细胞如何做好转染实验及提高实验效率

本文由 上海研生实业有限公司 整理汇编

2024-10-03 20:15 1288阅读次数

收藏 评价 举报

• 分享

立即下载

参与评论

评论

登录后参与评论

登录或新用户注册

• 微信登录
• 密码登录
• 短信登录

请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号

微信扫码，手机电脑联动

注册登录即表示同意《仪器网服务条款》和《隐私协议》

账  号：

密  码：

图片码： 看不清？
换一张？

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

手机号：

图片码： 看不清？
换一张？

短信码： 获取短信码

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

更多资料

• 细胞如何做好转染实验及提高实验效率

  细胞如何做好转染实验及提高实验效率①从健康细胞开始Ⅰ转染实验前，细胞解冻后传代34次。这使得细胞从解冻过程中恢复过来，并恢复正常的生长速度。Ⅱ仅使用活性>90%的细胞使用台盼蓝染色可轻松测定细胞活性。Ⅲ定期传代细胞，切勿让细胞长到汇合状态或过度生长。如果让细胞长到汇合状态，可能会改变细胞的生长速度以及形态。a.请在汇合率达到90%之前对细胞进行传代。我们建议您使用胰酶替代物Cellstripper试剂(Corning25-056-CI)使细胞脱壁。Cellstripper试剂可于室温下存储在通风橱中。可通过添加过量的Cellstripper来跳过PBS洗涤的步骤，然后吸弃全部液体，仅留可覆盖瓶子表面的液体。b.传代条件取决于所用的细胞系。部分经验法则：对于快速生长的细胞，倍增时间为16小时(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。对于生长缓慢的细胞，倍增时间为36小时(如原代细胞)，按1：5的比例分瓶。Ⅳ保留冻存的细胞系，并定期解冻新细胞。传代次数高(>3040)时，细胞的生长速度和形态会改变。②进行实验之前，请先规划您的实验。务必要熟悉实验方案、确定所需的材料量，并在开始实验前确认所需的一切物品条件均已齐备。Ⅰ开始前，设计好铺板路线图，标注好每次处理或实验条件。Ⅱ计算所需脂质体和DNA的储备量，并确认有足够的下列材料：TransfectGRO减血清培养基(Corning40-300-CVR)，Lipofectamine2000或LipofectamineLTX试剂，以及DNA(0.51g/L)。③转染时，请使用优质DNA。Ⅰ使用无内毒素的试剂盒和实验方案制备DNA。Ⅱ通过测量OD260/280值来确定DNA纯度，测得的OD值应介于1.71.9]之间。数值过高或过低均说明有杂质，不宜用于转染实验。Ⅲ在无DNA/RNA酶的水或TE中稀释DNA。Ⅳ制备的工作浓度为0.51g/L。可用SpeedVac浓缩仪或透析过滤装置(例如，MilliporeAmicon超滤管)来浓缩DNA。④转染当天，将细胞铺板。Ⅰ如果在转染前一天或更早时间铺板，转染效率可能下降。Ⅱ转染时，细胞密度保持在汇合率为7090%。Ⅲ转染时，细胞密度影响转染效率。为了简化转染优化过程或节省时间，我们建议细胞铺成2种不同的密度，以确保较高的转染效率。Ⅳ细胞的铺板和转染可同时进行，或者通过反向转染操作进行。反向转染操作中，使用的细胞是正常/正向转染的2.5倍以上。Ⅴ转染复合物可以加到含抗生素和血清的培养基中，且不会影响转染效率。[详细]

  2024-10-03 20:15

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 提高果蝇实验的操作效率，徕卡显微为你搭把手

  提高果蝇实验的操作效率，徕卡显微为你搭把手[详细]

  2016-04-28 00:00

  标准

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 如何提高校准指针式压力表的效率

  如何提高校准指针式压力表的效率[详细]

  2024-07-30 10:19

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 球磨机研磨效率的对比实验

  球磨机研磨效率的对比实验[详细]

  2013-01-31 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 如何提高二流体喷雾干燥机的干燥效率？

  如何提高二流体喷雾干燥机的干燥效率？[详细]

  2016-06-14 00:00

  报价单

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 细胞成团和细胞出芽实验

  细胞成团和细胞出芽实验[详细]

  2016-05-12 00:00

  期刊论文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 规范试验操作 提高测试效率以VAC-V1为例谈如何提高透气性测试效率

  规范试验操作提高测试效率以VAC-V1为例谈如何提高透气性测试效率　　　　相对于软包材的其它性能测试而言，阻隔性测试时间往往较长，这点在检测高阻隔性材料时尤为突出。阻隔性检测效率低会减缓对试样进行全面分析的进度，进而会影响生产效率。因此必须尽可能减小由于人为操作失误而导致的试验失败，而这点我们可以通过规范试验操作来实现。　　本文将结合LabthinkVAC-V1的实际操作情况介绍一下如何提高真空压差法透气仪的检测效率。本文标题：规范试验操作提高测试效率以VAC-V1为例谈如何提高透气性测试效率文章地址：http://service.labthink.cn/cn/article-Permeation-info-11011848.html　版权所有Labthink兰光未经许可禁止转载转载请注明出处以上信息由济南兰光机电技术有限公司发布，如欲了解更详细信息，欢迎致电0531-85068566垂询！[详细]

