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为什么血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳只出来两条带

1422262308 2016-05-13 00:32:42 1881  浏览
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全部评论(2条)

  • 美玲*wang 2018-05-15 00:00:00
    前β脂蛋白得半衰期只有几个小时,乳糜微粒的半衰期仅十多分钟,所以在我们进行实验的时候,这两种成分早就代谢完了。

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  • toyboy3 2016-05-14 00:00:00
    血液中的脂蛋白不是单一的分子形式,其脂类和蛋白质的组成有很大的差异,因此血液中的脂蛋白存在多种形式。根据它们各自的特性采用不同的分类方法,可将它们进行多种分类,一般采用电泳法和超速离心法进行血浆脂蛋白的分类。 (一)电泳分类法 本法根据不同脂蛋白所带表面电荷不同,在一定外加电场作用下,电泳迁移率不同,可将血浆脂蛋白分为四类。如以硝酸纤维素薄膜为支持物,电泳结果是:α-脂蛋白泳动Z快,相当于α1-球蛋白的位置;前β脂蛋白次之,相当于α2-球蛋白位置;β-脂蛋白泳动在前-β之后,相当于β-球蛋白的位置;乳糜微粒停留在点样的位置上 (二)超速离心法 本法依据不同脂蛋白中蛋白质脂类成分所占比例不同,因而分子密度不同(甘油三酯含量多者密度低,蛋白质含量多的分子密度高),在一定离心力作用下,分子沉降速度或漂浮率不同,将脂蛋白分为四类,即乳糜微粒(chylomicrons)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)和高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL);分别相当于电泳分离中的乳糜微粒、前β脂蛋白、β脂蛋白和α脂蛋白。除上述几类脂蛋白以外,还有一种中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein,IDL)其密度位于VLDL与LDL之间,这是VLDL代谢的中间产物。HDL在代谢过程中分子中蛋白与脂类成分有变化,可将HDL再分为HDL1、HDL2与HDL3。HDL1是在高胆固醇膳食时才出现,HDL2为成熟的HDL,HDL3为新生的HDL,其分子中蛋白成分多。 血浆中的游离中短链脂肪酸可与血浆白蛋白结合而被运输,称之为脂酸白蛋白。由于脂类染色时脂肪酸不着色,所以不易观察,实际上它的位置与白蛋白相当。

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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法,其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。

琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的,当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。

经过化学修饰的低熔点的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于核酸片段的电泳检测。

琼脂糖凝胶电泳检测的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出电泳分离范围),该方法的可信度非常高。

核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,琼脂糖凝胶电泳即根据这个原理对核酸进行区分。

核酸分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在结构上具有重复性,长度相同的核酸链几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

此外,含有琼脂糖的凝胶具有网状结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在琼脂糖凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。

在同样电场的强度下,核酸分子的迁移速度取决于核酸分子本身的大小和构型以及琼脂糖凝胶的浓度,简而言之,分子量较大的核酸迁移速度较慢,分子量较小的核酸迁移速度较快,这就是应用凝胶电泳技术分离核酸片段的基本原理。

德晟公司产品特点及优势:

您不用再四处采购琼脂糖、核酸染料、电泳液和loading buffer等试剂,一个试剂盒全部解决。

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b. 本试剂盒专门配备了高压快速电泳液,如果您的核酸样品片段在2000bp以下,电泳的快慢您可以随时掌控,调整电压即可,一般的mini胶最快可以5-10分钟完成;如果您在实验中使用的Marker或者核酸样品条带多、片段长(核酸样品片段大于2000bp),您就需要根据实际情况,调节到合适的低压,或仍使用您原来的低压电泳条件。

3. 用本产品电泳得到的DNA片段进行胶回收,不影响后续的DNA连接等反应。

运输及保存:4°C保存和运输,有效期3个月,切勿放置于0°C以下或者常温以上,这样试剂盒内的预制胶就会冻裂或变形,影响您的使用。


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