定量western blot ：为什么需要验证抗体

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• 定量western blot ：为什么需要验证抗体

  验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件，因此，验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。在《JBC》杂志中关于抗体验证信息如下:[详细]

  2024-09-30 01:34

  实验操作

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• 蛋白质印迹分析（Western Blot Analysis）

  蛋白质印迹分析（WesternBlotAnalysis）【实验目的】了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用。【实验原理】蛋白质印迹法又称为免疫印迹法，这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术方法。待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的分离和纯化,另外这项技术的应用需要利用待测蛋白的单克隆或多克隆抗体进行识别。如图所示，可溶性抗原，也就是待测蛋白首先要根据其性质，如分子量，分子大小，电荷以及其等电点等采用不同的电泳方法进行分离；通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上；利用抗体（一抗）与抗原发生特异性结合的原理，以抗体作为探针钓取目的蛋白。值得注意的是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白，如牛血清白蛋白对膜进行“封阻”而防止抗体与膜的非特异性结合。经电泳分离后的蛋白往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上,我们把这个过程称为电泳印迹。常用的两种电转移方法分别为:1.半干法:凝胶和固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿的滤纸之间,通电时间为10分钟~30分钟。2.湿法：凝胶和固相载体夹心浸放在转移缓冲溶液中，转移时间可从45分钟延长到过夜进行。由于湿法的使用弹性更大并且没有明显浪费更多的时间和原料，因此我们在这里只描述湿法的基本操作过程。对于目的蛋白的识别需要采用能够识别一抗的第二抗体。该抗体往往是购买的成品，已经被结合或标记了特定的试剂，如辣根过氧化物酶。这种标记是利用辣根过氧化物酶所催化的一个比色反应，该反应的产物有特定的颜色且固定在固相载体上，容易鉴别。因此可通过对二抗的识别而识别一抗，进而判断出目标蛋白所在的位置。其他的识别系统包括碱性磷酸酶系统和125I标记系统。【实验操作】⒈.蛋白质的分离根据目的蛋白的性质，利用电泳方法将其进行分离。为提高电转移的效率，通常采用SDS/PAGE技术。分离实验结束后，首先将样品墙的上边缘用小刀去除，然后在胶板的右上角切一个小口以便定位，小心放入转移缓冲溶液中待用。⒉.电转移⑴准备PVDF膜根据胶的大小剪出一片PVDF膜，膜的大小应略微小于胶的大小。将膜置于甲醇中浸泡1分钟，再移至转移缓冲溶液中待用。夹心放置顺序⑵制作胶膜夹心在一浅盘中打开转移盒，将一个预先用转移缓冲溶液浸泡过的海绵垫放在转移盒的黑色筛孔板上，在海绵垫的上方放置经转移缓冲溶液浸湿的3MM纸，小心地将胶板放在3MM纸上，并注意排除气泡。将PVDF膜放在胶的上方同时注意排除气泡，再在膜的上方放上一张同样用转移缓冲溶液浸湿过的3MM纸并赶出气泡，放置另一张浸泡过的海绵垫，关闭转移盒。将转移盒按照正确的方向放入转移槽中，转移盒的黑色筛孔板贴近转移槽的黑色端，转移盒的白色筛孔板贴近转移槽的白色端，填满转移缓冲溶液同时防止出现气泡。⑶电转移连接电源,在4°C条件下维持恒压100v，1小时⒊.免疫检测⑴膜染色断开电源，将转移盒从转移槽中移出，将转移盒的各个部分分开。用镊子将PVDF膜小心放入一个干净的容器中，用TBS缓冲溶液进行短暂清洗，从膜上剪下一条宽约5mm的膜放入另一个干净的容器中。将这条膜在染色液中浸泡1分钟，然后在脱色液中脱色30分钟,确定蛋白质已经转移到PVDF膜上。⑵膜的封闭和清洗对于没有进行染色的膜，首先倒出TBS缓冲溶液,加入3%封闭缓冲溶液,轻轻摇动至少1小时。倒掉3%封闭缓冲溶液，并用TBS缓冲溶液清洗3次,每次5分钟。⑶一抗倒掉TBS缓冲溶液，加入10ml0.5%封闭缓冲溶液及适量的一抗，轻轻摇动1小时以上。从容器中倒出一抗及封闭缓冲溶液，用TTBS缓冲溶液清洗两次，每次10分钟。⑷二抗倒出TTBS缓冲溶液，加入5ml0.5%封闭缓冲溶液及适量的二抗。轻轻摇动30分钟，倒出二抗及封闭缓冲溶液，用TTBS缓冲溶液清洗两次，每次10分钟。⑸检测倒掉TTBS缓冲溶液，并加入显影剂，轻轻摇动PVDF膜，观察显影情况，当能够清晰的看到显色带时，用蒸馏水在30分钟内分三次清洗PVDF膜以终止显色反应的继续进行。【实验结果】检查膜上显色结果，蓝紫色带所对应的即是目标蛋白的位置。WesternBlotAnalysis【Purpose】ComprehendthetheoryofWesternblotting;understanditsbasicmanipulationandapplication.【Principle】WesternblottingisalsocalledImmunoblotting.Itisakindofimmunochemicaltechniqueswhichisusedtodetectaproteinimmobilizedonamatrix.Thetargetproteincanbeinacrudeextractoramorepurifiedpreparationandthemonoclonalorpolyclonalantibodyagainstthisproteinisnecessarytohelpustorecognizetheantigen.AsintheFigure,solubleantigens（thetargetprotein）maybeseparatedbyelectrophoresisbasedonitsmolecularweight（SDS/PAGE）,sizeandcharge（nondenaturatinggelelectrophoresisorisoelectricpoint（isoelectricfocusing）.Aftertheseparation,theproteinsaretransferredfromthegeltoaPVDFmembrane.Onceonthemembraneantibodies（firstantibodies）canbeusedtoprobeforthepresenceofparticularproteinbecauseofthespecificallybindingofantigenwithagainstit.Non-specificbindingsitecanbe“blocked”usingothernon-specificproteinsuchasbovineserumalbuminbeforeaddingfirstantibodytoavoidnon-specificbinding.Proteintransferismostcommonlyaccomplishedbyelectrophoresis，Thisprocedureiscalledelectrophoreticblotting.Thetwocommonelectrophoreticmethodsare:⒈Semi-dryblotting,inwhichthegelandimmobilizingmatrixaresandwichedbetweenbuffer-wettedfilterpapersthroughwhichacurrentisappliedfor10-30minutes.⒉Wet（tank）blotting,inwhichthegel-matrixsandwichissubmergedintransferbufferforelectrophoresis,whichmaytakeaslittleas45minutesormaybeallowedtocontinueovernightWeonlydescribewetblottinghere,sinceitpermitsgreaterflexibilitywithoutbeingsignificantlymoreexpensiveintimeormaterials.Thedetectionoftargetproteinisusingasecondantibody,whichcanrecognizethefirstantibody.Typically,thesecondantibodyispurchasedalreadyconjugatedtoalabe领agentsuchastheenzymehorseradishperoxidase.Thismarkeristhenvisualizedbyacolorimetricreactioncatalyzedbytheenzymewhichyieldsacoloredproductthatremainsfixedtothemembrane.Thus,itispossibletorecognizefirstantibodythroughrecognizingsecondantibody,andthenidentifythepositionoftargetprotein.Otherdetectionsystemsincludealkalinephosphataseand125Ilabels.【Materials】⒈Apparatus:ApparatusofSDS-PAGE,ElectroblottingApparatus,Powersupply,PVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）,Whatman3MMpaper,AdditionalTools:Forceps,spongepad,scissor,gloves,smallplasticorglasscontainer,Shallowtray.⒉Reagents:⑴10xtransferbuffer（1L）:30.3gTrizmabase（0.25M）,144gGlycine（1.92M）,pH首ldbe8.3;withoutadjustment.⑵1xtransferbuffer（2L）:400mlMethanol,200ml10xtransferbuffer,1400mlwater.⑶TBSbuffer:Add1.22gTris（10mM）and8.78gNaCl（150mM）to1LdistilledwaterandadjustpHto7.5withHCl.⑷TTBSbuffer:1LTBSbufferadd0.5mlTween20（0.05%）.⑸Firstantibody:antibodyagainstthetargetprotein.⑹Secondantibody:goatanti-rabbit-HRP（horseradishperoxidase）.⑺3%Blockingbuffer（0.5L）:Add15mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑻0.5%Blockingbuffer（0.5L）:Add2.5mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑼Developingreagent:1mlchlonoaphtholsolution（30mg/mlinmethanol）,add10mlmethanol,addTBSbufferto50mlandadd30ul30%H2O2.⑽Stainingbuffer:Add1gamidoblack18B（0.1%）,250mlisopropanol（25%）and100mlaceticacid（10%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.⑾Destainingbuffer:Add350mlisopropanol（35%）and2mlaceticacid（2%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.【Procedure】⒈.SeparationofProteinRunanelectrophoreticseparationofknownantigenicproteins.Themethodofseparationdecidedbythecharactersoftargetprotein,butforsufficientlytransferring,themostcommonmethodisSDS-PAGE.Afterseparation,removeuppersideofsamplewellswitharazorblade.Notchingbottomright-handcornerofgelfororientationandputgelintransferbufferuntilreadytouse.