使用 ScanLater Western Blot protein Ladder 估算蛋白分子量

使用 ScanLater Western Blot protein Ladder 估算蛋白分子量

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使用 ScanLater Western Blot protein Ladder 估算蛋白分子量[详细]
2024-09-27 05:16
应用文章
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蛋白质印迹分析（Western Blot Analysis）

蛋白质印迹分析（WesternBlotAnalysis）【实验目的】了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用。【实验原理】蛋白质印迹法又称为免疫印迹法，这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术方法。待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的分离和纯化,另外这项技术的应用需要利用待测蛋白的单克隆或多克隆抗体进行识别。如图所示，可溶性抗原，也就是待测蛋白首先要根据其性质，如分子量，分子大小，电荷以及其等电点等采用不同的电泳方法进行分离；通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上；利用抗体（一抗）与抗原发生特异性结合的原理，以抗体作为探针钓取目的蛋白。值得注意的是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白，如牛血清白蛋白对膜进行“封阻”而防止抗体与膜的非特异性结合。经电泳分离后的蛋白往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上,我们把这个过程称为电泳印迹。常用的两种电转移方法分别为:1.半干法:凝胶和固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿的滤纸之间,通电时间为10分钟~30分钟。2.湿法：凝胶和固相载体夹心浸放在转移缓冲溶液中，转移时间可从45分钟延长到过夜进行。由于湿法的使用弹性更大并且没有明显浪费更多的时间和原料，因此我们在这里只描述湿法的基本操作过程。对于目的蛋白的识别需要采用能够识别一抗的第二抗体。该抗体往往是购买的成品，已经被结合或标记了特定的试剂，如辣根过氧化物酶。这种标记是利用辣根过氧化物酶所催化的一个比色反应，该反应的产物有特定的颜色且固定在固相载体上，容易鉴别。因此可通过对二抗的识别而识别一抗，进而判断出目标蛋白所在的位置。其他的识别系统包括碱性磷酸酶系统和125I标记系统。【实验操作】⒈.蛋白质的分离根据目的蛋白的性质，利用电泳方法将其进行分离。为提高电转移的效率，通常采用SDS/PAGE技术。分离实验结束后，首先将样品墙的上边缘用小刀去除，然后在胶板的右上角切一个小口以便定位，小心放入转移缓冲溶液中待用。⒉.电转移⑴准备PVDF膜根据胶的大小剪出一片PVDF膜，膜的大小应略微小于胶的大小。将膜置于甲醇中浸泡1分钟，再移至转移缓冲溶液中待用。夹心放置顺序⑵制作胶膜夹心在一浅盘中打开转移盒，将一个预先用转移缓冲溶液浸泡过的海绵垫放在转移盒的黑色筛孔板上，在海绵垫的上方放置经转移缓冲溶液浸湿的3MM纸，小心地将胶板放在3MM纸上，并注意排除气泡。将PVDF膜放在胶的上方同时注意排除气泡，再在膜的上方放上一张同样用转移缓冲溶液浸湿过的3MM纸并赶出气泡，放置另一张浸泡过的海绵垫，关闭转移盒。将转移盒按照正确的方向放入转移槽中，转移盒的黑色筛孔板贴近转移槽的黑色端，转移盒的白色筛孔板贴近转移槽的白色端，填满转移缓冲溶液同时防止出现气泡。⑶电转移连接电源,在4°C条件下维持恒压100v，1小时⒊.免疫检测⑴膜染色断开电源，将转移盒从转移槽中移出，将转移盒的各个部分分开。用镊子将PVDF膜小心放入一个干净的容器中，用TBS缓冲溶液进行短暂清洗，从膜上剪下一条宽约5mm的膜放入另一个干净的容器中。将这条膜在染色液中浸泡1分钟，然后在脱色液中脱色30分钟,确定蛋白质已经转移到PVDF膜上。⑵膜的封闭和清洗对于没有进行染色的膜，首先倒出TBS缓冲溶液,加入3%封闭缓冲溶液,轻轻摇动至少1小时。倒掉3%封闭缓冲溶液，并用TBS缓冲溶液清洗3次,每次5分钟。⑶一抗倒掉TBS缓冲溶液，加入10ml0.5%封闭缓冲溶液及适量的一抗，轻轻摇动1小时以上。从容器中倒出一抗及封闭缓冲溶液，用TTBS缓冲溶液清洗两次，每次10分钟。⑷二抗倒出TTBS缓冲溶液，加入5ml0.5%封闭缓冲溶液及适量的二抗。轻轻摇动30分钟，倒出二抗及封闭缓冲溶液，用TTBS缓冲溶液清洗两次，每次10分钟。⑸检测倒掉TTBS缓冲溶液，并加入显影剂，轻轻摇动PVDF膜，观察显影情况，当能够清晰的看到显色带时，用蒸馏水在30分钟内分三次清洗PVDF膜以终止显色反应的继续进行。【实验结果】检查膜上显色结果，蓝紫色带所对应的即是目标蛋白的位置。WesternBlotAnalysis【Purpose】ComprehendthetheoryofWesternblotting;understanditsbasicmanipulationandapplication.【Principle】WesternblottingisalsocalledImmunoblotting.Itisakindofimmunochemicaltechniqueswhichisusedtodetectaproteinimmobilizedonamatrix.Thetargetproteincanbeinacrudeextractoramorepurifiedpreparationandthemonoclonalorpolyclonalantibodyagainstthisproteinisnecessarytohelpustorecognizetheantigen.AsintheFigure,solubleantigens（thetargetprotein）maybeseparatedbyelectrophoresisbasedonitsmolecularweight（SDS/PAGE）,sizeandcharge（nondenaturatinggelelectrophoresisorisoelectricpoint（isoelectricfocusing）.Aftertheseparation,theproteinsaretransferredfromthegeltoaPVDFmembrane.Onceonthemembraneantibodies（firstantibodies）canbeusedtoprobeforthepresenceofparticularproteinbecauseofthespecificallybindingofantigenwithagainstit.Non-specificbindingsitecanbe“blocked”usingothernon-specificproteinsuchasbovineserumalbuminbeforeaddingfirstantibodytoavoidnon-specificbinding.Proteintransferismostcommonlyaccomplishedbyelectrophoresis，Thisprocedureiscalledelectrophoreticblotting.Thetwocommonelectrophoreticmethodsare:⒈Semi-dryblotting,inwhichthegelandimmobilizingmatrixaresandwichedbetweenbuffer-wettedfilterpapersthroughwhichacurrentisappliedfor10-30minutes.⒉Wet（tank）blotting,inwhichthegel-matrixsandwichissubmergedintransferbufferforelectrophoresis,whichmaytakeaslittleas45minutesormaybeallowedtocontinueovernightWeonlydescribewetblottinghere,sinceitpermitsgreaterflexibilitywithoutbeingsignificantlymoreexpensiveintimeormaterials.Thedetectionoftargetproteinisusingasecondantibody,whichcanrecognizethefirstantibody.Typically,thesecondantibodyispurchasedalreadyconjugatedtoalabe领agentsuchastheenzymehorseradishperoxidase.Thismarkeristhenvisualizedbyacolorimetricreactioncatalyzedbytheenzymewhichyieldsacoloredproductthatremainsfixedtothemembrane.Thus,itispossibletorecognizefirstantibodythroughrecognizingsecondantibody,andthenidentifythepositionoftargetprotein.Otherdetectionsystemsincludealkalinephosphataseand125Ilabels.【Materials】⒈Apparatus:ApparatusofSDS-PAGE,ElectroblottingApparatus,Powersupply,PVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）,Whatman3MMpaper,AdditionalTools:Forceps,spongepad,scissor,gloves,smallplasticorglasscontainer,Shallowtray.⒉Reagents:⑴10xtransferbuffer（1L）:30.3gTrizmabase（0.25M）,144gGlycine（1.92M）,pH首ldbe8.3;withoutadjustment.⑵1xtransferbuffer（2L）:400mlMethanol,200ml10xtransferbuffer,1400mlwater.⑶TBSbuffer:Add1.22gTris（10mM）and8.78gNaCl（150mM）to1LdistilledwaterandadjustpHto7.5withHCl.⑷TTBSbuffer:1LTBSbufferadd0.5mlTween20（0.05%）.⑸Firstantibody:antibodyagainstthetargetprotein.⑹Secondantibody:goatanti-rabbit-HRP（horseradishperoxidase）.⑺3%Blockingbuffer（0.5L）:Add15mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑻0.5%Blockingbuffer（0.5L）:Add2.5mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑼Developingreagent:1mlchlonoaphtholsolution（30mg/mlinmethanol）,add10mlmethanol,addTBSbufferto50mlandadd30ul30%H2O2.⑽Stainingbuffer:Add1gamidoblack18B（0.1%）,250mlisopropanol（25%）and100mlaceticacid（10%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.⑾Destainingbuffer:Add350mlisopropanol（35%）and2mlaceticacid（2%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.【Procedure】⒈.SeparationofProteinRunanelectrophoreticseparationofknownantigenicproteins.Themethodofseparationdecidedbythecharactersoftargetprotein,butforsufficientlytransferring,themostcommonmethodisSDS-PAGE.Afterseparation,removeuppersideofsamplewellswitharazorblade.Notchingbottomright-handcornerofgelfororientationandputgelintransferbufferuntilreadytouse.