流式检测cd81 ，淋巴细胞分离后，加抗体之前还需要加什么?

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  秩jLpT欠慈藤 2017-05-04 00:00:00

  你既然还在问要加什么，那我估计你的抗体浓度titration也没做吧。这个实验很可能就会失败的。 做流式的实验，在使用任何一个抗体之前，都需要做titration。简单的说就是找出每个抗体在你所使用的染色条件下的Z佳工作浓度。抗体浓度没有优化的情况下，要么会增加阴性细胞的非特异信号，要么阳性细胞的信号变弱。 具体的步骤就是你准备好5-6个样本管，细胞量和浓度都一致，用不同浓度的抗体来染色。上机检测后就算染色指数（SI）。 SI=(阳性细胞群的平均荧光强度-阴性细胞群平均荧光强度)/(2*阴性细胞群荧光强度的标准差） SIZ高的那个就是Z佳抗体工作浓度。 这个做好以后才考虑做其他的实验。其他要考虑的因素有是否要封闭，是否要共染其他标记，是否要做补偿。还有，要染死细胞以排除在分析结果之外等等。

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