组织沉默调节蛋白1活性比色法定量检测试剂盒

本文由 上海科学仪器有限公司 整理汇编

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• 组织沉默调节蛋白1活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途组织沉默调节蛋白1（SIRT1）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定组织裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景人体组蛋白脱乙酰基酶（histonedeacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（classI）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（classII）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatinA；TSA）敏感。种类III（classIII）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（SilentInformationRegulator2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性Z高。其功能在于调节p53活性和YZ细胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，Z后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。用户自备磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗组织样品15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器（微型）台式离心机：用于组织细胞预处理培养箱：用于反应物孵育96孔板或100微升1厘米光径比色皿：用于反应和比色的容器酶标仪或分光光度仪：用于比色分析注意事项1．本产品为20次操作，包括背景对照2．操作时，须戴手套3．系统操作过程中，背景测定只需1次4．样品须澄清，至关重要5．样品处理时，避免使用蛋白酶YZ剂、PMSF、烷基胺（alkylamine）等6．孵育反应完成后即刻进行比色测定7．滤波器可以使用波长400nm替代405nm8．测定值由低到高变化；酶动法测定可以持续60分钟9．测定值吸光读数越高，表明酶活性越高10．比色测定后，比色皿须清洗彻底11．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为50微克/20微升；待测样本为组织裂解悬液，其蛋白浓度为200微克/20微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度13．沉默调节蛋白1单位活性定义为：在30℃，pH8.0条件下，每分钟内能够释放1微摩尔对硝基苯酚所需的酶量作为一个活性单位14．本公司提供系列组蛋白脱乙酰基酶检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测

  主要用途细胞沉默调节蛋白1（SIRT1）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景人体组蛋白脱乙酰基酶（histonedeacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（classI）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（classII）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatinA；TSA）敏感。种类III（classIII）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（SilentInformationRegulator2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性Z高。其功能在于调节p53活性和YZ细胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，Z后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂盒（中文版）

  细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂盒（中文版）[详细]

  2015-04-08 00:00

  实验操作

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• 细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒

  细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒[详细]

  2015-04-08 00:00

  期刊论文

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• 组织酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途组织酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酪氨酸酶反应系统中底物酪氨酸氧化后，产生多巴色素，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物组织，尤其是皮肤、眼睛和黑色素瘤组织裂解悬液样品中酪氨酸酶的活性检测，以及YZ剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景酪氨酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶（monophenolmonooxygenase），又称为单酚酶（monophenolase）或单酚二羟基苯丙氨酸：O2氧化还原酶（monophenoldihydroxyphenylalanin：O2oxidoreductase），具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中，其蛋白结构、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人体酪氨酸酶是一个跨膜蛋白，而催化结构域在黑色素细胞（melanocyte）或色素细胞的黑色素器（melanosome）里。酪氨酸酶通过催化L-酪氨酸（L-tyrosine）等的o-羟基化（o-hydroxylation）反应变成L-多巴（L-dopamine），进而氧化产生黑色素底物多巴醌（dopaquinone），从而由多巴色素（dopachrome）转化为黑色素（melanin）中的真黑素（eumelanin），以及其它色素，包括毛发和眼睛色素。紫外线可以激活酪氨酸酶活性，严重时，会引起色素沉着（hyperpigmentation）。酪氨酸酶基因突变将导致I型眼皮肤白化病（oculocutaneousalbinism）。酪氨酸酶YZ剂成为增白化妆品的重要元素。基于底物酪氨酸，在酪氨酸酶的催化下，产生多巴色素，通过其吸光值的变化（475nm波长），来定量测定酪氨酸酶的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）ELISA试剂盒说明书

  小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）水平。用纯化的小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入沉默调节蛋白1（SIRT1），再与HRP标记的沉默调节蛋白1（SIRT1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的沉默调节蛋白1（SIRT1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：900pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为600pg/mL，400pg/mL，200pg/mL，100pg/mL，50pg/mL）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：22pg/mL-800pg/mL保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-11-07 14:16