⒉.Electrotransfer⑴PreparationofmembraneCutapieceofPVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）accordingtothesizeofgel.Incubateinmethanolforabout1minonarockeratroomtemp.Removemethanolandequilibratemembranein1xtransferbufferuntilreadytouse.⑵Arrangegel-membranesandwichInashallowtray,openthetransfercassette.Putawell-soakedspongepadontheblackpieceofthetransfercassetteandawetted3MMpaperonthespongepad.Placethegelonthepaperandarrangewellsothatallairbubblesareremoved.LaythePVDFmembraneonthetopofgelandremoveanyairbubbles.Placeawettedsheetof3MMpaperoverthePVDFmembraneandremovethebubble.Coveredwiththesecondwell-soakedpad.Closethesandwichwiththewhitepieceofthecassette.Mountthesandwichinthetransfertank;puttheblacksidesneartheblacksideofthedevice.Fillthebuffertankwiththetransferbuffer.⑶Electrotransfer:Attachtheelectrodes.Setthepowersupplyto100V（constantvoltage）for1hat4°C.⒊.Immunodetection⑴MembranestainingDisconnecttransferapparatus,removetransfercassette,andpeel3MMpaperfrommembrane.Removethemembranetoasmallcontainer.Add10mlTBSbufferandwashforshorttime.Cutoutonestripewith5mmwidthandputinanothercleancontainer.Stainthisstripeinstainingbufferfor1min.Destainfor30minindestainingbuffertocheckwhetherproteinhasbeentransferredfromgeltomembraneornot.⑵MembraneblockingandwashingForotherpartofmembrane,pouroffTBSbuffer.Add3%blockingbuffer，rockgentlyforatleast1h.Pouroff3%blockingbufferandrinsebrieflywithTBSbufferthreetimes,5minutesforpertime.⑶FirstantibodyPouroffTBSbuffer.Addfirstantibodyatappropriatedilutionin10ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyforatleast1h;pourofffirstantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑷SecondantibodyPouroffTTBSbuffer.Addsecondantibodyatappropriatedilutionin5ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyfor30min,pouroffsecondantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑸DetectionPouroffTTBSbufferfrommembraneandadddevelopingreagent,RockPVDFgently,monitoringdevelopment.Whenthebandscanbeseenclearly,stopdevelopmentbywashingmembranewithdistilledwaterfor30minuteswith3changes.【Result】Checkthebandsonmembrane,thebandwithblue-purplecolorcorrespondingtothetargetprotein.实验材料】1.实验器材SDS/PAGE实验相关材料；电转移装置；供电设备；PVDF膜（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）；Whatman3MM纸；其他工具：镊子、海绵垫、剪子、手套、小塑料或玻璃容器、浅盘。Detection2.实验试剂⑴10x转移缓冲溶液（1L）：30.3gTrizmabase（0.25M）,144g甘氨酸（1.92M）,加蒸馏水至1L,此时pH约为8.3，不必调整。⑵1x转移缓冲溶液（2L）：在1.4L蒸馏水中加入400ml甲醇及200ml10x转移缓冲溶液。⑶TBS缓冲溶液:将1.22gTris（10mM）和8.78gNaCl（150mM）加入到1L蒸馏水中，用HCl调节pH至7.5。⑷TTBSbuffer：在1LTBS缓冲溶液中加入0.5mlTween20（0.05%）。⑸一抗：兔抗待测蛋白抗体（多克隆抗体）。（6）二抗：辣根过氧化物酶标记羊抗兔。⑺3%封阻缓冲溶液（0.5L）：牛血清白蛋白15mg加入TBS缓冲溶液并定容至0.5L，过滤，在4°C保存以防止细菌污染。⑻0.5%封阻缓冲溶液（0.5L）：牛血清白蛋白2.5mg加入TTBS缓冲溶液并定容至0.5L，过滤，在4°C保存以防止细菌污染。⑼显影试剂：1ml氯萘溶液（30mg/ml甲醇配置），加入10ml甲醇，加入TBS缓冲溶液至50ml，加入30ul30%H2O2。⑽染色液：1g氨基黑18B（0.1%），250ml异丙醇（25%）及100ml乙酸（10%）用蒸馏水定容至1L。⑾脱色液：将350ml异丙醇（35%）和20ml乙酸（2%）用蒸馏水定容至1L。[详细]
2018-09-27 10:01
产品样册
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定量western blot ：为什么需要验证抗体