  2018-09-10 11:11

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• Instec通过显微镜冷热台与温控相机联动提高实验效率的解

  Instec通过显微镜冷热台与温控相机联动提高实验效率的解[详细]

  2024-10-09 04:49

  操作手册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 使用微波提高加热效率

  使用微波提高加热效率[详细]

  2013-06-05 00:00

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 提高测量效率！STA7000系列

  u　过去，利用TG/DTA在高温下测量后，因为加热炉内温度回到室温需要时间，所以直到下一次测量需要一定的等待时间。u　STA7000系列通过标准内置的自动空冷装置，可自动控制对测量结束后加热炉的冷却。u　采用新型加热炉，和过去的产品相比冷却时间缩短了很多。[详细]

  2018-08-13 16:03

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 伤口愈合／细胞划痕实验新方法－如何划出笔直均一的划痕

  伤口愈合／细胞划痕实验新方法－如何划出笔直均一的划痕[详细]

  2016-04-26 00:00

  应用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 如何清洁与保养实验搅拌机

   一、 哈赛验搅拌机/HMV1100的清洁  1 ) 每当使用完毕后要进行清洁搅拌机内部，要用沾水的湿毛巾进行搅拌钩，分割架和搅拌缸，缸内不能有积水。  2 ) 每周需要对机器整体进行清洁，注意不可用水直接冲洗设备，防止水进入电器或传动部分的轴承内而导致设备损坏。  二、 哈赛验搅拌机/HMV1100的定期保养维护  1 ) 每月或每季度需要用黄油枪将轴承座上的所有黄油孔加油一次。  2 ) 链条，齿轮部分加润滑油。  3 ) 检查皮带或链条的松紧度，防止打滑造成皮带或链条损坏。[详细]

  2024-09-28 17:37

  标准

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 纸箱抗压机解决方案及实验步骤

  纸箱抗压机解决方案及实验步骤[详细]

  2016-05-07 00:00

  报价单

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 纸箱抗压机解决方案及实验步骤

  纸箱抗压机解决方案及实验步骤[详细]

  2016-04-23 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 原子吸收实验技术及应用

  原子吸收实验技术及应用[详细]

  2006-03-30 00:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 如何提高压力表检定效率——巧用E-DWT，解决压力“不稳”问题

  如何提高压力表检定效率——巧用E-DWT，解决压力“不稳”问题[详细]

  2024-09-14 03:21

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？

  做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。[详细]

  2019-10-15 11:10

  实验操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 促进生产效率与提高分析速度

  促进生产效率与提高分析速度[详细]

