培养细胞增殖过程注意事项

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2024-10-03 20:19 1338阅读次数

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• 培养细胞增殖过程注意事项

  培养细胞增殖过程注意事项体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。每次传代以后，细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。另外，很多细胞特别是正常细胞，在体外的生存也不是无限的，存在着一个发展过程。所有这一切，使组织细胞在培养中有着一系列与体内不同的生存特点。根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。一、原代培养（一）过程原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。原代培养的方法很多，基本和Z常用的是组织块培养法和分离细胞法。1、组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1h到3h后翻瓶，使贴壁的组织块浸没与培养液中，静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。2、注意事项1）、组织块接种后的前3天，从组织块向外迁徙的细胞数很少，组织块的黏附不牢固，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。2）、加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。3）、用组织块培养时，要及时观察，当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已经死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除。[详细]

  2024-10-03 20:19

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• 恒温培养振荡器使用注意事项

  恒温培养振荡器使用注意事项使用本公司恒温摇床前必须充分阅读理解本产品使用说明书，使用不正确会导致仪器的损坏或仪器运转的不正常。1.仪器应放在坚硬牢固的平面上，并确保其水平状态。2.仪器离墙离物必须保持约10CM的距离。3.切勿把仪器放在炉子边上或阳光直射处。4.不要重力开启、闭合仪器箱门。5.开启仪器箱门前应确认托盘已处于静止状态。6.仪器连续制冷时须10天做一次加热驱潮处理。7.应经常检查烧瓶夹固定螺丝。8.仪器箱门不宜随意频繁打开。9.仪器表面不可与汽油、香蕉水等挥发性化学品接触。10.保持箱内外洁净，经常清理杂物、污迹。上海凯朗仪器设备厂专业生产鼓风干燥箱、真空干燥箱、马弗炉、生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热恒温培养箱、试验箱、恒温摇床、水槽、水浴锅等实验室设备。[详细]

  2018-10-01 10:00

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• 生物指示剂培养器使用注意事项！

  生物指示剂培养器使用注意事项 1.生物指示剂培养器应遵循用电安全要求，箱外壳必须有效接地，以保证使用安全。使用完毕请断开电源。 2.生物指示剂培养器严禁直接接触加热部分避免烫伤。 3.生物指示剂培养器注意不要在高温、高湿、易燃、易爆和强磁场环境中存放、使用。也不能对不安全的物品加热。 4.清洁生物指示剂培养器只能使用湿布及少量洗涤剂，切忌用化学溶剂擦拭。 5.如发现生物指示剂培养器有任何异常，应立即停止使用并送修。 6.请勿拆开生物指示剂培养器或改变内部接线，以免损坏和危及安全，同时，将导致违反保修条款。 7.生物指示剂培养器在需要维修时，请联系供应商或厂家，以保证生物指示剂培养器得到妥善处理。[详细]

  2024-09-11 18:00

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• 恒温培养遥床操作注意事项

  恒温培养遥床操作注意事项[详细]

  2013-07-01 00:00

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• T细胞增殖实验操作流程

  T细胞增殖实验操作流程[详细]

  2018-10-20 10:00

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• 实时监测细胞增殖和细胞周期

  生物研究和药物发现越来越需要扩大基于细胞的检测方法的多样性和复杂性。活细胞检测可以实时监测细胞反应，并提供关于化合物治LX果和生物复杂性的重要见解。[详细]

  2021-02-20 09:53

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• 实时监测细胞增殖和细胞周期

  实时监测细胞增殖和细胞周期[详细]

  2024-09-11 17:49

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• CCK-8|细胞增殖、细胞毒性试剂盒|参数说明

  CCK-8|细胞增殖、细胞毒性试剂盒相关资料产品简介：CellCountingKit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Do极ndo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在美国，欧洲等国家地区均持有ZL，同仁化学研究所于2006年在ZG获得了WST-8的注册商标。CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：★灵敏度高，数据可靠，重现性好★操作简便，省时省力★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用★适合于高通量药物筛选CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK-8试剂盒在国内知名科研院所、ZD大学、三甲医院被广泛应用，国际认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，Z高IF26.5分[HeterozygositywithrespecttoZfp148causescompletelossoffetalgermcellsduringmouseembryogenesis,NatureGenetics33,172-176（01Feb2003）]CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较CCK-8试剂盒特价促销CCK-8试剂盒特价促销专业生化试剂生产商|专业分子试剂供应商特价850【021-54100800】产品明细：CCK-8试剂盒利用了同仁化学研究所（Do极ndo）开发的四唑盐WST-8（2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），它在电子载体1-MethoxyPMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲染料。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中；不需要预配各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲量与活细胞数量成正比。WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT,XTT,MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定，并且对细胞没有毒性，因此可以长时间孵育。CCK-8检测步骤1.向各孔中加入100μl细胞悬液。a）2.在37℃下预孵育培养板。b）3.向各孔中加入各浓度的待测溶液c）10μl。4.37℃下孵育。5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d）。6.37℃下孵育1-4小时。e）7.测定450nm处的OD值。a）使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。b）建议使用CO2培养箱预培养。c）使用培养基或PBS来制备溶液。d）如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100μl培养基和10μlCCK-8进行检测。e）白细胞可能需要培养较长时间。CCK-8试剂盒特价促销CCK-8试剂盒特价促销专业生化试剂生产商专业分子试剂供应商特价【021-54100800】优质试剂！质量放心！价格Zdi!为ZG生物产业做贡献欢迎新老客户咨询[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 巨噬细胞培养