⒉.Electrotransfer⑴PreparationofmembraneCutapieceofPVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）accordingtothesizeofgel.Incubateinmethanolforabout1minonarockeratroomtemp.Removemethanolandequilibratemembranein1xtransferbufferuntilreadytouse.⑵Arrangegel-membranesandwichInashallowtray,openthetransfercassette.Putawell-soakedspongepadontheblackpieceofthetransfercassetteandawetted3MMpaperonthespongepad.Placethegelonthepaperandarrangewellsothatallairbubblesareremoved.LaythePVDFmembraneonthetopofgelandremoveanyairbubbles.Placeawettedsheetof3MMpaperoverthePVDFmembraneandremovethebubble.Coveredwiththesecondwell-soakedpad.Closethesandwichwiththewhitepieceofthecassette.Mountthesandwichinthetransfertank;puttheblacksidesneartheblacksideofthedevice.Fillthebuffertankwiththetransferbuffer.⑶Electrotransfer:Attachtheelectrodes.Setthepowersupplyto100V（constantvoltage）for1hat4°C.⒊.Immunodetection⑴MembranestainingDisconnecttransferapparatus,removetransfercassette,andpeel3MMpaperfrommembrane.Removethemembranetoasmallcontainer.Add10mlTBSbufferandwashforshorttime.Cutoutonestripewith5mmwidthandputinanothercleancontainer.Stainthisstripeinstainingbufferfor1min.Destainfor30minindestainingbuffertocheckwhetherproteinhasbeentransferredfromgeltomembraneornot.⑵MembraneblockingandwashingForotherpartofmembrane,pouroffTBSbuffer.Add3%blockingbuffer，rockgentlyforatleast1h.Pouroff3%blockingbufferandrinsebrieflywithTBSbufferthreetimes,5minutesforpertime.⑶FirstantibodyPouroffTBSbuffer.Addfirstantibodyatappropriatedilutionin10ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyforatleast1h;pourofffirstantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑷SecondantibodyPouroffTTBSbuffer.Addsecondantibodyatappropriatedilutionin5ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyfor30min,pouroffsecondantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑸DetectionPouroffTTBSbufferfrommembraneandadddevelopingreagent,RockPVDFgently,monitoringdevelopment.Whenthebandscanbeseenclearly,stopdevelopmentbywashingmembranewithdistilledwaterfor30minuteswith3changes.【Result】Checkthebandsonmembrane,thebandwithblue-purplecolorcorrespondingtothetargetprotein.实验材料】1.实验器材SDS/PAGE实验相关材料；电转移装置；供电设备；PVDF膜（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）；Whatman3MM纸；其他工具：镊子、海绵垫、剪子、手套、小塑料或玻璃容器、浅盘。Detection2.实验试剂⑴10x转移缓冲溶液（1L）：30.3gTrizmabase（0.25M）,144g甘氨酸（1.92M）,加蒸馏水至1L,此时pH约为8.3，不必调整。⑵1x转移缓冲溶液（2L）：在1.4L蒸馏水中加入400ml甲醇及200ml10x转移缓冲溶液。⑶TBS缓冲溶液:将1.22gTris（10mM）和8.78gNaCl（150mM）加入到1L蒸馏水中，用HCl调节pH至7.5。⑷TTBSbuffer：在1LTBS缓冲溶液中加入0.5mlTween20（0.05%）。⑸一抗：兔抗待测蛋白抗体（多克隆抗体）。（6）二抗：辣根过氧化物酶标记羊抗兔。⑺3%封阻缓冲溶液（0.5L）：牛血清白蛋白15mg加入TBS缓冲溶液并定容至0.5L，过滤，在4°C保存以防止细菌污染。⑻0.5%封阻缓冲溶液（0.5L）：牛血清白蛋白2.5mg加入TTBS缓冲溶液并定容至0.5L，过滤，在4°C保存以防止细菌污染。⑼显影试剂：1ml氯萘溶液（30mg/ml甲醇配置），加入10ml甲醇，加入TBS缓冲溶液至50ml，加入30ul30%H2O2。⑽染色液：1g氨基黑18B（0.1%），250ml异丙醇（25%）及100ml乙酸（10%）用蒸馏水定容至1L。⑾脱色液：将350ml异丙醇（35%）和20ml乙酸（2%）用蒸馏水定容至1L。[详细]