验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件，因此，验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。在《JBC》杂志中关于抗体验证信息如下:[详细]
2024-09-30 01:34
实验操作
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一文教你如何在Western Blot中选择一抗？

说到免疫印迹Z重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体，本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用时我们应该怎么选择呢？检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择，为了在试验过程中尽快找到Z适合的抗体，往往需要考虑以下几种因素： 1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。 2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但极易出现非特异性条带。 3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原（全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等）免疫宿主而制备得来，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程，有些抗体要求样本经过某些特殊处理[详细]
2019-11-18 17:12
实验操作
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ProteinSimple推出2-40KD小分子量Simple Western检测试

ProteinSimple推出2-40KD小分子量Simple Western检测试[详细]
2016-07-12 00:00
报价单
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产品应用（14）应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的一项组成。蛋白质梯Z初始是应用于蛋白质分子定量，凝胶电泳的可视化，已经评估转膜的过程。[详细]
2021-02-23 16:22
应用文章
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如何对化学发光Western Blot (1D 和2D) 进行高质量的成

如何对化学发光Western Blot (1D 和2D) 进行高质量的成[详细]
2024-09-15 22:18
其它
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Western Blot结果出乎意料，有可能是转印海绵垫惹的祸

转印问题的常见根源是三明治结构的松紧度。三明治结构一定要紧！请定期更换转印海绵垫，以确保实验结果的准确性。使用额外的滤纸来填补海绵的磨损，可能会导致传输不一致。我们都会定期更换海绵垫，因为它们会吸收污染物，随着时间的推移，转印海绵垫也会被污染。使用干净的海绵垫对荧光应用尤为关键，因为这些污染物会产生自发荧光，从而导致高背景。 [详细]
2024-09-30 01:24
实验操作
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100bp DNA Ladder

