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- muselove8 2017-12-15 00:00:00
- 需要,辅助确定细胞核位置。义翘典型结果如下,可以作为参考。
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- w630371263 2016-04-07 00:00:00
- 核定位的蛋白做免疫荧光需要dapi染色。 1.实验原理 免疫染色的实验原理类似于Western Blotting,两者都是运用抗体的特异性识别作用来显示目的蛋白,但是由于免疫染色需要在原位进行,而且蛋白没有经过富集,因此其实验难度较高。 实验的基本原理是:利用固定剂(通常是甲醛或多聚甲醛)将细胞固定,使得细胞膜的通透性大大增加,并且利用Triton-X-100使得一部分膜蛋白变性,从而使通透性进一步加强。利用正常羊血清封闭,可以令许多蛋白先与血清内的非特异性抗体结合,而特异性的抗体由于动力学的关系可以通过竞争性的反应与目的蛋白结合,这一过程可以保证抗体识别的特异性。 二抗可以特异性识别一抗的Fc区域,利用二抗连接不同的荧光基团,就可以在荧光显微镜下观察到不同的荧光,从而显示目的基因的表达情况。 另外,免疫荧光实验由于其较高的敏感性可以显示出基因表达的亚细胞情况(核内,核外,膜上以及一些较大的细胞器上),所以通常被用来作为基因定位的方法。 DAPI的中文名称是4,6-联脒-2-苯基吲哚,是一种常用的荧光染料,其作用机理与溴化乙锭(EB)等染色剂的机理类似:它们与DNA双螺旋的凹槽部分可以发生相互作用,从而与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好UV(紫外光)的激发波长是356nm,使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。 Jagielski M. et. Al在1976年首次运用该技术检测细胞培养中的支原体感染。后来随着技术的进步,该技术被运用于各种微生物的检测、生长监测,胚胎发育过程的检测,细胞周期的检测和各种核定位的实验。
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01、故障排除
免疫荧光染色是一种非常敏感的方法,需要大量的经验和不断优化。方案中微小的变化可以显着改变结果。如果遇到低信号、无信号或高背景,请参阅以下故障排除指南:
高背景:
02、ibidi解决方案
用于倒置显微镜的具有盖玻片底部的ibidi μ-Slides腔室载玻片和μ-Dishes培养皿有多种几何形状可供选择,可满足您对免疫细胞化学的任何特定需求。所有免疫荧光染色步骤都可以直接在载玻片或培养皿中进行。
ibidi通道载玻片的几何形状非常适合精确交换少量的培养基,这在免疫细胞化学染色过程中是必要的。此外,通道µ-Slides的盖玻片底部无需额外的盖玻片。
在ibidi腔室载玻片中,带有可移除的硅胶培养小室安装在标准玻璃盖玻片上,非常适合长时间样品保存。
03、低信号或无信号
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本生阐述:普鲁士蓝染色试剂盒的染色原理(伊红法、中性红法、核固红法)
普鲁士蓝染色试剂盒分为三种包括伊红法、中性红法、核固红法等。染色原理基本相同,根据复染时染色液的不同区别为这3种方法。
含铁血黄素(hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其含铁、金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussianblue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁*化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内或间质内,主要显示三价铁盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应,是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法。
一、染色原理
亚铁*化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来,三价铁与亚铁*化钾反应,生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁*化物普鲁士蓝,所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁*化物是一种很稳定的化合物,在反应后可用红色染色剂进行复染,如核固红、伊红、中性红等。
Perls stain常用于显示局部组织内的各种出血性病变,常见于吞噬细胞内。在判断含铁血黄素沉积时,用Perls反应可以得到证实, 该染色法可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广,可以进行复染。
二、复染特点
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,伊红法),其复染液采用伊红染色液,也是常用的复染液,该复染液染色时间较核固红染色液要短。
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,核固红法),该染色液的复染液采用核固红,是最经典、最常用的复染液。
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,中性红法),该染色液的复染液采用中性红,该复染液染色时间比较灵活,可以相应缩短。
三、染色结果
含铁血黄素或三价铁 蓝色
细胞核和其他组织 红色
普鲁士蓝染色试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。
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