  2024-10-04 04:08

  课件

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 肿瘤细胞侵袭实验原理 材料 步骤

  一原理Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。铺有Martrigel的滤膜放在以BDFalcon细胞小室上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，如一定浓度的LN、FN或小鼠3T3条件培养液或人睾丸上皮成纤维细胞培养液，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。细胞穿膜所用的时间与Martrigel的用量有关，选择25ugMartrigell铺膜，16小时后观察结果较为合适。穿过滤膜的细胞多数粘附在滤膜下表面，可用棉签将上表面的细胞拭去，然后用乙醇固定滤膜，PE染色，在光镜下观察统计穿过Martrigel的细胞数。另外用BDFalcon细胞小室也可进行重建基质膜侵袭分析，这一方法是在BDFalcon细胞小室吊篮式上腔的滤膜上铺上30ugMartrigel，加入细胞72h后观察结果。值得注意的是，细胞在BDFalcon细胞小室中培养72小时后，有相当数量穿过滤膜的细胞不再粘附在滤膜下表面，而是脱落进人下腔溶液中．因此统计穿过基质膜的细胞数目时应把这部分细胞考虑在内。肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。在上述分析中，如果不在膜上铺Martrigel而直接将8um孔径滤膜安放在侵袭腔室上下腔室之间，细胞通过变形运动穿过滤膜，用这种模型对分析细胞运动能力和药物对细胞运动能力的影响。另外，在下室中加有LN或FN或在滤膜下表面铺上LN或FN，可分析药物对肿瘤细胞的趋化性或趋固性的影响。二材料1.Matrigel基质胶（BDBIOCOAT#356234），5ml，分装成0.5ml/只10个EP管中；用时加入0.5ml的DMEM；Matrivgel在冰上维持液态，室温时可迅速凝结成胶。使用前应从-20℃转移至4℃待其自然溶化（如过夜放置），避免反复冻融。使用时需接触Matrivgel的试管、移液吸头等均应预冷于4℃；注意无菌操作；2.8ul，24孔配套细胞小室（BDFaclon#353097）；3.结晶紫染料溶液：结晶紫用甲醇配成0.5%的母液，使用浓度为0.1％，用PBS按1：4稀释后即为染色液；4.33%醋酸；1.溶液配制：（1）.溶DMEM500ml；NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）母液0.1ml（5mg）+ddH2Oupto5ml；过滤消毒，-20℃保存。NE-DMEM（-6M）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（2）.NE+CGRP-DMEM（-6M，100ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlCGRP-储存液50μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（3）.NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlIFN-γ（25ng/μl）25μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（4）.低血清DMEM培养基（上室）（5）.20%FBS-DMEM培养基（下室）2.准备（1）.溶胶，4℃过夜（ThawMatrigelat4℃overnight.）（2）.室温下基质胶易成凝胶，所以，步骤2和3种使用试管和枪头要在试验前-20C预冷。（Matrigeltendstoformgelveryquicklyatroomtemerature,therefore,pipetsandtipsusinginsteps2and3havetobechilledatpriortoexperiements.）3.包被基底膜（冰上操作）（1）.用无血清的冷细胞培养基DMEM稀释Matrigel胶（10mg/mlto5mg/ml））（DiluteMatrigel（10mg/mlto5mg/ml）inserumfree-coldcellculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEM,etc）.）（2）.取100ul稀释胶加到24-well细胞小室的上室中（Put100ulofthedilutedmatrigelintoupperchamberof24-welltranswell）（3）.37℃孵育transwell至少4-5h（Incubatethetranswellat37Catleast4to5hforgel领.）4.水化基底膜用无血清培养基轻洗凝胶（Gentlywashgelledmatrigelwithwarmedserumfree-culturemedia.）5.准备细胞悬液和小室（1）.消化法从细胞培养瓶中获取细胞；（HarvestcellsfromtissuecultureflasksbyTrypsin/EDTA；）（2）.用培养基洗3遍（Washthecells3timeswithculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEMetc）containing1%FBS.）（3）.重选细胞，5×105cells/ml，1%FBS（Resuspendthecellsinmediacontaining1%FBSatadensityof5×105cells/ml.）（4）.上室加200ul细胞悬液（Put200ulofthecellsuspensionontothematrigel.）（5）.下室中加入600ul细胞培养基，含有5ug/mlfibronectin作为黏连亚族（lowerchamberofthetranswellisfilledwith600ulofculturemediacontaining,asanadhesivesubtrate.）6.孵育，37℃，20to24h（Incubateat37Cfor20to24h.7.染色和计数（1）.棉签擦去上室上面的非侵袭细胞（Scrapeoffnoninvadedcellsonthetopofthetranswellwithacottonswab）（2）.移去transwells，倒置，风干（Removetranswellsfrom24-wellplatesandstainedwithDiff-Quicksolution.）（3）.24孔板中加入500l含0.1%结晶紫，将小室置于其中，使膜浸没在培养基中，37℃30min后取出，PBS清洗。（4）.直径上取4个视野，照相，计数。（5）.24孔板中加入500l33%醋酸，将小室置于其中，浸膜，振荡10min，充分溶解。取出小室，24孔板于酶标仪上570nm测OD值，间接反应细胞数。小技巧：照相前一定要晾干，照相时将小室正置于载玻片上，在倒置显微镜下观察、照相。经济、实用、方便。[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 细胞琼脂克隆斑形成实验方法

  细胞琼脂克隆斑形成实验方法1.取MDA-435-OL-Sec23a-GFP和MDA-435-OLLV3NC-GFP对数生长期的细胞制成单细胞悬液,使用血细胞计数板计数后备用。2.使用梯度稀释法适当稀释细胞悬液后,向6孔板的每个孔内分别加入含50个细胞的2mL细胞悬液,细胞悬液使用含10%FBS的DMEM培养液配制。每种细胞均设置3个6孔板复孔。3.12h后镜下可观察到6孔板内细胞已经全部贴壁,此时将皿中培养液换成琼脂浓度为0.2%的含10%FBS的DMEM培养液,置于37°C培养箱内培养。4.10d后镜下可观察到6孔板内出现集落生长的细胞克隆斑。此时弃去含琼脂的培养液,用PBS轻轻润洗2次,然后6孔板内每孔加入2mL冰甲醇固定30min,固定结束后使用PBS轻轻润洗2次,然后使用结晶紫染色5min,再用PBS轻轻润洗后室温干燥。5.干燥完成后将6孔板移至显微镜下观察计数每个孔内细胞克隆斑数量,超过50个细胞的克隆斑即可计数。根据细胞克隆斑形成率=(克隆数/接种细胞数)×1**%来计算细胞体外克隆率。[详细]

  2024-10-03 20:15

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  •