  2018-09-27 10:01

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  2024-09-27 05:16

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  2008-10-23 00:00

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  2015-09-09 00:00

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• 一文教你如何在Western Blot中选择一抗？

  说到免疫印迹Z重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体，本文着重给大家介绍一下一抗的选择。 一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用时我们应该怎么选择呢？ 检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择，为了在试验过程中尽快找到Z适合的抗体，往往需要考虑以下几种因素： 1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。 2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但极易出现非特异性条带。 3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原（全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等）免疫宿主而制备得来，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程，有些抗体要求样本经过某些特殊处理[详细]

  2019-11-18 17:12

  实验操作

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• 数显推拉力计为什么需要校准？

  就目前来看，产品结构更新换代是行业持续发展的源泉。随着经济的发展，数显推拉力计已由传统的工业领域，如治金、衡器、包装等行业向许多边缘及交叉领域方面拓展，如汽车检测及自控、桥梁及公路检测、织布机、化纤制造、建材试验等领域发展，这些行业不断增长的需求，要求数显推拉力计新品不断涌现。为什么有时候数显推拉力计要校准，对数显推拉力计不懂的朋友可能会这样问，我总结出几点原因，请大家继续往下看：数显推拉力计使用时，在纬度跨越比较大的时候，重力加速度g就会随着纬度和高度产生变化，蕞后称出的值会有差别。这就需要通过校准来消除重力加速度g对质量m的影响。虽然我们开机时，数显推拉力计显示的是零点，不过这时候测量出的数据我们不能确定是否符合极ng确度测试标准，只能说明数显推拉力计零位的稳定性是合格的。数显推拉力计的位置移动、存放时间和环境变化都会影响数显推拉力计的极ng确测量，所以在使用数显推拉力计前都要进行校准的操作。我们常说的克(g)，公斤(kg)，吨(t)，等单位是质量单位，数显推拉力计的原理造成称出的实际上是重量，G=mg，G为重量，m为质量，g为重力加速度。另外，不同季节的外界温度也会使数显推拉力计的读数发生偏差，校准可以蕞大限度的消除这些偏差校准主要分为内部校准(内校)和外部校准(外校)两种。外部校准:指使用数显推拉力计外部的标准器具校正天平；内部校准：指数显推拉力计内部安装有校准零件。内部校准分全自动及手动校准。全自动校准的数显推拉力计一般只需按一个按键，即可自动完成校准步骤。手动内校其实与外校区别不大，另外补充提示：数显推拉力计通常预热半小时以上再校准效果蕞好。[详细]

