HBx蛋白通过调控原代小鼠肝细胞周期促进HBV复制的分子机

本文由 上海高创化学科技有限公司 整理汇编

2013-03-07 00:00 295阅读次数

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• HBx蛋白通过调控原代小鼠肝细胞周期促进HBV复制的分子机

  HBx蛋白通过调控原代小鼠肝细胞周期促进HBV复制的分子机[详细]

  2013-03-07 00:00

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• FH0116-表达HBV病毒的人肝细胞；HepG2.2.15

  FH0116-表达HBV病毒的人肝细胞；HepG2.2.15[详细]

  2024-05-30 09:33

  应用文章

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• Nature:胞外基质蛋白Agrin促进小鼠心脏再生

  心脏病仍是全世界范围内死亡的主要原因。当遭受心脏疾病时，心肌细胞（CMs）会被瘀痕组织替换，瘀痕组织不能完成收缩，因此不能参与泵血，导致剩余健康心肌组织压力增大，Z终导致心力衰竭。在低等脊椎动物如蝾螈和斑马鱼中，心肌细胞能够高效的再生受损心脏。但是，在哺乳动物中，有丝分裂后的成熟心肌细胞对受损组织的修复能力有限，再生和修复损伤能力只能持续到出生的时候，此后，这种能力便会永久消失。有趣的是，在新生小鼠中，心肌细胞增殖在出生一周之内足以修复心脏损伤，这一周的时间可以给科学家提供一个时间窗口来探究促进心脏再生的线索。今天，与大家分享一篇2017年由以色列威兹曼科学研究院的Eldad Tahzor 教授发表在Nature（IF=40.137）上的文章《The extracellular matrix protein Agrin promotes heart regenerationin mice》，作者发现新生小鼠心脏中的聚集蛋白(Agrin)似乎可以控制心肌细胞的再生过程。当将其注射到遭受心脏病发作的成年小鼠心脏中时，Agrin可以开启心肌细胞再生功能，修复受损心肌细胞。[详细]

  2024-09-27 18:48

  应用文章

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• FH0338-小鼠肝细胞；AML12

  FH0338-小鼠肝细胞；AML12[详细]

  2024-05-30 09:33

  应用文章

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• 人复制蛋白A酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  本试剂盒仅供研究使用。人复制蛋白A酶联免疫分析试剂盒检测范围：96T5pg/ml-200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中复制蛋白A(RPA-70)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人复制蛋白A(RPA-70)水平。用纯化的人复制蛋白A(RPA-70)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入复制蛋白A(RPA-70)，再与HRP标记的复制蛋白A(RPA-70)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的复制蛋白A(RPA-70)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人复制蛋白A(RPA-70)浓度。试剂盒组成人复制蛋白A酶联免疫分析试剂盒标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。人复制蛋白A酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 原代细胞分离技术

  实验步骤1.悬浮细胞的分离方法1）将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。2）去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。3）用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。4）如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。2.实体组织材料的分离方法1）机械分散法a.纤维成分很少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3的组织块。b.用PBS清洗两次后①用吸管吹打，分散组织细胞。②或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出③或在不锈钢纱网内用钝物（注射器钝端）压挤使细胞从网孔中压挤出。c.收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。d.去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。2）消化分离法酶消化分离法（冷消化法）a.细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。b.再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。c.加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4℃。d.次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2-3次。e.加入少量含血清的培养基吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。非酶消化法（EDTA消化法）a.把组织块剪碎，呈1mm3大小的组织块。b.将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。c.加入消化液（胰蛋白酶或胶原酶或EDTA）于37℃水浴中作用适当时间（中间可轻摇1~2次），若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。d.弃去上清，加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应，并洗涤2-3次后，加入完全培养基。e.用吸管吹打，使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。[详细]

  2018-10-08 10:01

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• FH0334-小鼠正常肝细胞；NCTC1469

  FH0334-小鼠正常肝细胞；NCTC1469[详细]

  2024-05-30 09:33

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• FH1006-小鼠胚胎肝细胞；BNL CL.2

  FH1006-小鼠胚胎肝细胞；BNL CL.2[详细]

