012-12-16 21:16:46 471  浏览
  •  

参与评论

全部评论(3条)

  • 剩空失忆霜7Z 2012-12-17 00:00:00
    1.含氮碱基有一定影响 2.电流过大时凝胶溶液温度升高,溶液蒸发,会造成电泳异常

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  • 活宝飞翔的萝卜 2012-12-17 00:00:00
    保持合适的pH和离子强度,使电泳顺利进行。如果配胶的缓冲液与电泳缓冲液不同,电泳时凝胶可能会变形。

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  • Us北京噻车景 2016-12-02 02:14:15
    主要的原因是保持琼脂凝胶和周围的缓冲体系保持相同的pH值,当然这种pH值是前人优化过的,Z有利于核酸分离和稳定的pH条件;如果凝胶和缓冲体系的pH存在较大的差异,势必会影响核酸的分离效果。

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核酸的琼脂糖凝胶电泳为什么要用电泳缓冲液配制凝胶
 
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琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理及产品优势

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法,其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。

琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的,当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。

经过化学修饰的低熔点的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于核酸片段的电泳检测。

琼脂糖凝胶电泳检测的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出电泳分离范围),该方法的可信度非常高。

核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,琼脂糖凝胶电泳即根据这个原理对核酸进行区分。

核酸分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在结构上具有重复性,长度相同的核酸链几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

此外,含有琼脂糖的凝胶具有网状结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在琼脂糖凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。

在同样电场的强度下,核酸分子的迁移速度取决于核酸分子本身的大小和构型以及琼脂糖凝胶的浓度,简而言之,分子量较大的核酸迁移速度较慢,分子量较小的核酸迁移速度较快,这就是应用凝胶电泳技术分离核酸片段的基本原理。

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