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• 细胞蛋白磷酸酶1（PP1）活性定磷比色法定量检测

  要用途细胞蛋白磷酸酶1（PP1）活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性底物糖原磷酸化酶a，在PP2AYZ剂存在下，受到PP1去磷酸化后，释放出游离磷酸根，与孔雀绿染料发生显色反应后，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细胞裂解悬液样品包括免疫沉淀复合物和粗提或部分纯化酶样品的蛋白磷酸化酶1活性及其YZ剂的检测。广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景蛋白磷酸化酶1（proteinphosphatase1；PP1；EC3.1.3.48），又称为1型蛋白丝/苏氨酸磷酸化酶，是7个主要丝/苏氨酸磷酸化酶（包括PP1、PP2A、PP2B、PP2C、PP4、PP5、PP6）成员之一，从酵母到人类高度进化保留。其参与调节多种重要的细胞生理功能，包括糖原代谢、细胞分裂、肌肉收缩、信号传导、神经元功能、转录、翻译等，以及与HIV-1转录过程的调节，并且与老年性痴呆等多种疾病密切相关。PP1分子结构表面的3个凹槽及β12-β13Loop环结构，是底物与YZ剂的结合部位；其催化亚体为37kd，调节亚体有2种：目标亚体和YZ亚体。基于特异性底物糖原磷酸化酶a，在PP2AYZ剂福司曲星（fostriecin；FOS）存在的情况下，受到蛋白磷酸化酶1的去磷酸化作用，释放出游离磷酸根，与孔雀绿（malachitegreen）染料发生显色反应后，在分光光度仪下（660nm波长）产生峰值的变化，由此测定蛋白磷酸化酶1（PP1）的特异活性。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 组织乙酰胆碱酯酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织乙酰胆碱酯酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-28 00:00

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• 组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书...

  组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性YZ剂，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的，即采用比色法来测定组织裂解萃取液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）乙醛脱氢酶2的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景乙醛脱氢酶（aldehydedehydrogenase；ALDH；EC1.2.1.3），又称为乙醛NAD氧化还原酶（aldehydeNAD-oxidoreductase）是一类NAD（P）依赖性酶，催化广谱的外源性或内源性脂肪族和芳香族乙醛类底物氧化，包括乙醇、氨基酸、生物胺（biogenicamine）、维生素、固醇类、脂质、药物和环境分子等代谢产物。乙醛脱氢酶是乙醇在体内分解代谢过程中两种主要酶之一。乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，生成的乙酸进入脂肪酸氧化途径，Z终被氧化成二氧化碳和水。乙醛脱氢酶主要有两种同工酶：ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中，ALDH2存在于线粒体中，ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脱氢酶的缺少，使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。基于来自于乙醇代谢产生的乙醛（acetaldehyde），在7-羟基-3-（4-羟苯基）-异黄酮-7-糖苷（Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside；Daidzin）存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶2的催化作用，转化为乙酸（aceticacid）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）的变化（340nm波长），来定量分析乙醛脱氢酶2的特异活性。乙醛脱氢酶2反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升反应液（ReagentD）毫升底物液（ReagentE）毫升阴性液（ReagentF）毫升专性液（ReagentG）微升产品说明书1份保存方式保存缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentD）、底物液（ReagentE）和专性液（ReagentG）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）和底物液（ReagentE）避免光照；有效保证6月[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 组织基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下，受到MMP2的水解，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellularmatrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissueresorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A（gelatinase-A）或IV型胶原酶（typeIVcollagenase），其前体分子量为72kDa，激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5（laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下，受到MMP2的水解，释放出巯基（sulfhydrylgroup），进而与Ellman试剂5，5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5，5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定组织基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）ELISA试剂盒使用说明书

  我司ELISA试剂盒现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒森贝伽。本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）水平。用纯化的小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入沉默调节蛋白1（SIRT1），再与HRP标记的沉默调节蛋白1（SIRT1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的沉默调节蛋白1（SIRT1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠沉默调节蛋白1（SIRT1）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：900pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为600pg/mL，400pg/mL，200pg/mL，100pg/mL，50pg/mL）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：22pg/mL-800pg/mL保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-11-07 14:16

