基因扩增仪的选购指南

　　基因扩增仪因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。面对各种不同性能的基因扩增仪，又该如何选择呢?

基因扩增仪的选购误区

　　误区一：仪器通道越多越好

　　随着基因扩增技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，基因扩增仪也不能幸免。从Z初ABI公司推出的单通道基因扩增仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道基因扩增仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。

　　在使用有些厂家5通道的基因扩增仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX或专用的Referencedye，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。

　　考虑多重基因扩增仪的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重基因扩增仪并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。

　　误区二：基因扩增仪无需梯度功能

　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。

　　梯度基因扩增仪的出现部分解决了一些问题，在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出Z适合的反应条件。使用有梯度功能的基因扩增仪可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提GX率，又节省实验成本。

基因扩增仪的选购要点

　　1、基因扩增仪的检测通量

　　在购买定量基因扩增仪的时候，要根据实验室的需要来选择不同通量的仪器。基因扩增仪的检测通量小到16个多到384个。

　　如果进行一般的基因表达研究或病原体检测，实在不必购买昂贵的基因扩增仪，96孔的通量足够用。

　　如果需要寻找要新药靶点和疾病标记的实验室可以考虑购买384孔板的基因扩增仪，假如经费有限无法购买384孔板基因扩增仪的实验室，可以考虑购买运行速度快(带有FAST模块)的96孔板基因扩增仪。

　　2、硬件设计特点

　　基因扩增仪主要有传统的96孔板式、创新的离心式等，每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾。

　　传统的96孔板的PCR可以容纳的样本量大，而且无需特殊的耗材。有些传统的96孔板的基因扩增仪采用卤钨灯激发、CCD检测，这些光学结构在96孔板的顶部，每个样品孔距光源和检测器的光程各不相同——边缘效应，对结果产生影响。为了保证精确、准确的实验结果，这类仪器在实验过程中通常会使用ROX或专用的Referencedye作为参照校正实验结果。

　　卤钨灯的使用寿命短、更换成本较高已经成为很多用户头痛的问题。在实验过程中卤钨灯作为一种热光源，产生较多热能对实验结果有一定的影响。CCDZda的优点就是可以同时扫描所有样品中的荧光信号，但是灵敏度较低，而且同时检测样品间的荧光信号存在干扰。

　　创新的离心式的基因扩增仪通常选用LED激发、PMT检测，离心式的设计上避免了边缘效应。LED光源是冷光源对实验没有影响，因此无需采用其他荧光染料校正，而且使用寿命长无需经常更换。PMT每次只能收集单个荧光信号，但是检测灵敏度高。这类基因扩增仪运行速度非常快，但也存在样本量小、耗材昂贵、没有梯度功能、存在时间积分等缺点。

　　3、温度控制

　　对基因扩增仪来说，温度控制主要是指温度的准确性、均匀性、以及升降温速度，对梯度基因扩增仪来说，除了温度的准确性和均匀性、升降温速度以外，还必须考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。

　　温度的准确性是指样品孔温度与设定温度的一致性，它直接关系到实验的成败。由于PCR是一个几何级数扩增的过程，扩增过程中退火温度的细微变化会被放大而直接影响结果，不论是变性、退火还是延伸都需要准确控制温度，对退火温度而言温控显的尤为重要，有时1度甚至0.5度的差异也能决定实验的成功与失败，因而对基因扩增仪而言温度控制就意味着质量。

　　温度的均匀性是指样品孔间的温度差异，它关系到在不同样品孔进行反应结果的一致性。我们在实验中发现有时用同样的样品，同样的PCR反应程序，Z后的结果竟然差异非常明显，或许就是因为不同位置的温度不均一性所致。基因扩增仪的温度均匀性不好，特别是Z外周的样品孔情况更差，很有可能影响实验结果。

　　温度控制还有指针-升降温的速度。更快的升降温速度，可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，能提高PCR反应特异性。因此从本质而言温控方式就从以前相对稳定耐用的机械式转向了升降温更快速的半导体。除了基因扩增仪本身的原因，影响升降温速度的还有制作承托样品管的基座模块的材料的导热性。

　　4、运行速度

　　在基因扩增仪的众多技术参数中，升降温速度也是厂家喜欢大力宣传的指标。更快的升降温，可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，提高基因扩增仪的特异性。