鸡肿瘤坏死因子α试剂盒说明书（TNF-a）说明书下载

本文由 上海恒远ELISA试剂盒供应商 整理汇编

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• 鸡肿瘤坏死因子α试剂盒说明书（TNF-a）说明书下载

  鸡肿瘤坏死因子α（TNF-a）ELISA试剂盒试剂仅供研究使用试验原理：TNF-A试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-A浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-A和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-A的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品:400pg/ml1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗TNF-A抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备材料：1.蒸馏水。2.加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振荡器及磁力搅拌器等。样品收集、处理及保存方法：1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清2、和红细胞迅速小心地分离。2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。鸡肿瘤坏死因子α试剂盒操作注意事项：●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。●使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。●使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。●底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。●加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。●按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。安全性：1.避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2.实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。试剂的准备：1.标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：400pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul200pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液25pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液12.5pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原倍浓度不用稀释直接加入50ul2.洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。试剂盒性能：1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。ELISA试剂盒操作步骤：1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断与分析：1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TNF-A标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的TNF-A含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。3、检测值范围：0-400pg/ml4、敏感度：1.0pg/ml[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 鸡TNF-a试剂盒，肿瘤坏死因子α(TNF-a)ELISA检测试剂盒

  本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的[详细]

  2024-11-25 13:27

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• 兔（Rabbit）肿瘤坏死因子a（TNF-a）ELISA试剂盒说明书

  兔（Rabbit）肿瘤坏死因子a（TNF-a）ELISA试剂盒说明书用途：兔TNF-αELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的TNF-α。本试剂盒可以检测天然和重组的TNF-α。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。试验原理：兔TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：400pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TNF-α抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（60ml）1瓶（30ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500u、1000lul。3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：400pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。200pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液100pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液50pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液25pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液12.5pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。2．洗涤缓冲液（20×）的稀释：蒸馏水20倍稀释。操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（pg/ml）A400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E2525样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F12.512.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品结果分析以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TNF-α标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的TNF-α含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。局限兔（Rabbit）肿瘤坏死因子a（TNF-a）ELISA试剂盒说明书6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能兔（Rabbit）肿瘤坏死因子a（TNF-a）ELISA试剂盒说明书1．灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2．特异性：不与人其它细胞因子反应。3．重复性：板内、板间变异系数均小于10%。兔（Rabbit）肿瘤坏死因子a（TNF-a）ELISA试剂盒说明书[详细]

  2024-09-29 02:40

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• 鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒说明书

  鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用纯化的鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（128ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。64ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液32ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液16ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液8ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液4ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2019-01-02 10:00

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• 豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒使用说明书下载

  TNF-Α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-Α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-Α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-Α的浓度呈比例关系。1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。ELISA试剂盒操作注意事项：1，试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2，实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3，不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4，使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5，使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6，底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8，加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9，按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒操作步骤：1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。[详细]

  2018-09-19 10:00

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• 鸡肿瘤坏死因子α试剂盒方法

  鸡肿瘤坏死因子α试剂盒实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。鸡肿瘤坏死因子α试剂盒组成120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶2酶标试剂3ml×1瓶8标准品（128ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。鸡肿瘤坏死因子α试剂盒操作步骤：1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。64ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液32ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液16ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液8ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液4ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。鸡肿瘤坏死因子α试剂盒注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-11-15 10:03

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• 人（human）肿瘤坏死因子a（TNF-a） 使用方法

  本试剂盒仅供研究使用标本：血清或者血浆试剂组成精密度微孔板96孔（MicrotitrationStrips）1块2～8℃干燥保存酶标偶合液（Conjugate）1瓶12.0毫升2～8℃冷藏保存标准品（Standard）5瓶各1.0毫升2～8℃冷藏保存呈色剂A（SubstrateA）1瓶6.0毫升2～8℃避光冷藏保存呈色剂B（SubstrateB）1瓶6.0毫升2～8℃避光冷藏保存终止液（StoppingSolution）1瓶6.0毫升室温保存20倍浓缩洗涤液（RinsingBufferx20）1瓶60.0毫升2～8℃冷藏保存5倍浓缩样品稀释液（Diluentx5）1瓶15.0ml2～8℃冷藏保存英文说明书，中文说明书各一份室温保存二、注意事项1.此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟，浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低极ng确度，造成吸光度偏离的假像。加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。三、实验前准备1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等3．浓缩洗液与医用蒸馏水119倍稀释后成为应用洗涤液4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水14倍稀释成应用样品稀释液5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。）[详细]

  2018-10-03 10:00

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• 人肿瘤坏死因子-αELISA检测试剂盒说明书下载

  人肿瘤坏死因子-αELISA检测试剂盒说明书下载[详细]

  2015-06-15 00:00

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• 兔（rabbit）肿瘤坏死因子-a（TNF-a） 试剂盒操作及注意