  2024-05-30 09:33

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• 小鼠肝细胞生长因子（HGF）ELISA试剂盒说明书

  小鼠肝细胞生长因子（HGF）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠HGF单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的HGF与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠HGF，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，HGF浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中HGF浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：8ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成16000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入16000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应HGF含量。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的HGF检测浓度小于60pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的小鼠HGF。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:00

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• 小鼠肝细胞生长因子 （HGF） ELISA 检测试剂盒

  小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：HGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HGF和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HGF的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：1600pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型生物素标记的抗HGF抗体1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：1600pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。800pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液400pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液200pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（pg/ml）A16001600样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的HGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的HGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-1600pg/ml4、敏感度：1.0pg/ml[详细]

  2018-09-14 10:00

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• 小鼠（Mouse）肝细胞生长因子（HGF）检测试剂盒

  小鼠(Mouse)肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：HGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HGF和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HGF的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：1600pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型生物素标记的抗HGF抗体1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：1600pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。800pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液400pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液200pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（pg/ml）A16001600样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的HGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的HGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-1600pg/ml4、敏感度：1.0pg/ml[详细]

  2018-10-31 10:00

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• 小鼠肝细胞生长因子ELISA检测试剂盒说明书

  小鼠肝细胞生长因子ELISA检测试剂盒说明书试验原理：HGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HGF和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HGF的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：1600pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型生物素标记的抗HGF抗体1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液5、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：1600pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。800pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液400pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液200pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。小鼠肝细胞生长因子ELISA检测试剂盒说明书操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（pg/ml）A16001600样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。小鼠肝细胞生长因子ELISA检测试剂盒说明书结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的HGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的HGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-1600pg/ml4、敏感度：1.0pg/ml[详细]

  2018-11-05 10:00

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• 小鼠ELISA试剂盒能促进化疗后的血细胞再生

  小鼠ELISA试剂盒化疗杀死血细胞，也能够杀死癌细胞，因此经常伴随着致命的结果。如今，耶鲁大学干细胞研究人员鉴定出一种方法，他们希望这种方法有朝一日将有助于接受化疗ZL的癌症病人维持一种健康的血液供应。相关研究结果于10月18日刊登在CellReports期刊上。小鼠ELISA试剂盒在耶鲁大学干细胞ZX与癌症ZX遗传学助理教授JunLu的指导下，研究人员研究了血细胞如何再生。Lu对小片段被称作微RNA（microRNA,miR）的遗传物资在血液产生和血干细胞和祖细胞功能所发挥的作用特别感兴趣。这些血祖细胞有助于确定所产生的血细胞类型。化疗杀死这些类型的血祖细胞，使得血液再生很困难。尽管红细胞能够通过灌注被替换，但是白细胞和血小板经常不能很好地复原，这就使得癌症病人很容易遭受感染和出血。利用一种新技术来同时分析活小鼠体内的大量miR，研究人员鉴定出几种miR参与血液形成。当他们让这几种miR中的miR-150失去功能时，他们发现小鼠能够更加有效地再生化疗所破坏的白细胞和血小板。缺乏这种这种miR的小鼠没有表现出不良的健康影响。相反地，携带活性miR-150的小鼠很难再生新的血细胞[详细]

  2024-09-30 07:35

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• 人蛋白磷酸酶1调控（PPP1R1A）检测试剂盒说明书

  人蛋白磷酸酶1调控（PPP1R1A）试剂盒（ELISA）使用说明书Cat.No.RJ-12167l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人蛋白磷酸酶1调控（PPP1R1A）的含量。l有效期：6个月l保存条件：2-8℃l本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人蛋白磷酸酶1调控（PPP1R1A）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人蛋白磷酸酶1调控（PPP1R1A）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。[详细]

  2018-11-25 10:00

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• 压力表校验周期

  压力表属于安全防护这一类，属于强检项目，按照JJG52-1999检定规程周期为半年。企业可以按照使用的具体情况分A/B/C来分别确定检定周期。A类是强制检定，关系到生产安全和环境监测方面的压力表，检定周期必须按照检定规程，只可小于半年；如果工矿条件恶劣，检定周期必须更短。B类原则上也不应超过检定规程上的规定。c类可以根据企业的特点自行确定检定周期，但应有确定检定周期的方法。[详细]

