微生物方法学验证验证结果怎么填写

简介 

       在生产消费品时，有效地清洁生产设备对质量控制 来说至关重要。清洁工艺的目标是降低产品污染的 风险，有效的清洁工艺可以将风险降低到可接受的 水平，以确保产品质量。如果无法衡量和验证清洁 工艺的有效性，就无法了解产品质量和消费者安全 的风险。 

       根据美国食品和药品管理局（FDA）提供的数据， 2017 年食品和饮料行业产品召回的主要原因是微 生物对产品的污染。对于减少和消除微生物污染来说，强有力的清洁工艺至关重要，因此监控清洁工 艺有效性的方法同样至关重要。  

       总有机碳（TOC）分析是消费品生产商广泛采用的非专属方法，用于检测产品、清洁剂、以及微生物 等污染物的残留量。 

       为了证明 TOC 分析法适用于预期用途，我们对设 备清洁之后可能尚存的残留物进行了回收和线性研究。工厂通常会测试化学污染物和化合物，但很少用 TOC 分析法来测试微生物的回收率。本文旨在探讨对于清洁验证和确认，TOC 分析法能否证明 可接受的微生物污染回收率和线性。

实验设计和设置 

       我们同科罗拉多大学博尔德分校合作，用一整夜时 间在胰酶大豆肉汤中培养 100 毫升枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis）。以 4500 转/分钟的速度将Z 终培养物的十毫升等分试样离心分离 10 分钟，形 成细胞沉淀。 在每次离心之间，倒出上面的液体，用涡旋混合方 法用 10 毫升超纯水使沉淀细胞重新悬浮。重复此 过程 7 次。设计淋洗循环以除去细胞培养基带来的 TOC 污染。在第 7 次淋洗循环后，根据已有的 4,6- 二氨基 -2- 苯 基 吲 哚 （ 4,6-diaminidino-2-phenylindole，DAPI）染色任务来对细胞进行重 新悬浮、稀释、计数（见图 1）。 

       确定细胞密度之后，用 Sievers* M9 TOC 分析仪 测量 1 ppm 确认标样组，然后进行三次细胞浓度 稀释。在测量 TOC 之后，用 0.45μm 灭菌过滤器 过滤剩余样品，彻底除去细菌（见图 2）。然后 再次测量 TOC 以确定每个样品的非细胞背景 TOC（见图 2）。

图 1： 枯草芽孢杆菌在细胞计数的荧光显微镜成像

图 2：枯草芽孢杆菌的过滤过程

结果

表 1：微生物细胞密度与 TOC 的相关性结果

       表 1 和图 3 是微生物 TOC 相关性研究的结果。线性趋势线的 R2 值为 0.9981，表明实测细胞密度有良好的线性趋势。根据图 3 所示的线性拟合趋势线方程，定义为 3 倍噪声的检测水平（LOD，Level  of Detection）为 2.74E + 06 细胞/mL。此外，根据线性拟合趋势线和 M9 仪器规格，50 ppm 的Z 大仪器定量限为 2.49E + 08 细胞/mL。 

       在进行微生物 TOC 定量之后，分别将 1 毫升的每 种细胞密度溶液放在不锈钢试样板上进行试样污染， 然后使试样干燥。此试样污染的目的是确定微生物 TOC 相关结果的目视检测限。图 4 是微生物试样 污染图。

图 3：微生物细胞密度与 TOC 的线性关系

图 4：微生物试样板污染 (A) 5.8E+07 细胞/mL (B) 5.8E+06 细胞/mL (C) 5.8E+05 细胞/mL

讨论与结论

       微生物 TOC 相关结果和试样污染图都说明了连续 监测已有的清洁工艺有效性的重要性。在理想光线 下，很容易在试样板上看到Z 高细胞密度（5.8E +  07 细胞/mL）的污染斑。而对于较低细胞密度， 即使光线很好，也很难在试样板上看到污染斑。这表明除了强有力的清洁工艺之外，还需要用非目测的方法来测试清洁工艺的有效性。 

       根据收集的数据，可以想象用于生产消费品的设备上仍有显着微生物污染，却仅凭目视检查就被投放 到生产中，导致严重后果。因此必须连续监测已有 的清洁工艺的有效性，才能降低产品质量风险和消 费者安全风险。 