100bp DNA Ladder [详细]
2024-09-17 01:51
产品样册
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蛋白聚集体的分子量研究

蛋白聚集体的分子量研究[详细]
2016-04-08 00:00
期刊论文
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水稻Bt-Cry1Ac蛋白（Bt-Cry1Ac protein）说明书

水稻Bt-Cry1Ac蛋白（Bt-Cry1Ac protein）说明书[详细]
2015-04-24 00:00
产品样册
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人高分子量神经丝蛋白（NF-H）试剂盒使用说明书

人高分子量神经丝蛋白（NF-H）试剂盒使用说明书检测范围：96T5ng/L-200ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中高分子量神经丝蛋白（NF-H）含量。人高分子量神经丝蛋白（NF-H）试剂盒使用说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高分子量神经丝蛋白（NF-H）水平。用纯化的人高分子量神经丝蛋白（NF-H）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入高分子量神经丝蛋白（NF-H），再与HRP标记的高分子量神经丝蛋白（NF-H）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的高分子量神经丝蛋白（NF-H）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人高分子量神经丝蛋白（NF-H）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（320ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。160ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液80ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液40ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液20ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液10ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。人高分子量神经丝蛋白（NF-H）试剂盒使用说明书保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]
2018-11-04 10:00
产品样册
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GE给您完全的蛋白印迹方案--Western Blot相关产品秋季开学特惠

GE给您完全的蛋白印迹方案--Western Blot相关产品秋季开学特惠[详细]
2012-09-05 00:00
专利
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人低分子量神经丝蛋白（NF-L）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。ELISA试剂盒检测范围：96T3ng/L-150ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中低分子量神经丝蛋白（NF-L）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人低分子量神经丝蛋白（NF-L）水平。用纯化的人低分子量神经丝蛋白（NF-L）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入低分子量神经丝蛋白（NF-L），再与HRP标记的低分子量神经丝蛋白（NF-L）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的低分子量神经丝蛋白（NF-L）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人低分子量神经丝蛋白（NF-L）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（240ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。ELISA试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]
2018-09-27 10:00
产品样册
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Bovine Activated Protein C（牛活化蛋白C）

EnzymeResearch是一家拥有超过25年的酶研究的实验室，生产和开发多种用于基本凝血研究的多种酶和辅因子。在过去的十年EnzymeResearchLaboratories为科学家参与止血和血栓形成的研究提供了宝贵支持。EnzymeResearch通过不断追求产品的Z高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。BovineActivatedProteinCBPCaBovineActivatedProteinCActivatedProteinC（APC）isaserineproteasederivedfromthetwochainvitaminKdependentzymogen,ProteinC.APCinhibitsbloodcoagulationthroughtheselectiveinactivationofthecofactorsVaandVIIIa.APCispreparedfromproteinCbyactivationwithpurifiedthrombin.Thisthrombinisremovedafteractivationbyionexchangechromatography.ActivatedProteinCpurityisdeterminedbySDS-PAGEandshowscompletereductionuponincubationwith2-mercaptoethanol.Buffercomposition=20mMTris-HCl/0.1MNaCl/pH7.4ExtinctionCoefficient（1%）=13.7MolecularWeight=52,650daltons上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2018-09-29 10:03
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Human Protein Z（人体蛋白Z）HPZ 说明书

EnzymeResearch是一家拥有超过25年的酶研究的实验室，生产和开发多种用于基本凝血研究的多种酶和辅因子。在过去的十年EnzymeResearchLaboratories为科学家参与止血和血栓形成的研究提供了宝贵支持。EnzymeResearch通过不断追求产品的Z高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。EnzymeResearchLaboratories为生物技术公司,制药行业、医院和大学的研究实验室提供用于全方位的纯化抗凝因子。除了其制造能力，EnzymeResearchLaboratories也创新研发领域中的血液凝固技术。HumanProteinZHPZHumanProteinZThehumanproteinZispurifiedfromplasmaviaacombinationofprecipitationsandcolumnchromatography.HPZpurityisdeterminedbySDS-PAGEandshowsnoreductionuponincubationwith2-mercaptoethanol.Buffercomposition=50mMTris-HCl/0.1MNaCl/pH7.5*ExtinctionCoefficient（1%）=12.0MolecularWeight=62,000daltons上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2018-09-29 10:03
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人体蛋白S（Human Protein S）HPS 说明书