  巨噬细胞培养[详细]

  2024-09-17 05:25

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• 摇瓶机在菌种培养中的使用方法及注意事项

  摇瓶机在菌种培养中的使用方法及注意事项[详细]

  2024-09-16 18:45

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• 斯科特法松装密度仪的使用过程及应注意事项

  斯科特法松装密度仪的使用过程及应注意事项斯柯特容量计法松装密度计是依据国家GB5060-85《金属粉末松装密度的测法第二部分：斯柯特容量计法》设计、制造；同时符合采用国际标准ISO3932/2《金属粉末松装密度的测定第2部分：斯柯特容量计法》。该测试装置适用于不能自由流过漏斗法中孔径为5mm的漏斗和用振动漏斗法易改变特性粉末。如何正确的使用仪器从某种程度上来说胜过对仪器的维修保养。因此在使用斯科特法松装密度仪时应注意如下几点：操作过程中应严格按照流程操作：1用勺细心地将粉末放在上部组合漏斗的筛网上，经过布料箱、方形漏斗，流入圆柱杯中，直到装满，并有粉末溢出为止。2如果粉末不能自由地通过筛网，可用软毛刷刷一刷，使粉末通过筛网。如果无效，则该种金属粉末就不适用于斯柯特容量计法测定松装密度。3圆柱杯有粉末溢出后，用不锈钢板刮平。但不要使杯内的粉末压缩或带出，更不要使杯子摇晃或振动。4刮平后，轻轻敲打杯子，使粉末下沉，避免在挪动过程中粉末散失，在杯子的外表面上也不能沾有粉末。5称量圆柱杯内的金属粉末，极ng确到0.05g。试验结果的计算：金属粉末质量与体积之比为松装密度，计算公式如下：式中：ρas：斯柯特容量计法测得的粉末松装密度，g/cm3,m：金属粉末质量，g；V：松装粉末的体积，cm3。取三次测定结果的算术平均值报出Z终结果，极ng确到0.01g/cm3。当三次测量结果之间的差值超过平均值的1％时，其Zda值和Z小值也要随结果报出。填写试验报告：如果您购买了粉体密度测试仪，请将振动次数设定为0；体积输入为25；重量以您实际的称重输入，按“计算”键后即可显示测试结果，按“打印”键可通过微型打印机打印测试结果。如无上述设备，请手工记录如下内容：a.鉴别试样的必要说明（样品名称）；b.如果粉末经过烘干或其他处理，应说明处理过程；c.测试结果；d.测试人员；e.其它需要说明的信息。[详细]

  2018-10-07 10:02

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• 恒温培养振荡器

  恒温培养振荡器[详细]

  2013-01-22 00:00

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• 旋转培养装置

  旋转培养装置[详细]

