细胞核的分离技术说明

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2024-10-03 20:16 1130阅读次数

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• 细胞核的分离技术说明

  细胞核的分离技术说明(1)细胞悬浮于适量预冷的溶液A中，吹打均匀后加入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，一手持之，一手将匀浆杵垂直插人管中，左右转动同时上下移动匀浆杵，研磨若干次，用3层纱布过滤后(也可采用低速离心的方法)以去除未破裂细胞，后收集匀浆液于离心管中，然后制备一张滴片，做好标记，显微镜下观察完整细胞数量。如果细胞数量过多，则继续匀浆，如果非常少，则匀浆完毕。(2)将装有匀浆液的离心管配平后，放人低温离心机，4℃，以2500r／min离心15min；弃上清，将沉淀物用6ml含0．1％(V/V)TitonX-100的溶液A悬浮沉淀物，以2500r／min，离心15min；弃上清。(3)将沉淀悬浮于6ml溶液B中，取6支超速离心管，每管加6ml溶液C，然后把细胞核悬液铺在溶液C上层，以25000r／min离心60min。(4)弃去上清，用溶液A轻轻荡洗管壁及沉淀物表面两次。将离心管倒置，用滤纸擦干管口。(5)向离心管底部滴加几滴溶液A，用玻璃棒轻轻搅匀，然后补加10ml溶液A，以2500g离心20min，弃上清液，沉淀物为纯化的细胞核。[详细]

  2024-10-03 20:16

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• 细胞核基质的基本特征

  细胞核基质的基本特征1．核基质的一般形态结构要在电镜下观察到核基质，一般的方法为生化抽提技术加上整装样品电镜技术，方可清晰地显示核骨架一核纤层一中间纤维网架结构体系。由蛋白纤维构成的网架结构充满核内的整个空间．残存的核仁被包围在该网架中。核纤层由中间纤维蛋白构成，位于内层核膜下方，核基质的纤维网架与核纤层有着广泛的结构联系。核基质纤维粗细不均，直径可为3～30nm，推测其纤维单体的直径是3～4nm，较粗的纤维直径呈3nm的倍数，提示为单纤维的聚合体。2．核基质的化学成分由于提取方法和所用盐溶液的不同，在电泳上显示的核基质蛋白成分有相当的差异。核基质成分较为复杂，不像细胞质骨架和核纤层那样简单，不同类型细胞，其细胞周期不同阶段以及正常与癌变细胞的核基质成分都可能有所差别。已检测出的核基质成分有10多种．相对分子质量为40～60kD，多数是非组蛋白成分，其中相当一部分为含硫蛋白质。二琉键对核基质完整性起极为重要的作用，破坏二硫键可引起核基质的瓦解。由于核基质蛋白成分常与一部分DNA和RNA有紧密的结合，与RNA的结合对于维持核骨架三维网络结构的完整性是必要的，与少量DNA的结合是一种功能性结合，所以有人认为核基质成分应该说是一类核蛋白。常见的核基质蛋白有下列几种：(1)核基质蛋白，相对分子质量大于50k1)，主要定位于核基质，且呈现纤维颗粒样分布。很可能是核基质上DNA襻环的结合蛋白。(2)Nuc2+蛋白，Nuc2+蛋白存在于核基质以及染色体支架中。相对分子质量为76kD，有一个结构域与富含AT的DNA序列有特异的亲和性。Nuc2+蛋白能在体外自我组装，是一种具有聚合能力的酸性结合蛋白质。Nuc2+蛋白可能在有丝分裂期染色体分离过程中起重要作用。(3)核内肌动蛋白，有报道在间期细胞核内发现肌动蛋白，这些核基质中的肌动蛋白可能与mRNA前体的加工过程有关，如果向细胞核内注射抗肌动蛋白抗体及肌动蛋白结合蛋白，能YZ细胞核内的mRNA的转录。(4)附着区结合蛋白，与骨架结合的DNA序列(简称MAR)往往是富含AT的DNA序列．长度：300～1000bp。是一种MAR结合蛋白，相对分子质量为95kD，广泛存在于各种组织中，不具有组织特异性。通常特异性地与DNA襻环两端的序列结合，将其锚定在核基质上，以形成DNA襻环。(5)DNA拓扑异构酶Ⅱ，是间期的核基质和分裂期染色体骨架的重要成分之一。3．核基质结合蛋白近年陆续发现了一些核骨架结合蛋白，又称核基质结合蛋白，是一些与DNA和RNA代谢密切相关的酶类、细胞信号识别和细胞周期的调控因子以及病毒特异性的调控蛋白，紧密地结合在核基质结构上，协助核基质蛋白共同完成核基质网架的构建和生物学功能。4．核基质的功能一般认为，核基质为细胞核内组分布局提供了一个结构支架，细胞核内许多重要的生命活动与核基质有关。(1)核基质与DNA复制原核细胞的DNA复制是结合在细胞膜上进行的。近年来研究表明真核细胞中DNA复制与核膜没有直接的关系，更无专一的结合位点，复制中的DNA均结合在核基质上，并且DNA复制所必需的DNA聚合酶和DNA拓扑异构酶Ⅱ都可能在核基质上有特定的结合位点。DNA襻环的根部结合在基质纤维上，DNA以襻环的形式通过核基质结合序列与DNA拓扑异构酶Ⅱ的结合锚定到核基质上，调控DNA的复制。与DNA复制有关的酶及调控因子与DNA襻环共同锚定于核基质上形成DNA复制复合体，进行DNA复制合成。近年来证实，真核细胞中的DNA聚合酶结合于核基质上，通过结合于核基质上而被激活。所以可以认为，在真核细胞中核基质是DNA复制的空间支架。(2)核基质与基因表达在细胞核这样的小小的空间内容纳基因要有序表达，必须在时空上进行有序的调节，在一定时间内只有极少数基因活跃表达，其他基因暂时处于关闭状态。在鸟类和哺乳动物细胞中，具有转录活性的基因是结合在核基质上的，基因只有结合在核基质上才能进行转录。具有转录活性的基因两端存在MAR序列，可以经DNA拓扑异-构酶Ⅱ结合到核基质上，并且MAR序列的存在可增加基因的转录活性。核基质是DNA-的转录位点,RNA的合成是在核基质上进行，RNA聚合酶在核基质上具有结合位点。另外,RNA的剪切加工与运输也是在核基质上进行，mRNA前体(hnRNA)与核基质的相结合，hnRNA上的特异性片段polyA可能是hnRNA在核基质上的附着点。(3)核基质和细胞癌变有些癌细胞如肝细胞的核基质结构很不规则，而且其蛋白组成l与正常细胞核基质有显著不同。肿瘤细胞核常呈异常的形态结构，与核基质结构及其蛋白组成的异常密切相关。有实验证明，癌基因是结合在核基质上才能转录。一些致癌物、促癌剂能紧密与核基质结合，并通过核基质发挥其致癌、促癌作用。某些YZ癌细胞增殖的药物可能通过干扰基质的DNA拓扑异构酶II起作用的。[详细]