EnzymeResearch，EnzymeResearch介绍,EnzymeResearch代理,EnzymeResearch总代,EnzymeResearch**代理,EnzymeResearchZG代理EnzymeResearch是一家拥有超过25年的酶研究的实验室，生产和开发多种用于基本凝血研究的多种酶和辅因子。在过去的十年EnzymeResearchLaboratories为科学家参与止血和血栓形成的研究提供了宝贵支持。EnzymeResearch通过不断追求产品的Z高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。HumanProteinSHPSHumanProteinSProteinSexistsintwoformsinhumanplasma,asthefreeproteinandincomplexwithC4b-bindingprotein.EnzymeResearchLaboratoriesoffersthefreeproteinfromplasmawhichservesasacofactorfortheanticoagulantactivityofactivatedproteinC.HumanproteinSisasingle-chainglycoproteinwithamolecularweightof69,000.HPSpurityisdeterminedbySDS-PAGE.Buffercomposition=20mMTris-HCl/0.1MNaCl/1mMBenzamidine/pH7.4*ExtinctionCoefficient（1%）=9.5Oneunit=10gMolecularWeight=69,000daltons上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2018-09-29 10:03
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Protein A Sepharose 4FF 产品使用说明书

ProteinASepharose4FF产品使用说明书高IgG结合特异性高流速低蛋白A脱落产品特点特点结合特异性强，基团脱落少颗粒大小50-160μm基质4%的交联琼脂糖凝胶推荐流速50-300cm/h配基重组proteinA使用温度常温配基密度6mg重组蛋白A/mlpH范围3-10动态吸附载量60mg人IgG/ml保存温度+4~8℃蛋白A残留小于3ng蛋白A/mgIgG保存液体20%乙醇ProteinASepharose4FF，上海起福生物专业代理，联系电话：4006551678产品介绍ProteinAsepharose介质是经过我们公司长期开发，在公司生产的nativeproteinA的基础上精致而成。通过ProteinASepharose4FF，可分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。本产品相对同类产品具有如下优势：1、偶联条件温和，更好的保持了proteinA的构象，所以抗体载量高，同体积的介质，相同规模的纯化设备，相同体积介质，抗体的产量明显高于用同类产品，大大的降低了抗体药物生产成本。2、非常稳定，不易脱落，用其生产的抗体中proteinA的残留比同类产品的更少。3、公司的ProteinA以及ProteinAsepharose的生产都是在清洁车间生产，符合制药企业生产需求。4、公司生产的ProteinAsepharose使用寿命长，常规条件下能够重复使用100次以上。使用说明（1）缓冲液的准备：平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下：抗体种类平衡缓冲液成分人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b10mM磷酸盐缓冲液，150mMNaCl，pH7.21人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG350mMTris-Cl，3MNaCl，pH7.8-8.5（2）样品的准备样品上柱前先用平衡缓冲液稀释5至10倍，从而确保样品液的成分和pH与平衡缓冲液相近。如果上样体积过大，可以采取调节上样液pH和盐浓度的方式，使样品的pH和电导与平衡液接近，使样品中的缓冲体系与平衡缓冲液相同。细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。样品在上柱前也需0.45μm微孔滤膜过滤。（3）操作步骤a）填料装柱后，用纯水流洗至少3个柱管体积，以冲掉乙醇，再用平衡缓冲液流洗至少5个柱管体积来平衡柱子。b）将样品上柱，上样流速控制在60cm/h。c）平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，把UV洗至基线。d）洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，立即用中和缓冲液中和到中性。e）再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于+4-8℃保存。操作中如果没有在线的蛋白监测系统，洗脱峰时可以分阶段收集，Z后根据测定结果合并活性部分。上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2018-09-29 10:02
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牛蛋白C Bovine Protein C BPC 1003说明书