  2015-01-07 00:00

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• 干细胞培养新方法

  现有人类胚胎干细胞的培养和诱导分化，都离不开动物源培养基，比如从实验鼠身上分离出来的结缔组织细胞和牛胚胎血清等。选择Zyou化的细胞培养基对于ES的研究及临床应用是至关重要的。胚胎干细胞（ES）是一种永生化细胞因子,在适宜培养条件下具有的自我更新能力并维持未分化状态、高端粒酶活性、正常核型、胚胎表面标志及多潜能转录因子的表达,如SSEA、OCT-4、Nanog等。ES被认为可以提供一种理想的生物学平台,用于多方面的科学研究与临床应用,如药物筛选平台的建立、细胞发育与分化的分子调节机制研究、基因靶向敲除动物模型的构建、组织工程种子细胞及基因ZL载体的建立、细胞ZL及再生医学等。以往研究表明，基质表面的化学和物理特性，比如粗糙度、硬度、对水的亲和力等对干细胞生长有影响。研究人员创造了500种特性不同的聚合物并在上面培养干细胞，分析每个聚合物上面细胞的生长状况。他们发现，基质表面疏水性对细胞生长有个**范围，而表面糙度和硬度则没有太多影响。此外，他们调整**聚合物的组成为：高比例的丙烯酸酯，外面包裹玻连蛋白。多能干细胞培养目前存在一些问题，比如如何培养足够量的多功能干细胞，如何能避免培养人类干细胞的材料发生免疫反应。在培养人类干细胞的材料方面，近期来自麻省理工的研究人员发明了一种合成性基质，这种基质没有外来动物材料，能够使干细胞至少三个月保持活性并自我繁殖。而且，该合成性基质S次使得单细胞能够形成细胞集落。这一成果公布在NatureMaterials杂志上。应用这种新的培养基质，研究人员成功实现了人类胚胎干细胞持续三个月的生长和分裂，并获得了大量的细胞。他们将进一步研究，争取将这种培养基质应用到其它类细胞另外针对如何能够培养足够量的多功能干细胞呢？来自俄亥俄州立大学研究人员研制出一种大批量生产胚胎干细胞（mass-producingembryonicstemcells）的新方法。用传统的实验室方法生产干细胞不仅价格高，Z主要的是不能满足日益增长的对人类胚胎干细胞的需要。研究人员在一种生物反应器（bioreactor）中培养小鼠胚胎干细胞。细胞数量在15天内扩增了193倍，实验尾期的细胞密度反应器中的细胞数是用实验室传统方法得到的10-100倍，也就意味着多出数亿的干细胞。并且检测结果显示，bioreactor中的干细胞未分化程度更高，寿命更长。这种类型的大批量生产因为需要更少的设备和管理，因此干细胞生产成本降低了80%。实验过程中，研究人员分别在flask中（传统细胞培养方法）和bioreactor中的标准高聚物螺纹上培养小鼠干细胞。用flask和用bioreactor培养干细胞的不同之处在于：细胞在bioreactor中能够向三维空间生长，而在flask的底部平面上只能向二维平面上生长。bioreactor培养的细胞相对于flask培养的细胞寿命长，因为细胞有更多的空间。研究人员使用的bioreactor实际上是一种组织生长设备（tissue-growingdevice），能够用于培养成人干细胞，并且能够使研究人员对培养过程中的每个胚胎干细胞进行紧密跟踪。新型bioreactor有两个格室（chamber），一个格室内包含可以支持干细胞生长的高聚物螺纹，一个格室内含有液态培养基。这种液态培养基能够向干细胞传递炎症因子，维持干细胞未分化状态。研究人员以两种蛋白为指标检测flask和bioreactor得到的细胞（蛋白的出现标志干细胞还没有分化）。检测结果显示，用bioreactor培养的细胞94%呈阳性，用flask培养的细胞85%呈阳性。除此之外，以色列耶路撒冷哈达萨大学的研究人员开发出一种新的干细胞培养基，能让干细胞在更长时间内不分化。这项研究成果发表在《NatureBiotechnology》上。为了保持hESC存活且具有多能性，研究人员通常在滋养层细胞（也就是一层小鼠胚胎成纤维细胞）上培养，或者在微载体上成簇培养。但是在这些基质上培养干细胞是相当昂贵的，而且培养物不能在很长时间内保持未分化状态，尽管所有必需的生长因子都存在。为了验证他们的理论，研究小组定制了培养基。他们在Neurobasal培养基中加入了血清替代物，还加入了干细胞生长所需的蛋白，包括细胞外基质组分、神经营养因子、成纤维细胞生长因子2和活化素A。研究人员在常规的无血清培养基和定制培养基中培养了hESC。三个星期之后，定制培养基中存在更多的未分化hESC细胞。研究人员分析hESC簇分化成神经细胞，他们一直在使用Invitrogen的Neurobasal培养基。这种培养基能够在无滋养层的条件下长时间维持神经细胞的生长和正常表型。在研究过程中，研究人员注意到并非所有细胞都分化了。他们怀疑是培养基的选择导致了这种现象，于是他们开始集中精力研究培养基如何促进干细胞生长并YZ分化。使用这种新的培养基，研究小组检验了三种不同的hESC系。他们利用荧光激活细胞分选（FACS）在7周和20周后分析了培养物，发现90%的细胞仍维持多能性。这项突破为在计算机化的自动系统中大规模扩增胚胎干细胞创造了可能性。此外，通过改变培养条件，还可能进一步指导干细胞长成特定的细胞类型，用于研究或病人的移植。[详细]