       Z 后，由于微生物分子组成的不确定性，很难确定微生物溶液的回收率。本研究根据先前在确定活性 微生物细胞中的碳含量时的发现，旨在确定微生物 溶液的理论回收率。图 5 是理论微生物 TOC 产出 量的计算过程。基于每个细胞的碳原子参考数， 5.8E + 07 细胞/mL 的理论 TOC 浓度为 11.6 ppm。

图 5：理论微生物 TOC 产出量的维度分析

      在本文的实验中，测量到 5.8E + 07 细胞/mL 的 TOC 实际回收值为 9.13 ppm，对挑战性的化合 物的回收率为 78.7％，从而证明实验方法是成功的。 

       总之，本研究用 Sievers M9 TOC 分析仪演示了 在清洁验证和确认时的细胞密度同目视检测限的 关系，成功地证实了微生物 TOC 回收率。实验 数据支持使用 Sievers TOC 分析仪来确认设备清 洁度，同时表明除了目视检查之外还须考虑使用 监测微生物污染的定量方法。 TOC 分析法是测 量残留物、监测清洁工艺、降低总体风险的有效 方法。苏伊士公司提供 Sievers 系列产品，包括 能够解决您的一切清洁验证和确认需求的 TOC 解决方案、服务、支持。

在工业检测领域，冲击缺口投影仪作为一种重要的实验设备，用于评估材料的冲击韧性。如何准确验证冲击缺口投影仪的性能和精度，是确保检测结果可靠性和数据准确性的重要环节。本文将深入探讨冲击缺口投影仪的验证方法，包括验证的基本原理、常见步骤以及实操中的注意事项，旨在帮助相关从业人员提高设备的使用效率与检测精度。

一、冲击缺口投影仪的基本原理

冲击缺口投影仪主要用于分析样品表面缺口的形状与尺寸，通过高倍放大样品的缺口部位，投影出清晰的图像，供分析人员进行进一步的观察和评估。在金属材料冲击试验中，这一设备可以帮助用户定量地评估冲击试验样品的断口形貌，从而推测材料的冲击韧性和强度特性。

二、冲击缺口投影仪验证的必要性

验证冲击缺口投影仪的性能，目的是确保其测量精度和重复性，避免因设备故障或设置不当导致测试数据的不准确。设备的验证不仅可以提高检测结果的可靠性，还能延长投影仪的使用寿命，降低维护成本。

三、冲击缺口投影仪的验证方法

1. 设备校准 在验证过程中，首先需要对投影仪进行校准，确保其光学系统、投影比率等符合标准要求。
2. 分辨率测试 进行分辨率测试时，需通过高精度的标准图像或者人工设定的标尺，验证投影仪在不同放大倍数下的分辨能力。通过测量投影图像中能分辨的小细节尺寸，评估投影仪的实际分辨率与设计标准的一致性。
3. 光源稳定性检查投影仪的光源稳定性直接影响图像的清晰度和细节呈现。通过观察投影仪光源亮度、均匀性和稳定性，可以确认是否存在因光源波动导致的测量误差。必要时，更换光源或调整光源角度，以确保稳定输出。
4. 误差校正与偏差修正在验证过程中，需要针对投影仪测量误差进行校正。通过对比已知标准样品与投影结果，评估是否存在几何误差、角度偏差或光学畸变，并进行适当的修正。

四、常见问题及解决方案

1. 图像模糊若图像模糊，可能是由于焦距调整不当或光源亮度不足。此时，检查光源设置，并调整投影仪的焦距，确保样品图像清晰可见。
2. 投影不均匀投影不均匀可能是由于投影仪的镜头有污渍或光源分布不均所致。定期清洁镜头，并检查光源均匀性，必要时进行光源调整。
3. 测量误差测量误差可能是由设备本身的精度问题引起的，定期进行校准和验证，以消除因设备老化或环境变化造成的误差。

五、验证结果的评估与总结

完成冲击缺口投影仪的验证后，应该对所有测试结果进行全面分析和评估。验证过程中出现的偏差需及时记录，并通过调整设备设置或更换老化部件加以修正。