老师，你好，我想问克隆基因CDS区的时候，要设引物，设引物的时候，怎

萌爪医生 2017-08-11 00:38:37 417 浏览

老师，你好，我想问克隆基因CDS区的时候，要设引物，设引物的时候，怎么设比较好

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一只小鸟5711 2017-08-12 00:00:00

有基因，你就可以直接上genebank其序列，到全序列，你需要扩增的CDS区，也就是编码区，可以全外显子扩增，这样简单一点，也可以做cDNA克隆，然后再做，前者的话就可以直接根据其基因序列NG号设计引物，如果是做CDNA的话就根据其mRNA的序列NM号设计引物. 你是根据其cDNA设计的引物，你需要下提取mRNA，然后反转录成cDNA，才能够扩增出来.如果是根据其基因序列设计的，你需要先将你的目的序列定位到GENE上，然后设计引物

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老师，你好，我想问克隆基因CDS区的时候，要设引物，设引物的时候，怎: 老师，你好，我想问克隆基因CDS区的时候，要设引物，设引物的时候，怎么设比较好

如何设计基因cds序列的pcr引物:

求助，只有CDS序列，如何设计引物扩增全长基因:

用primer-blast检测引物的时候为什么比对结果中出现要扩增基因的mRNA序列？: 用cDNA设计的隐物

利用PCR技术扩增目的基因，引物是什么？引物是什么:

如何去除单引物扩增（单引物扩增，基因，澹:

如何设计扩增基因全长的引物:

扩增4kb的基因怎么设计引物: 要扩增一个4kb左右的基因，应该怎么设计引物呢，用什么方法扩增呢？非常感谢！

如何通过引物比对基因的目的片段:

如何设计引物，扩增目的基因的ORF:

日立F-7000荧光光谱仪测量化学发光时候的参数怎么设？: 正常的化学发光只应该有个检测器不就好了。可是这个仪器为什么建立方法后，还要求设置激发光啊，又不是测试荧光。按理来说应该只测发射光不就好了。不理解啊。还是说不用波长模式，而用别的模式测。还有这个仪器，在用软件设置同步荧光的时候，为什么不是设步... 正常的化学发光只应该有个检测器不就好了。可是这个仪器为什么建立方法后，还要求设置激发光啊，又不是测试荧光。按理来说应该只测发射光不就好了。不理解啊。还是说不用波长模式，而用别的模式测。还有这个仪器，在用软件设置同步荧光的时候，为什么不是设步长和范围，根本没有设步长的地方啊，不能设的话，那还是同步荧光么。来个明白点的帮忙说一下。答好的，我追加分，要是来混分的就算了，要是没人能答，我认可关闭提问，也不给Z佳答案的。展开

普通PCR引物 VS qPCR 引物

导读

说起引物，大家都再熟悉不过了。引物，在核苷酸聚合作用的起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中，引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。无论是做普通PCR还是荧光定量PCR，设计合适的引物是非常关键的一步。

普通PCR和荧光定量PCR的检测方式具有较大的差别。荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通PCR通过检测插入DNA中核酸染料的量来测定PCR产物量。荧光定量PCR可以通过扩增曲线进行精确定量，普通PCR则是通过电泳的方式进行定性分析。那么在普通PCR和荧光定量PCR的引物设计方面，有什么相同点和不同点呢？今天小编就给大家汇总一下。

相同处：

▶ 序列的查找是一致的。

▶ 序列选取应在基因的保守区段。

▶ 选取合适的扩增片段大小。

▶ 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对。

▶ 避免引物自身形成环状发卡结构。

▶ Tm值在55－65℃，GC含量在40%－60%。

▶ 引物之间的Tm相差避免超过2℃。

▶ 引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。

不同处：

荧光定量PCR 引物

▶ PCR产物长度：要求在300bp以内，一般选80-150bp之间。