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• 植物α-淀粉酶（α-AMYLASE）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途植物α-淀粉酶（α-AMYLASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸与受到α-淀粉酶中性环境下水解产生的还原基团分子反应，生成强烈吸光的3-氨基-5-硝基水杨酸，即采用比色法测定其还原后峰值的升高变化，以此测定样品中α-淀粉酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等裂解萃取液样品α-淀粉酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景淀粉酶（AMYLASE）属于糖苷水解酶类（glycosidehydrolase）。淀粉酶通过水解方式，分解淀粉的α－1，4链接，释放出葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等简单糖分子。淀粉酶分成三类：α-淀粉酶、β-淀粉酶和γ-淀粉酶。其中α淀粉酶（EC3.2.1.1），又称为α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶（α-1,4-glucan4-glucanohydrolase）或糖原酶（glycogenase），是钙离子依赖性钙金属蛋白酶（calciummetalloenzyme），分解淀粉为葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等，为主要的消化酶，尤其在人体中，例如唾液和胰淀粉酶等。β淀粉酶（EC3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖麦芽糖水解酶（1,4-α-D-glucanmaltohydrolase）或糖基淀粉酶（saccharogenamylase），分解淀粉为葡萄糖等。植物、真菌、细菌等均能产生，而人体组织不含有。γ-淀粉酶（EC3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖葡萄糖苷酶（Glucan1,4-α-glucosidase）或溶酶体α-葡萄糖苷酶（lysosomalα-glucosidase），在酸性环境下分解淀粉为葡萄糖。淀粉是一种复杂分子，由多聚糖直链淀粉（amylose）和支链淀粉（amylopectin）构成。植物和细菌产生大多数淀粉。在淀粉酶的催化作用下，分解产生简单糖分子，作为能源储存，植物用于光合作用。植物和细菌性淀粉酶常用于工业，包括烘培食物和乳制品的制造，以及酒精和纸材的生产。基于淀粉，在中性环境下，通过α-淀粉酶的水解，释放出麦芽糖等含有游离的还原性基团（例如酮基等），进一步使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylicacid；DNS）与之反应，产生红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸（3-amino-5-nitrosalicylicacid），在分光光度仪（540nm波长）下测定，以定量分析α-淀粉酶的活性。其反应方式为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细菌脂肪酶（LIPASE）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细菌脂肪酶（LIPASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物三丁酸二巯基丙醇受到脂肪酶水解，释放出巯基基团，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解液样品脂肪酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景脂肪酶（lipase；EC3.1.1.3）是可溶性酶蛋白分子，催化不溶性脂质分子的酯键（esterbond）的水解。许多细菌产生细胞外酶（exoenzyme），称为水解酶（hydrolase），在水分子的参与下，催化底物的水解，成为细菌生理特征之一。其中脂肪酶（Lipase），裂解脂肪分子，例如甘油三酯（triglyceride；TAG）、脂肪、油等，产生1个分子甘油（glycerol）和3个分子脂肪酸分子（fattyacid），由此用于合成细菌脂质和其它细胞成分，以及氧化产生能量。食品工业中，常用于食品发酵（rancidity），例如人造奶油（margarine）等。甚至用于厨房清洁剂和替代能源的生物催化作用。同时据此用以识别革蓝氏阴性细菌，例如枯草芽孢杆菌（Bac.Subtilis）等。细菌脂肪酶在水分子的参与下，催化三丁酸二巯基丙醇（dimercaptopropanoltributyrate；DMPTB或BALB）的水解，产生二巯基丙醇（dimercaptopropanol；DMP），并释放出巯基基团（－SH），与Ellman试剂5，5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5，5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析脂肪酶的活性。脂肪酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 人沉默调节蛋白2(SIRT2)ELISA试剂盒

  人沉默调节蛋白2(SIRT2)ELISA试剂盒[详细]

