在1963年,美国洛克菲勒大学教授Bruce Merrifield 发明的多肽固相合成技术(SPPS)是多肽合成领域的一个重大突破,对化学,生化,医药,免疫和基因科学等学科和领域都起了巨大的促进作用。 他本人也因此项发明荣获1984诺贝尔化学奖。
运行原理
固相合成为多肽合成仪的反应原理,在密闭的防爆玻璃反应器中,将氨基酸根据已知顺序(通常由C端-羧基端到N端-氨基端)不断添加、反应、合成,操作,从而使多肽载体Z终能够得到。每步产品提纯的难度因为固相合成法大大的减轻了,应当对参加反应的氨基酸的侧链进行保护,从而避免发生副作用。羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化。固相合成包括Fmoc和tBoc两种方法。因为使用Fmoc的优势要远高于tBoc,如今Fmoc法成为了大多数企业优先采用的方法。然而,一些短肽,很多企业依然采用产率较高的tBoc法。
具体合成步骤
1.去保护
Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂将氨基的保护基团去除。
2.激活和交联
活化剂活化下一个氨基酸的羧。活化的单体与游离的氨基反应交联,使肽键形成。在此步骤上反应在大量的超浓度试剂的驱使之下完成。这两步反应反复循环直到完成合成。
3.洗脱和脱保护
从柱子上洗脱下来多肽,一种脱保护剂(TFA)将其保护基团洗脱和脱保护。
多肽合成仪的现状
二十世纪以来,升级产品和新产品经各大合成仪制造公司相继推出。
Intavis公司进一步提升了UV监测功能,能够在整个多肽合成反应中对多肽反应液的UV吸收信号不间断的进行监测,同时软件能够通过监测到的信号对氨基酸交联和清洗步骤以及脱保护的参数进行自动优化,使得合成难度高的多肽合成率极大的提升了。
Advanced ChemTech公司重组为两家新公司,其前身的生产步骤由Aapptec公司延续了,Focus XC三通道合成仪被推出。另外一家公司CEM以蛋白质有机反应设备的制造著称,微波多肽合成仪被推出。其采用微波加热方式,使反应的速度得到了大大的提高,然而相应的也增加了很多的副反应。
Tribute双通道多肽合成仪经Protein Technologies公司,在产品中融入了“短信通知”功能,使得用户与设备之间的紧密感增加,更加的人性化。
C S Bio公司统一升级了从研发型到生产型设备的UV Online Monitor系统,每一部氨基酸偶联反应的状态用户都能够直观的看到并且Z佳的合成效果与工艺能够按照数据调整出来。
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