污染是细胞培养的大敌常见的污染类型

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  污染是细胞培养的大敌常见的污染类型细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。1、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了KJ素，也可能因为操作不慎而引起污染。Z常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，Z后变圆脱落死亡。2、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的Z小微生物，Z小直径0.2μm，一般过滤CJ无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。3、病毒污染组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。4、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中Z常见的一种，Z常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。真菌污染后，细胞生长变慢，但Z后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。5、非同种细胞污染由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。[详细]

  2024-10-03 20:15

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• 细胞培养的污染类型

  细胞培养的污染类型[详细]

  2024-09-22 21:11

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• 细胞培养减少污染的方法

  细胞培养减少污染的方法●很多实验者都不bother自己洗手，酒精一喷就去实验了，这极端错误。个人经验：你仔细洗手比喷酒精效果还好。**的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精。●有人穿半截袖白大褂去做实验，白大褂袖口要长，**是袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。●拿培养瓶和培养液时候请托下面拿，切忌不要拿瓶颈部位。●每天实验开始时候，超净台/实验间照20分钟紫外是不错的选择。●有一点要注意的是，超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染。●尽量避免操作时候说话，尤其是严禁细胞房打闹说笑。●每天观察细胞状态，不要总想着save，而是发现细胞不对劲（比如生长缓慢）就立即扔掉。有些（比如支原体）污染，镜检是看不到的，但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常，那么请扔掉，同时由于支原体空气传播，请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 如何解决细胞培养中的污染问题

  如何解决细胞培养中的污染问题[详细]

  2013-10-31 00:00

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• Whitepaper_如何避免细胞培养过程中的污染

  Whitepaper_如何避免细胞培养过程中的污染[详细]

  2024-09-28 21:39

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• 细胞培养常见的问题和解决方法

  细胞培养常见问题及回答如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养**AIMV（12005）培养基（SFM）。L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有Z终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。如何消除组织培养的污染？当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。3.每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4.确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。6.重复步骤4。7.在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。目录上说，Hank's平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's平衡盐溶液（HBS）和Earle's平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。二价离子YZ胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？二价离子的确YZ胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。我SYSF900II时，细胞生长良好，但是我的蛋白产物不如使用Graces液和10%胎牛血清时效果好。如果目的蛋白是一个后期蛋白，它将与蛋白酶一起表达，这些蛋白酶将会作用于目的蛋白。在加有血清的培养基中，这些蛋白酶将作用到血清中的蛋白，从而使目的蛋白产品保持完好。在无血清配方中，蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。为了避免这一问题，加入一些蛋白酶YZ剂或加入少量的血清（少于1％），让血清给蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下PH值会改变吗？对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况：例如20℃下配制PH7.4Tris缓冲液,40℃时PH值为7.4-（2x0.310）＝6.78缓冲系统pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室温下（25）配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用时PH值是多少？缓冲液的PH值随温度变化而变化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃时，不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆虫细胞培养的Z适PH值和渗透压是多少？生长培养基的PH值对细胞的增殖和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系，在PH值6.0～6.4范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时，培养基的Z适渗透压是345-380mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式，减少技术问题，保持PH值和渗透压在以上所列的范围之内。HighFive细胞有任何其它名称吗？HighFive细胞也被称为Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别PFHM-II（Protein-freeHybridomaMedium）是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是杂交瘤生产培养基，也是单克隆抗体生产培养基。它包含低水平的蛋白质。在HighFive无血清培养基中去污剂的浓度是多少？HighFive无血清培养基中去污剂的浓度：0.025g/LTween-80，1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive细胞用多大的密度冻存？3.0x10E6cells/ml。在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害吗？可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？我们QL推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性Z小，生活力Z高。正如手册上所显示，通过使用巴斯德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞：1.去除培养基。2.用2ml1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。4.37℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。5.向细胞中加入2ml细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）6.离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。7.用新的培养基重新悬浮细胞。传代。在Sf9,Sf21,和highFive细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候计数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。Techtips●贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。●如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。●您要查找培养基成分表吗？您可以在GIBCO目录**章的后面或在我们网站的技术资源部分找到。●当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。●一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。●总之，大部分添加物和试剂Z多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。●在进行传代培养时，我们强烈推荐进行台盼兰活性记数。研究者常常通过一个简单的稀释（1∶4或1∶2）进行传代，不进行活性检测，您可能接种比你认为的低的多的浓度的细胞，这常常可能导致生长缓慢或培养物根本不生长。●在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。●GIBCO产品的贮存期立足于实时稳定性研究结果。产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内，产品仍然在可接受的范围内，但是由于在超过指定的效期后，产品的性能和稳定性没有检测，我们不推荐使用过了效期的产品。[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 食品中常见重金属污染的现状与防控措施

  食品中常见重金属污染的现状与防控措施[详细]

  2014-12-15 00:00

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• 浅谈食品中常见的重金属污染途径及检测方法

  浅谈食品中常见的重金属污染途径及检测方法[详细]

  2024-09-21 08:42

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• 阳离子交换树脂铁污染的处理

  阳离子交换树脂铁污染的处理[详细]

  2013-12-21 00:00

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• 自来水中的污染物质

  自来水中的污染物质[详细]

  2013-07-03 00:00

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• 重金属的污染与FZ

  重金属制品在我们生活中随处可见，且与我们的生活息息相关，然而不合理的处理方式，导致的环境污染也成为诟病。本文首先介绍了重金属的定义，以及它们在元素周期表中的分布，接着介绍了它们的毒性和危害，随后介绍了重金属的防护与治理，Z后展望了未来重金属的可持续发展。[详细]

  2018-08-23 11:40

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• 实验室的污染与FZ

  实验室的污染与FZ[详细]

  2024-09-18 02:54

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• CO2培养箱的污染控制

  CO2培养箱的污染控制[详细]

  2024-09-16 02:50

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• 有机物对阳离子交换树脂的污染

  有机物对阳离子交换树脂的污染[详细]

  2024-09-27 23:18

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• 用WCP微粒污染平台检测输液器的微粒污染情况

  用WCP微粒污染平台检测输液器的微粒污染情况[详细]

  2024-09-18 02:39

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  油液污染度检测仪 污染度监测仪[详细]

  2015-03-21 00:00

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• 电磁阀的常见类型与安装注意事项

  电磁阀的常见类型与安装注意事项1、安装时应注意阀体上箭头应与介质流向一致。不可装在有直接滴水或溅水的地方。电磁阀应垂直向上安装；2、电磁阀应保证在电源电压为额定电压的15%-10%波动范围内正常工作；3、电磁阀安装后，管道中不得有反向压差。并需通电数次，使之适温后方可正式投入使用；4、电磁阀安装前应彻底清洗管道。通入的介质应无杂质。阀前装过滤器；5、当电磁阀发生故障或清洗时，为保证系统继续运行，应安装旁路装置。常见类型1、2位2通通用型阀2、热水/蒸汽阀3、2位3通阀4、2位4通阀5、2位5通阀6、本安型防爆电磁阀7、低功耗电磁阀8、手动复位电磁阀9、精密微型阀10、阀位指示器电磁阀的常见类型与安装注意事项[详细]

  2018-10-14 10:00

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• 防止洁净室交叉污染的重要措施

  防止洁净室交叉污染的重要措施[详细]

  2013-12-21 00:00

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• 说说食品中重金属的污染.

  说说食品中重金属的污染.[详细]

  2024-09-28 09:49

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• PCR反应污染的处理方法

  PCR反应污染的处理方法[详细]

  2024-09-16 02:11

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