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小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
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小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
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小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
- 小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒[详细]
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大鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
- 电话:021-6533363955229872网址:http://www.westang.com大鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠HA单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的HA与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠HA,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,Z后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,HA浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中HA浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)12ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):2000ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样1.收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。2.标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,配成2000ng/ml的溶液。设标准管8管,每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入2000ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板:同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品1000、500、250、125、62.5、31、15.6、0ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应HA含量。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的HA检测浓度小于9ng/ml。2.特异性:可同时检测重组或天然的大鼠HA。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性:板内、板见变异系数均小于10%。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断![详细]
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- 小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)检测试剂盒说明书该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测血液,细胞、组织内的特异性CD40抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD40一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)检测试剂盒所含试剂:试剂A通透液:0.1%Triton-X10010mL(选用)试剂B封闭缓冲液(封闭用)20mL试剂C(原装进口分装)已稀释的即用型CD40一抗(2.5ml)试剂D(原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG1支(浓度1.5mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支(浓度1μM,稀释比1:50~1:200)100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%体积比)2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修复液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g加蒸馏水700mL用10mMNaOH调pH值至8.0,Z后定容至1000Ml缓冲甘油封固剂10mLTween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1hr;2.脱蜡:切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修复:根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗涤(2×2min)(具体修法见附1)*注:有些抗原勿需修复,直接进入第5步封闭。5.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育30min;6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2hr7.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);8.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育30min;10.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);11.封闭:滴加试剂Tween20,37℃湿盒孵育封闭20min;12.加HRP-SA:滴加用试剂C稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20nM),37℃湿盒中孵育30min;13.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min),TBS洗涤(2×5min);14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;16.封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;17.观察成像:显微镜下观察成像。原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)检测试剂盒注意事项:修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。封片前一定要换用TBS充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween20,否则会影响结果观察。如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1:抗原修法常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修复液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修复法酶消化修复切片脱蜡水化处理,TBS冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或继续微波10~15min,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时4~8min即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]
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大鼠透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA试剂盒
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