  2018-10-03 10:00

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• 浮游植物培养器/浮游动物培养器 欧洲 PLR/PR

  原装进口，火售中！浮游植物培养器欧洲型号：PLR货号：ZH7344产品简介:培养器用于在实验室内培育藻类等浮游植物。当光照、CO2和营养等条件持续充沛，培养器内的微藻生长迅速，24小时内总量可扩增四倍。淡水和海水类浮游植物都可以在PLR培养器中进行培养。PR培养器可进行海水或淡水类浮游动物的培养。在**条件的藻类养料供应下，轮虫（Brachionus）等浮游动物的生物量在4天中可增长一倍。PLR和PR配置相同，**区别在于PLR培养器拥有照明系统。培养器使用时需固定在墙上。技术参数容积：2.5L内径：80mm长度：80cm管接口：6mm照明单元：18W荧光灯（PLR浮游植物培养器配备）主要配置：培养器，墙托，气泵接口，固定夹，充气泵，照明系统（PLR培养器专属）浮游动物培养器欧洲型号：PR货号：ZH7345产品简介:培养器用于在实验室内培育藻类等浮游植物。当光照、CO2和营养等条件持续充沛，培养器内的微藻生长迅速，24小时内总量可扩增四倍。淡水和海水类浮游植物都可以在PLR培养器中进行培养。PR培养器可进行海水或淡水类浮游动物的培养。在**条件的藻类养料供应下，轮虫（Brachionus）等浮游动物的生物量在4天中可增长一倍。PLR和PR配置相同，**区别在于PLR培养器拥有照明系统。培养器使用时需固定在墙上。技术参数容积：2.5L内径：80mm长度：80cm管接口：6mm照明单元：18W荧光灯（PLR浮游植物培养器配备）主要配置：培养器，墙托，气泵接口，固定夹，充气泵，照明系统（PLR培养器专属）浮游植物/藻类培养器欧洲型号：PB250货号：ZH2997产品简介:培养器用于专业培养浮游植物（藻类）。培养罐内置照明系统，螺纹式顶盖可轻松开合，整体结实耐用。正常条件下，每天可替换30%体积的培养液。技术参数容积：18L内径：270mm高度：520mm主要配置：透明培养罐，磁铁搅动器，照明单元，充气泵，培养控制器卤虫卵培育器_卤虫孵化培养器欧洲型号：AB1000货号：ZH10320产品简介:卤虫卵的孵化培养装置，单次孵化Z多可获得2,000,000只卤虫。本产品也可用于培养卤虫幼虫，大约两周时间便可长大为成虫。卤虫是一种广泛分布且耐高盐的小型甲壳类动物，其卵和幼体富含营养，是水产养殖鱼、虾、贝类幼体的优质饵料，当前世界上85%以上的水产养殖动物的育苗均以卤虫作为饵料来源。卤虫作为饵料生物具有重要的研究价值。技术参数：容积：1L内径：80mm长度：45cm管接口：6mm[详细]

  2018-09-26 10:00

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• 碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞增殖和分化的作用

  碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞增殖和分化的作用[详细]

  2024-09-28 12:58

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• PLR|PR型浮游生物培养器|浮游植物培养器|浮游动物培养器|藻类培养器

  浮游生物培养器产品简介：PLR浮游植物培养器浮游植物培养器连接灯光组合是一个简单的系统，培植食物链中的生产者浮游植物，在有光、肥料和二氧化碳的作用下，微藻在孵化器中繁殖生长。这些藻类可直接用来饲喂很多种掠食性的无脊椎动物，尤其是浮游动物。在孵化器中，微藻生长速率是非常快的，如果持续提供阳光、二氧化碳及营养，微藻的生物总量在24小时内可提高4倍。海水和淡水中的浮游植物都可以培养。PR浮游植物培养器PR培养器可进行海水或淡水类浮游动物的培养。在**条件的藻类养料供应下，轮虫（Brachionus）等浮游动物的生物量在4天中可增长一倍。浮游动物培养器可用来培养很多种海水或淡水浮游动物，而浮游动物的饵料是来自PLR浮游植物孵化器连灯光组合培养的微藻。浮游动物的生长潜力很大，饲喂**的藻类营养，轮虫的数量在四天之内就可以增加一倍，轮虫是许多海水幼鱼、无脊椎动物及珊瑚生长发育的理想饵料。注：PLR和PR配置相同，**区别在于PLR培养器拥有照明系统。【培养器使用时需固定在墙上】浮游生物培养器规格指标：容积：2.5L内径：80mm长度：80cm管接口：6mm照明单元：18W荧光灯【PLR浮游植物培养器配备】浮游生物培养器标准配置：培养器，墙托，气泵接口，固定夹，充气泵，照明系统，特殊反光板【PLR培养器专用】[详细]

  2018-10-17 10:00

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• ＣＯ2培养箱pc12培养经验

  ＣＯ2培养箱pc12培养经验[详细]

  2009-03-27 00:00

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• MiniT-3生物指示剂培养器

  MiniT-3生物指示剂培养器[详细]

  2012-05-25 00:00

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• 厌氧菌的培养方法

  厌氧菌的培养方法[详细]

  2011-05-23 00:00

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