  2024-09-28 21:25

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• 细胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酪氨酸酶反应系统中底物酪氨酸氧化后，产生多巴色素，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞，尤其是黑色素细胞和黑色素瘤细胞裂解悬液样品中酪氨酸酶的活性检测，以及YZ剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景酪氨酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶（monophenolmonooxygenase），又称为单酚酶（monophenolase）或单酚二羟基苯丙氨酸：O2氧化还原酶（monophenoldihydroxyphenylalanin：O2oxidoreductase），具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中，其蛋白结构、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人体酪氨酸酶是一个跨膜蛋白，而催化结构域在黑色素细胞（melanocyte）或色素细胞的黑色素器（melanosome）里。酪氨酸酶通过催化L-酪氨酸（L-tyrosine）等的o-羟基化（o-hydroxylation）反应变成L-多巴（L-dopamine），进而氧化产生黑色素底物多巴醌（dopaquinone），从而由多巴色素（dopachrome）转化为黑色素（melanin）中的真黑素（eumelanin），以及其它色素，包括毛发和眼睛色素。紫外线可以激活酪氨酸酶活性，严重时，会引起色素沉着（hyperpigmentation）。酪氨酸酶基因突变将导致I型眼皮肤白化病（oculocutaneousalbinism）。酪氨酸酶YZ剂成为增白化妆品的重要元素。基于底物酪氨酸，在酪氨酸酶的催化下，产生多巴色素，通过其吸光值的变化（475nm波长），来定量测定酪氨酸酶的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细菌异柠檬酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细菌异柠檬酸脱氢酶（ISOCITRATEDEHYDROGENASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸（NADP）还原后峰值的变化，即采用比色法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细菌细胞裂解悬液样品异柠檬酸脱氢酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景异柠檬酸脱氢酶（isocitratedehydrogenase；IDH；EC1.1.1.42）是三羧酸循环（citricacidcycle）或克雷布斯循环（Krehescycle）中的酶之一，存在于所有生物体内。细菌异柠檬酸脱氢酶有2种同工酶：同源双体，40至45Kd分子量；单体，80至100Kd分子量。在细菌体内，氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADP）依赖性异柠檬酸脱氢酶获得辅酶NADP和辅助因子锰或镁离子（Mn）的推动，脱去底物异柠檬酸的氢和二氧化碳（氧化性脱羧基作用），转化为α-酮戊二酸（α-ketoglutarate），同时生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADPH）。一旦磷酸化或在乙酸环境中，以及有限的葡萄糖条件下，异柠檬酸脱氢酶则失活，从而控制三羧酸循环和乙醛酸旁路（glyoxylatebypass）之间碳的流动。基于异柠檬酸脱氢酶的NADP依赖性，和作用后所产生的NADPH，通过分光光度仪的峰值变化（340nm波长），来定量分析异柠檬酸脱氢酶的活性。异柠檬酸脱氢酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细菌琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细菌琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细菌菌株裂解悬液和膜蛋白样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、发酵分析等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。细菌琥珀酸脱氢酶，又称为SdhCDAB，为膜结合性蛋白，分为周边（peripheral）和跨膜（transmembrane）部分，其中周边亲水部分由SdhA和SdhB亚体组成：SdhA亚体含有黄素蛋白（flavoprotein），是琥珀酸的活性部位；SdhB含有铁硫蛋白（iron-sulfurprotein），进行电子传递；跨膜疏水部分由SdhC和SdhD亚体组成：SdhC含有亚铁血红素-B（Heme-B），SdhD含有泛醌（ubiquinone）结合部位（Q部位）。其作用在于参与三羧酸循环（TCAcycle）和呼吸链活动。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞丙酮酸激酶总活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细胞丙酮酸激酶总活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的酶偶联反应系统中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取悬液样品（动物、人体、植物、昆虫等）丙酮酸激酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景丙酮酸激酶（PyruvateKinase；PK）是细胞代谢的调节酶，催化细胞糖酵解的Z后反应：将磷酸烯醇丙酮酸（phosphoenolpyruvate；PEP）转化成丙酮酸（pyruvate），同时产生ATP。丙酮酸激酶由4个相同的亚单位构成，在肝组织、肌肉组织和红细胞中有不同类型的异构体。果糖-2，6-二磷酸（Fructose-2，6-bisphosphate；F2，6BP）是该酶的激活剂，而ATP、蛋氨酸（alanine）、乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）是该酶的YZ剂。丙酮酸激酶的活性检测用来评价细胞或组织，包括红细胞的损害状况。基于磷酸烯醇丙酮酸转化成丙酮酸后，通过乳酸脱氢酶系统，测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD）的峰值变化（340nm波长），来定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 体液总脂肪酶（lipase）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途体液总脂肪酶（lipase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物三丁酸二巯基丙醇受到脂肪酶水解，释放出巯基基团，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体各种体液包括尿液、脑脊液、唾液、精液等样品脂肪酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景脂肪酶（lipase；EC3.1.1.3）是可溶性糖蛋白分子，催化不溶性脂质分子的酯键（esterbond）的水解。在人体中，其来源于产生。在消化系统中，脂肪酶（Lipase），裂解脂肪分子，例如甘油三酯（triglyceride；TAG），产生1个分子甘油（glycerol）和3个分子游离脂肪酸分子（fattyacid）。脂肪酶异常与炎、管阻塞、癌、肾病、唾液腺炎症、肠道阻塞等相关；异常降低则与中脂肪酶产生细胞的性损伤有关。脂肪酶的活性检测是临床诊断的指标之一。基于脂肪酶在水分子的参与下，催化三丁酸二巯基丙醇（dimercaptopropanoltributyrate；DMPTB或BALB）的水解，产生二巯基丙醇（dimercaptopropanol；DMP），并释放出巯基基团（－SH），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析脂肪酶的活性。脂肪酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒说明书