  2018-11-24 10:00

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• 如何对化学发光Western Blot (1D 和2D) 进行高质量的成

  如何对化学发光Western Blot (1D 和2D) 进行高质量的成[详细]

  2024-09-15 22:18

  其它

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• Western Blot结果出乎意料，有可能是转印海绵垫惹的祸

  转印问题的常见根源是三明治结构的松紧度。三明治结构一定要紧！请定期更换转印海绵垫，以确保实验结果的准确性。使用额外的滤纸来填补海绵的磨损，可能会导致传输不一致。 我们都会定期更换海绵垫，因为它们会吸收污染物，随着时间的推移，转印海绵垫也会被污染。使用干净的海绵垫对荧光应用尤为关键，因为这些污染物会产生自发荧光，从而导致高背景。 [详细]

  2024-09-30 01:24

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• 为什么高科技纺织工程需要扫描电镜分析

  在新石器时代，人类就开始利用树皮等韧皮纤维纺纱织布。自古以来，纺织工业基本上都是以天然纤维作为原材料的，并对天然纤维过度依赖。在过去的几十年里，合成纤维逐渐引起了人们的兴趣，其价格便宜，容易生产，而且性能更好。与此同时，为了提高产品的质量，人们研究了很多化学处理方法来提高天然纤维和合成纤维的光滑度与韧性。阅读这篇博客，可以了解扫描电镜如何在这一发展过程中发挥基础性作用。高性能运动服的秘密不仅在于设计，而且在于产品背后的创新技术。特殊的编织技术，结合极为先进的纺织材料，是开发新颖高性能运动服，军装和其他许多高级工程织物中两个Z重要的方面。合成纤维的发展，使得纺织品的弹性大幅度提高，并降低了与空气或水的摩擦系数。如何用扫描电镜观察各类化学物质在纤维中的作用为了提供这些技术参数，我们需要对纤维的化学成分，尺寸和表面形貌进行研究。纤维这些特征的尺寸对于光学显微镜来说太小，难以观察，所以扫描电镜显成为纺织材料开发人员的普遍选择。扫描电镜不仅可以提供编织图案的图像，而且还可以检测纤维的实际表面以及所有的表面缺陷。图1&2：在扫描电镜中，不同放大倍率和不同角度下的一种羊毛样品纺织材料通常是非导电的，因此，拥有低真空的扫描电镜（SEM）对于得到好的图片是非常重要的。通过特定的化学处理可以去除表面杂质或粗糙部分，从而平滑表面。扫描电镜(SEM)可以用来关联曝光时间和化学品的浓度，以优化生产率，和减少不必要的成本开销。空心纤维要求更精密的生产流程，但Z终产品的附加值引起了许多大厂商的注意。除了在原材料上的节省，纤维还可以应用于更加多样化的领域，并提高弹性和降低重量。热交换特性也可以根据应用程序设计。研究这些纤维的空腔形状，对于验证生产过程的准确性，以及观察和测量它们对热和张力响应关系是至关重要的。为什么SEM技术非常适合新材料的研究与开发飞纳电镜拥有各种各样的配件以及快速成像的特点，成为新材料研究和开发的一种强有力的工具，其对于Z终产品的检测可以成为质量检测的一部分。利用扫描电镜，可以观察和记录纤维在拉伸或者温度变化过程中的变化情况。将纤维用树脂包埋，做成金相，还可以观察到纤维的截面形貌。[详细]

  2018-08-22 10:00

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• IMPS/IMVS 测试为什么需要光强控制

  IMPS/IMVS 测试为什么需要光强控制[详细]

  2024-09-28 01:21

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  数显推拉力计属高精密仪器，使用数显推拉力计时需要细心呵护，并定期做保养，那么为什么要对数显推拉力计进行定期保养呢？原因很简单，Z主要的是需要延长数显推拉力计的使用寿命。想延长数显推拉力计的使用寿命的用户可以点击资料下载。本文由数显推拉力计：http://www.shtuilali极.com/cqx0709-ParentList-885341/友情提供阅读本文的还阅读：东日扭力扳手扭力扳手价格定扭矩电动扳手扭力检测仪拉力测试仪数显推拉力计扭矩测试仪[详细]

  2024-09-27 11:03

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• 何谓超音波清洗机脱气(degassing) ? 为什么需要脱气?

