如何用溶胶凝胶装柱?

黎约神风5958 2011-05-21 05:42:14 641 浏览

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韩野吧签到呵护 2011-05-22 00:00:00

装柱前要将色谱柱垂直固定在支架上。因为干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体积差别很大，因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。实验一般使用的是交联葡聚糖凝胶 (Sephadex G-75）。“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时可轻轻敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，必须重装。装填完后，立即连接缓冲液洗脱瓶，在约50 cm高的操作压下，用300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡凝胶12 h，使凝胶装填紧密。

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