  细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物偶氮酪蛋白受到蛋白酶水解，产生橘红色产物的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解液以及培养上清样品蛋白酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景蛋白酶（protease）又称为肽酶（peptidase）或蛋白质酶（proteinase），是一类蛋白水解的酶，属于水解酶（hydrolase）家属中一员，存在于所有生物体内。通过肽键的水解，进行蛋白质的分解代谢，参与体内血液凝结、补体系统、凋亡、细胞生长和分化等一系列生理活动。蛋白酶基本分成6类，包括丝氨酸（serine）、苏氨酸（threonine）、半胱氨酸（cysteine）、谷氨酸（glutamate）、天冬氨酸（aspartate）、金属（metalloprotease）蛋白酶等；也可以分成酸性、中性和碱性蛋白酶等；还可以分成内切肽酶，例如胰蛋白酶（trypsin），和外切肽酶，例如羧基肽酶A（carboxypeptidase）。细菌蛋白酶与碳和氮循环有关；作为外毒素（exotoxin），也是细菌致病的毒力（virulence）因子；同时细菌蛋白酶可以应用于食品、制药、皮革、诊断、水处理、银回收和洁净剂工业等。同时据此用以识别革蓝氏阴性细菌，例如枯草芽孢杆菌（Bac.Subtilis）等。基于底物偶氮酪蛋白（azocasein或sulfanilamideazocasein），在细菌蛋白酶的催化水解下，产生橘红色产物，通过其吸收峰值的变化（440nm波长），来定量分析蛋白酶的总活性。其反应系统为：产品内容裂解液（ReagentA）毫升反应液（ReagentB）毫升终止液（ReagentC）毫升中和液（ReagentD）毫升阴性液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品制备恒温水槽：用于孵育反应比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤样品准备准备好500微升待测细菌（OD600＝0.4至0.8，即1至2X107细胞/毫升）转移到到1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g（或3500RPM，例如EPPENDORF5415）小心抽去上清液加入xx微升裂解液（ReagentA），充分混匀QL涡旋震荡15秒置于冰槽里15分钟放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作测定准备准备好待测样品（例如细菌裂解萃取液或培养上清等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm，并置零实验开始前，将反应液（ReagentB）置于65℃恒温水槽孵育20分钟后使用三、背景测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入xx微升阴性液（ReagentE）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照样品活性测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入100微升待测样品（蛋白总量100微克）（注意：样品需澄清）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管（注意：沉淀物为橘红色）加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数计算样品活性注意事项本产品为20次操作操作时，须戴手套终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全系统检测时，背景测定只需一次样品须澄清，至关重要比色测定后，比色皿须清洗彻底建议待测样本的蛋白浓度为100微克/100微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度蛋白酶活性单位浓度定义：在37℃下，pH7.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）产生0.01吸光值的升高变化本公司提供系列细菌生理生化检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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