  何谓超音波清洗机脱气(degassing) ? 为什么需要脱气?[详细]

  2015-08-21 00:00

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• GE给您完全的蛋白印迹方案--Western Blot相关产品秋季开学特惠

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  2012-09-05 00:00

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  真空干燥箱为什么需要先抽真空再加热呢[详细]

  2016-03-30 00:00

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  QUV 和 Q-S UN 加 速老 化测 试仪 需要 使用特 殊的 校准 辐照度计。 CR 10 和 U C10 用 于荧 光灯 UV 灯 ， CR 20 和 U C20 用 于 氙灯。 这 些标准校准仪可以溯源到 NIST 确 保传 递给测 试样 品的 辐照 度等于 用户 测试 方法 中要求的辐 照度 。在 本 Q-Tip 中， 我们 将介绍 光谱 失配 的概 念， 以解 释为什 么我 们的 灯具 必须 用我 们的辐射 测量 设备 进行 专 门的 校准 。我 们还 将 研究 为什 么 在 340 nm 控 制点 的 校准 需要 使用 特定 于 滤 波器的辐射计进行，而在 420 nm 的校准则不 需要。[详细]

  2024-09-20 13:35

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  2018 年，飞纳台式场发射扫描电镜 Phenom LE 横空出世，成为台式场发射，将台式电镜的分辨率提升至 2.5 nm。那么您可能不禁会问，究竟什么是场发射电镜，其优势是什么？为何飞纳能够将场发射的设计融入到台式电镜？飞纳台式场发射能为您创造哪些价值？ [详细]

  2020-06-30 14:50

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  小鼠抗核抗体（ANA）定量EIA试剂盒使用说明原理本实验采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠ANA单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的ANA与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液，颜色变黄，在450nm处测OD值，ANA浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中ANA浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体稀释液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：500ng2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml酶标抗体浓缩液（100X）120ul终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。正常标本测定前用标本稀释液作1：10稀释（取20ul，加标本稀释液180ul,稀释10倍）。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成1000ng/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入1000ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.酶标抗体浓缩液用酶标抗体稀释液作1:100倍稀释（示例：10ul浓缩液+990ul稀释水）。5.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。。3.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。6.每孔加入100ul终止液混匀。7.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应ANA含量，再乘上稀释倍数10即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的ANA检测浓度小于4ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的小鼠ANA。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于12％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:01

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• HunterLab测色差仪需要定期维护保养吗？为什么？多久做一次维保？

  HunterLab色差仪在使用前，都要进行校正，即使用色差仪的黑卡或者黑玻璃、白板进行校正。如用黑玻璃和白板校正，即将色差仪此时读到的数据对标到色差仪内部标准值。 当点击测量时，测色仪开始闪光到最终被接收分析，中途要经过诸如UV滤光片、D65滤光片、积分球、反射镜、目镜、多个光纤头、镜头等。 如果您的测色仪是新仪器，仪器校正读到的白板当然能对应到测色仪内部标准值，也就是白板背部的标准数据。但是随着测色仪的使用，不可避免有灰尘、待测样进入仪器内部，并附着在光线传播过程中的各个元器件上。 本来被接受的应该是白光，但是随着测色差仪长时间的使用，色差仪内部的污染使得接收光其实是略微泛黄的光。而校准则将这黄光对标到白光，于是便产生一种增白的效果。那么当测量样品时，校正时产生的增白效果，同样会作用在您的样品，于是测量结果看起来相比较于以往更白了。 通过定期的维保，清理内部的污染，将增白效果去除，使测色仪测量反馈的是真实数据。往往维保完成后，对比维保前的数据，测试结果会更黄一点，如L*变小，b*变大，YI变大，WI变小的等现象。 维保建议一年做一次。HunterLab中国技术与售后服务中心[详细]

  2024-06-28 14:30

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