nzymeResearch，EnzymeResearch介绍,EnzymeResearch代理,EnzymeResearch总代,EnzymeResearch**代理,EnzymeResearchZG代理EnzymeResearch是一家拥有超过25年的酶研究的实验室，生产和开发多种用于基本凝血研究的多种酶和辅因子。在过去的十年EnzymeResearchLaboratories为科学家参与止血和血栓形成的研究提供了宝贵支持。EnzymeResearch通过不断追求产品的Z高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。BovineProteinCBPC1003BovineProteinCPurifiedfromfreshcitratedbovineplasmausingacombinationofsaltprecipitationsandcolumnchromatography.ProteinpurityisdeterminedbySDS-PAGEandshowstotalreductionuponincubationwith2-mercaptoethanol.ProteinCisactivatedtotheserineprotease,ActivatedProteinC（APC）,byα-thrombinorthecomplexofα-thrombin/thrombomodulin.ThisAPCisapotentanticoagulantthroughtheselectiveinactivationofFactorsVaandVIlla.Buffercomposition=20mMTris-HCl/0.1MNaCl/1mMBenzamidine/pH7.4*ExtinctionCoefficient（1%）=13.7MolecularWeight=54,300daltons上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2018-09-29 10:03
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人体蛋白C（Human Protein C）HPC 1001 说明书

EnzymeResearch通过不断追求产品的Z高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。EnzymeResearchLaboratories为生物技术公司,制药行业、医院和大学的研究实验室提供用于全方位的纯化抗凝因子。除了其制造能力，EnzymeResearchLaboratories也创新研发领域中的血液凝固技术。HumanProteinCHPC1001HumanProteinCPurifiedfromfreshfrozenhumanplasmausingacombinationofsaltprecipitationsandcolumnchromatography.TheproteinpurityisdeterminedbySDS-PAGEandshowstotalreductionuponincubationwith2-mercaptoethanol.ProteinCisactivatedtotheserineprotease,ActivatedProteinC（APC）,bya-thrombinorthecomplexofa-thrombin/thrombomodulinandisapotentanticoagulantthroughtheselectiveinactivationofFactorsVaandVIIIa.Buffercomposition=20mMTris-HCl/0.1MNaCl/1mMBenzamidine/pH7.4*ExtinctionCoefficient（1%）=14.5MolecularWeight=62,000daltonsAlsoavailable:des-Gla-HumanProteinC上海起福生物科技有限公司联系人：杨建辉400电话：4006551678办公电话：021-50724187传真：021-50724961*8006手机：15921799099企业QQ:4006551678网址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦东新区绣川路561号1102室[详细]
2024-09-29 00:09
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该会员其他资料: 高灵敏度、高性价比单细胞 RNA 测序; 3D 成像表征生物打印的卵巢癌模型; 器官芯片模型中血管生成的3D 图像分析与表征; 利用高内涵3D 成像及分析，肺类器官可作为体外毒性评价的分析模型; 利用诱导多能干细胞来源的细胞模型进行化合物检测的多类型自动化成像分析; 多参数THP-1 细胞分化及细胞因子分泌表型分析试验评价抗炎化合物; 通过高内涵分析软件进行人体干细胞诱导神经元细胞系的3D模型表征分析MolecularDevices; Z新DNA损伤检测法——应用ImageXpress Nano成像分析系统; 活细胞评价细胞周期抑制剂; 个性化治疗之高通量细胞学方法介绍

使用 ScanLater Western Blot protein Ladder 估算蛋白分子量

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