  2024-09-30 01:48

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• 小鼠 （Mouse） 肝细胞生长因子 （HGF） ELISA 检测试剂盒

  小鼠(Mouse)肝细胞生长因子(HGF)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：HGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HGF和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HGF的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：1600pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型生物素标记的抗HGF抗体1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：1600pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。800pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液400pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液200pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（pg/ml）A16001600样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的HGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的HGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-1600pg/ml4、敏感度：1.0pg/ml[详细]

  2018-09-14 10:00

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• 大鼠肝细胞的分离

  实验试剂钠60mg/kg链蛋白酶E灌注液含Ⅳ型胶原酶的灌注液Histodenz液RPMI1640液胎牛血清碘酒乙醇实验设备高速离心机平皿硅化三角烧瓶“0”号丝线针管一次性输液管恒温振荡器120目、300目钢网50ml聚丙烯离心管实验材料实验室大鼠实验步骤1.大鼠以3％钠60mg/kg麻醉后，依次碘酒、乙醇消毒；2.以十字型切口打开腹腔，暴露内脏，将肠管推向腹腔的左侧，暴露出下腔静脉和门静脉，首先游离出下腔静脉，将胆总管结扎。然后分离门静脉，将其分支一一结扎，并在门静脉的近端和远端分别预置“0”号丝线一根，用针管内预先吸有肝素的l8号套管针穿刺门静脉，退出针芯，见门静脉有回血后结扎固定，迅速接通灌注系统，并剪开下腔静脉建立流出道，以20ml/min的速率灌注预灌注液（37℃），同时将肝脏完整地分离下来，置入一平皿中；3.灌注约10min后，肝脏完全变为淡黄褐色，关闭预灌注液三通开关，以15ml／min速率灌注50ml（25mg）链蛋白酶E灌注液，然后再以15ml／min速率灌注含Ⅳ型胶原酶的灌注液（37℃）；4.将一根一次性输液管一端浸入培养皿液面以下，另一端插入胶原酶溶液瓶，建立胶原酶的循环灌注；5.20～25min后，当肝脏组织完全变软，撕去肝包膜，去除结缔组织，钝性粉碎肝组织制备细胞悬液；6.将细胞悬液倒入一预先装有100ml、37℃预热的振荡消化液硅化三角烧瓶中，将三角烧瓶放恒温振荡器中振荡消化30min（200r／min，37℃），振荡消化后的细胞悬液依次经120目、300目钢网过滤，收集于2个50ml聚丙烯离心管中；7.1700r／min离心5min（4℃），吸弃上清液。每管加入40mlRPMI1640液，反复吹打，使细胞充分悬浮；8.200r/min离心2min（20℃）2次，使细胞悬液中剩余的肝细胞沉淀，去除肝细胞；9.上清液l700r／min离心5min（4℃），沉淀肝的非实质细胞，吸弃上清液，用RPMI1640液1700r／min离心5min（4℃）再冲洗2～3次；10.将33％的Histodenz液以RPMI1640液稀释成为11％Histodenz液，加入l1％Histodenz液重悬细胞沉淀，反复轻柔吹打，使细胞充分悬浮；11.配制15％的Histodenz液，在10ml离心管的底部先小心地铺4ml15％的Histodenz，然后将l1％Histodenz细胞悬液小心地铺在15％的Histodenz液上，上面再小心地滴加一层无血清的RPMI1640细胞培养液。在这一过程中一定要避免各层液体混合；12.两离心管3000r／min离心30min（4℃），垂直位小心取下离心管，可以看到明显的细胞分层，将11％Histodenz液与15％Histodenz液交界面间的细胞仔细地吸出，用无血清RPMI1640液1700r／min离心5min（4℃）冲洗2次；13.培养：用含体积分数20％胎牛血清的RPMI1640培养液将细胞悬浮，移人培养瓶，于37℃、CO2体积分数为5％的培养箱中培养30min，计数，以1×106个／ml的浓度接种于新瓶中培养，24h后洗去未贴壁的细胞，即可获得纯化的大鼠肝细胞。[详细]

  2018-10-08 10:01

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  2015-01-19 00:00

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