  2024-10-03 18:27

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• 分离技术的地位与作用

  分离技术的地位与作用[详细]

  2024-09-13 06:36

  其它

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• 不锈钢分析仪的技术说明

  不锈钢分析仪的技术说明[详细]

  2007-12-21 00:00

  安装说明

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• 体细胞核转移技术成功培育灭绝动物活体胚胎

  来自新南威尔士大学的科学家们报告称，他们已经成功培育出30年前灭绝的一种动物的活体胚胎。这项突破能够Z终被用于复活其它已经灭绝的物种。保护生物学家迈克尔-马赫尼告诉《悉尼先驱晨报》道：“这项技术是**次用于获取一个灭绝的物种。”科学家称，成功发育成蝌蚪也只是时间问题。这项试验使用了保存完好的胃育蛙的非活体遗传物质，这种青蛙在20世纪80年代中期已经灭绝。研究人员将DNA注入到一种类似青蛙物种的卵子中，这一过程与克隆绵羊多利的过程是不同的。而且在几天之后，胃育蛙的胚胎在30年后**次获得了生命。新南威尔士大学的研究人员麦克-阿彻说道，Z初蛙卵似乎并不活跃，但是随后突然有一个细胞分裂了，然后它不断的分裂。科学家称，尽管胚胎Z终未能发育成一只蝌蚪，但是它只是时间问题。体细胞核转移技术Z终会成功将这一物种或者其它的物种带回到可生育的成熟期。阿彻说道：“我们确实期待这种动物再一次活过来。”直到Z近，复活灭绝动物的概念才摆脱科幻小说的范围，但是随着细胞移植技术的进步，它能够为那些不断走向灭亡的无数物种以及那些在历史中灭绝的物种带来一线希望。[详细]

  2018-10-12 10:00

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• Flame技术说明

  海洋光学推出的flame系列光谱仪，继承了USB系列小巧坚固的外壳，并大幅改进了内部设计，集成了自动化的生产工艺。在USB系列的基础上，flame提升了热稳定性和台间一致性，并在多方面改善了用户使用体验，具体请查看flame技术说明。[详细]

  2018-08-17 10:00

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• 细胞DNA、RNA的分离鉴定技术

  细胞DNA、RNA的分离鉴定技术[详细]

