与蛋白质结合了的DNA片段用琼脂糖凝胶电泳能看出条带阻滞吗?
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前提:蛋白是已知纯化好的蛋白,DNA是已知的纯化好的DNA片段;且在适当结合体系里使其发生结合反应。 问题:到底该蛋白和该DNA片段反应了没有,可以用琼脂糖凝胶电泳鉴定吗?结合蛋白质的DNA片段会跑得慢一些,从而得出结论。还是说,结合产物在琼脂糖中会分... 前提:蛋白是已知纯化好的蛋白,DNA是已知的纯化好的DNA片段;且在适当结合体系里使其发生结合反应。 问题:到底该蛋白和该DNA片段反应了没有,可以用琼脂糖凝胶电泳鉴定吗?结合蛋白质的DNA片段会跑得慢一些,从而得出结论。还是说,结合产物在琼脂糖中会分离而不能使用这种方法鉴定吗? 实验室没有条件做放射性标记等操作,正常的DNA凝胶阻滞实验不太可取。想问有没有简单可行的方法,可以鉴定蛋白质和DNA发生了结合,用于大量筛选。 求指点!大谢! 展开
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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法,其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。
琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的,当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。
经过化学修饰的低熔点的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于核酸片段的电泳检测。
琼脂糖凝胶电泳检测的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出电泳分离范围),该方法的可信度非常高。
核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,琼脂糖凝胶电泳即根据这个原理对核酸进行区分。
核酸分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在结构上具有重复性,长度相同的核酸链几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
此外,含有琼脂糖的凝胶具有网状结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在琼脂糖凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。
在同样电场的强度下,核酸分子的迁移速度取决于核酸分子本身的大小和构型以及琼脂糖凝胶的浓度,简而言之,分子量较大的核酸迁移速度较慢,分子量较小的核酸迁移速度较快,这就是应用凝胶电泳技术分离核酸片段的基本原理。
德晟公司产品特点及优势:
您不用再四处采购琼脂糖、核酸染料、电泳液和loading buffer等试剂,一个试剂盒全部解决。
本试剂盒可以给您节省一个小时左右的实验时间。
a. 省去了您制胶的繁琐,并且预制胶是核酸染料预染的,无需电泳液染色或后染色。简捷方便,即开即用。
b. 本试剂盒专门配备了高压快速电泳液,如果您的核酸样品片段在2000bp以下,电泳的快慢您可以随时掌控,调整电压即可,一般的mini胶最快可以5-10分钟完成;如果您在实验中使用的Marker或者核酸样品条带多、片段长(核酸样品片段大于2000bp),您就需要根据实际情况,调节到合适的低压,或仍使用您原来的低压电泳条件。
3. 用本产品电泳得到的DNA片段进行胶回收,不影响后续的DNA连接等反应。
运输及保存:4°C保存和运输,有效期3个月,切勿放置于0°C以下或者常温以上,这样试剂盒内的预制胶就会冻裂或变形,影响您的使用。
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