  2015-10-28 00:00

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• HS32-TY-3手持式烟气分析仪的技术说明

  HS32-TY-3手持式烟气分析仪的技术说明HS32-TY-3型手持式烟气分析仪能自动测量烟气中HCL气体浓度。选用美国GAST烟气采样泵，安全可靠。可供环保、卫生、劳动、安监、军事、科研、教育等部门用于各种锅炉、炉窑烟气的排放检测。手持式烟气分析仪主要特点贴片工艺，质量可靠自动存储数据，数据存储量大进口传感器，测量精度高，使用寿命长可选配备烟气冷凝除湿系统，减小测量误差美国GAST公司生产烟气采样泵，质量可靠，负载特性好手持式烟气分析仪测试气体品种全，可根据用户要求选择安装多组气体传感器，选择范围宽数据存储能力100组冷凝器工作电流3.工作电源交流或交直流两用，直流保证连续工作时间不小于5小时手持式烟气分析仪外型尺寸便携式340×260×135mm主机重量便携式3.0Kg手持式烟气分析仪功　　耗≤50W（不含冷凝）手持式烟气分析仪技术参数　　被测气体参数范围HCL　0-20ppmZda量程可扩展到:0-200mg/m30-150ppm以上是该仪器的详细资料，如您还想进一步的了解该产品，欢迎拨打我公司的客服电话，我们会尽Zda的努力为您解忧。???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????[详细]

  2018-10-07 10:03

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• SZ71- GDYS-101SN3余氯测定仪的技术说明

  SZ71-GDYS-101SN3余氯测定仪的技术说明*余氯测定仪采用传统的DPD检测方法，符合国家标准方法GB/T5750.11-2006。*采用专有的试剂盒合成技术将缓冲显色一体化，简化测试过程，实现一步式反应，提高检测速度。*内置工作曲线，无需配置标准溶液，仅需零点校正，加入专用试剂包显色即可现场快速读取余氯的浓度。*采用固体发光器件既作光源又作单色器，与传统分光系统相比，光学系统结构简单，仪器具有抗震、抗潮性能。*光源/单色器、比色槽、传感器一体化，无可动部件，同时采用脉冲供电方式，光源使用寿命可达10万小时，大大提高了仪器的精度、灵敏度和可靠性。*余氯测定仪体积小，重量轻，适于野外现场及实验室使用。*仪器具有省电模块，采用9V电池供电，30分钟后自动关机。*余氯测定仪具有电量自诊断功能，自动提示电量不足。*光源:520nm*稳定性:±0.00bs/20min*测定下限:0.01mg/L*余氯测定仪测量范围:0.00~2.50mg/L*测量时间:＜2分钟*测量精度:±5％*环境温度:15℃~40℃*电源要求:DC9V*余氯测定仪尺寸:170×90×35mm*重量:300g*主机1台*比色器具1套*试剂1套（50次）[详细]

  2024-09-30 08:03

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• 离心机分离细胞技术.pdf

  离心机分离细胞技术.pdf[详细]

  2009-03-19 00:00

  报价单

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• 磷酸化细胞核因子 p-p65NFKB多抗

  应用磷酸化细胞核因子p-p65NFKB多抗实验：试验验证过适用于Westernblotting实验、免疫组化实验（Immunohistochemistry）、ELISA实验。p-p65NFKB多抗说明书，请打电话询要。乳腺癌相关抗原包装规格：0.1ml、0.2mlAnti-phospho-NFKBp65：鼠源单抗、兔源多抗重要提示：磷酸化细胞核因子p-p65NFKB多抗避免重复冻融，专为科研实验使用。欢迎打电话咨询详情！人幽门螺旋菌IgG人HSVⅡ-Ab试剂盒elisa法人抗弓形体IgM抗体犬ISR-βelisa试剂盒大鼠甘丙肽/甘丙素人β乳球蛋白人NP-Y试剂盒elisa法兔S-100elisa试剂盒犬白细胞分化抗原6人histon-H2belisa试剂盒小鼠胰蛋白酶人可溶性白细胞分化抗原21大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类[详细]

  2018-11-05 10:00

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• 液态样品物理的分离浓缩技术(1)

  液态样品物理的分离浓缩技术(1)[详细]

  2024-09-11 18:03

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• ASCO电磁阀技术说明

  ASCO电磁阀里有密闭的腔，在不同位置开有通孔，每个孔连接不同的油管，腔中间是活塞，两面是两块电磁铁，哪面的磁铁线圈通电阀体就会被吸引到哪边，通过控制阀体的移动来开启或关闭不同的排油孔，而进油孔是常开的，液压油就会进入不同的排油管，然后通过油的压力来推动油缸的活塞，活塞又带动活塞杆，活塞杆带动机械装置。这样通过控制电磁铁的电流通断就控制了机械运动。美国ASCO成立于1948年,MAC阀门公司是北美Zda的电磁阀生产厂，拥有70多项ZL技术，专业设计制造高性能的空压电磁阀。ASCO电磁阀以速度快、重复度高、环境耐受性强而著称。ASCO的电磁阀结合了阀门高速运动所需的所有设计理念及60年的阀门制造经验,公司将阀门的性能发挥到您无法相信的极限,可以满足您任何速度及极ng确度上的严格要求,是您在高速、极ng确的应用中**的选择,Z重要的是原厂18个月不限次数品质保证，寿命特长，价格合理。同时ASCO电磁阀拥有与其他厂家截然不同的安装方式：串接，这种结构可以方便连接多达128只阀门而且不用安装底板并可任意拆装，极大方便了实际应用的灵活性并节约成本。ASCO电磁阀的特点1、ASCO新线圈的ZL、椭圆的磁铁通过芯有更多的磁力2、平衡式的设计、不受进气压力的变化影响3、平衡式提动阀、阀杆上无其它轴封无磨擦4、很强的弹簧回力、在低压时有足够的回位5、气孔面积为0.0024IN2-不易堵塞6、高出力、短行程-反应速度快7、短行程、锥形排气底座设计、减少撞击-寿命长8、零部件少、设计简单-故障少ASCO电磁阀，在世界上的应用非常多广泛，我公司经销ASCO电磁阀都是直接从厂家直接进口的，ASCO电磁阀详情前联系我。欢迎新来客户前来选购询价。ASCO电磁阀其独特的结构设计及zhuo越的性能品质，在北美有26%的市场占有率。其使用客户45%为包装机械，其余分别为选别机械、轮胎机械、开矿业、汽车工业、电子工业、铝制品工业、木材工业、造纸工业、印刷工业、食品工业及饮料业等。选别机械：大米色选机、豆类色选机、药丸色选机、咖啡色选机、烟叶分捡机等。上面给大家简单的介绍了ASCO的电磁阀，大家对这些也有了简单的了解，如有疑问请电话咨询我，欢迎新老客户前来选购询价。[详细]

  2018-09-04 10:00

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• 力士乐电磁阀,技术说明

  力士乐电磁阀,技术说明博世自动化技术部与原力士乐公司于2001年合并成为博世力士乐公司,属博世集团全资拥有,但独立进行业务运作,提供工业液压,电子传动与控制,线性传动与组装技术,气动,液压传动服务以及行走机械液压方面的传动与控制解决方案博世力士乐公司注册总部位于德国斯图加特,而营运总部及董事局总办事处则设于德国洛尔.原公司早于1795年成,及后不断致力在各制造技术领域展.Z近50年来,博世力士乐在国际液压市埸一直处于世界领xian的位置.力士乐电磁阀,技术说明[详细]

  2018-11-07 14:16

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• Lightning-Link?耦合技术说明

  Lightning-Link?耦合技术说明[详细]

  2024-09-11 17:53

  操作手册

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• 选择金属元素分析仪器的请进—技术说明

  选择金属元素分析仪器的请进—技术说明[详细]

  2008-03-01 00:00

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• 密度梯度超速分离技术应用新时代

  密度梯度超速分离技术应用新时代[详细]

  2012-03-26 00:00

  安装说明

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• 微生物菌种分离和鉴定技术

  微生物菌种分离和鉴定技术[详细]

  2014-02-14 00:00

  标准

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• 血细胞分离技术与大容量离心机的应用

  血细胞分离技术大容量离心机采血　　　　（一）材料与试剂1．抗凝剂　　　　（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而YZ纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。　　　　（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成4％的溶液备用。　　　　（3）阿氏液（Alsever液），配方如下:枸橼酸钠（Na3C6H5O75H2O）0.80g枸橼酸0.0325g葡萄糖2.05g氯化钠0.42gH2O加至100.00ml混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。　　　　2．针头根据不同动物和采血部位，采用不同型号的针头，用前必须灭菌或消毒。　　　　3．采血容器注射器或三角瓶等。　　　　4．采血动物。[详细]

  2018-10-02 10:03

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• 小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）说明书

  小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）说明书实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入PCNA，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的PCNA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠PCNA浓度。小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）说明书密封袋1个1个酶标包被板1×481×96标准品：270ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中抗增殖细胞核抗原（PCNA）含量。小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）说明书样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180ng/L，120ng/L，60ng/L，30ng/L，15ng/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。小鼠抗增殖细胞核抗原（PCNA）说明书[详细]

  2018-10-23 10:30

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