  兔（rabbit）肿瘤坏死因子-a（TNF-a）试剂盒操作及注意一、试剂组成1、精密度微孔板MicrotestPlates96wells2、酶标偶合液EnzymeConjugate12.0ml3、标准品Standard　5x1.0ml4、呈色剂A、SubstrateA6.0ml5、呈色剂B、SubstrateB6.0ml6、终止液StopSolution6.0ml7、浓缩洗涤液（1：20）RinsingBuffer60.0ml8、5倍样品稀释液dilution15.0m二、注意事项此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。保存于2-8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟三、操作步骤每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。将板置于37℃温育30分钟。甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。每孔加入酶标偶合液100ul。将板置于37℃温育30分钟。甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。每孔加底物A、底物B各50ul，置37℃恒温箱反应15分钟。8．每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。四、结果判断仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。检测值范围：0400pg/ml敏感度：1.0pg/mlTC-axbz-210鼠杂交瘤细胞K6H6/B5TC-axbz-211大鼠脑膜细胞RMCTC-axbz-295小鼠腺泡细胞癌细胞MPC-83TC-axbz-296小鼠白血病细胞C3TC-axbz-297小鼠β胰岛素瘤细胞RIN-m5FTC-axbz-298小鼠自发高乳腺癌细胞TA2TC-axbz-299小鼠淋巴瘤细胞Nb2－11TC-axbz-300小鼠瘤细胞NS-1TC-axbz-301小鼠肾癌细胞Kert-3人丙型肝炎IgM（HCV-IgM）ELISA试剂盒HumanHepatitisCvirusIgM,HCV-IgMELISA试剂盒人丙型肝炎IgG（HCV-IgG）ELISA试剂盒HumanHepatitisCvirusIgG,HCV-IgGELISA试剂盒人糖蛋白130（gp130）ELISA试剂盒Humanglucoprotein130,gp130ELISA试剂盒人促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）ELISA试剂盒Humancorticotropin-releasingfactor,CRF人去氨加压素/1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素（dDAVP）ELISA试剂盒HumanDesmopressin/1-desamino-8-D-argininevasopressin,dDAVPELISA试剂盒人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3（M-AChRM3）ELISA试剂盒HumanmuscarinicacetylcholinereceptorM3,M-AChRM3ELISA试剂盒人睾酮受体（TR）ELISA试剂盒HumanTestoteronerecepter,TRELISA试剂盒人毒蕈碱型乙酰胆碱受体（M-AChR）ELISA试剂盒Humanmuscarinicacetylcholinereceptor,M-AChRELISA试剂盒人糖蛋白49A（Gp49a）ELISA试剂盒humanglycoprotein49A,Gp49aELISA试剂盒人YZ素β-B（Inhbb）ELISA试剂盒humaninhibinbeta-B,InhbbELISA试剂盒人食欲素受体（OXR）ELISA试剂盒HumanOrexinreceptor,OXRELISA试剂盒人生长激素释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA试剂盒Humangrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA试剂盒人钙调素（CAM）ELISA试剂盒Humancalmodulin,CAMELISA试剂盒人真胰岛素（TI）ELISA试剂盒Humantrueinsulin,TIELISA试剂盒人重酒石酸去甲肾上腺素（NE-B）ELISA试剂盒HumanNoradrenalineBitartas,NE-BELISA试剂盒人前列环素（PGI）ELISA试剂盒Humanprostacycline,PGIELISA试剂盒人降钙素原（PCT）ELISA试剂盒HumanProcalcitonin,PCTELISA试剂盒[详细]

  2018-09-28 10:00

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• 2015Zxin肿瘤坏死因子试剂盒说明书

  酶联免疫吸附测定肿瘤坏死因子试剂盒操作中标本的收集用于ELISA测定的临床标本Z为常用的是血清(浆)，有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前使用血清(浆)标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和ZL药物等。对用于激素和ZL药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4：006：00之间，会有一峰值出现；生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显。再如ZL药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的Z适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响。ELISA试剂盒操作步骤：方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法　　1.　包被：用0.05MPH9.碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过一夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。方法二　用于检测未知抗体的间接法　　1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过一夜；　　2.次日洗涤3次；　　3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；　　4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；　　5.37℃孵育30-60分钟，洗涤；　　6.’Z后一遍用DDW洗涤。　　其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。试剂　　（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:　　Na2CO31.59克　　NaHCO3　2.93克　　加蒸馏水至1000ml　　（2）　洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M　　KH2PO40.2克　　Na2HPO412H2O　2.9克　　NaCl　8.0克　　KCl　0.2克　　Tween-20　0.05%　0.5ml　　加蒸馏水至1000ml　　（3）　稀释液：　　牛血清白蛋白（BSA）0.1克　　加洗涤缓冲液至100ml　　或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。　　（4）　终止液（2M　H2SO4）：　　蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。　　（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:　　0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml　　0.1M柠檬酸（19.2克/L）　24.3ml　　加蒸馏水50ml。　　（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:　　TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml　　底物缓冲液（PH5.5）　10ml　　0.75%H2O2　32μl　　（7）　ABTS使用液:　　ABTS　0.5mg　　底物缓冲液（PH5.5）　1ml　　3%H2O2　2μl　　（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。（9）　正常人血清和阳性对照血清。实验条件的选择　　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:　　（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。　　（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值Zda而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。　　（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。　　（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。肿瘤坏死因子试剂盒操作注意事项　　1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。　　2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。　　3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。　　4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。　　5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。　　6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。　　7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。　　8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。　　9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体ELISA检测。上海恒远生物科技有限公司专业经销众多国际生命科学领域的知名品牌ELISA试剂盒，生物试剂，抗体，培养基，血清。为ZG科研试剂权威供应商之一，质量被全国各大院校科研机构认可，并指定为Elisa试剂盒长期供应商，作为战略合作伙伴。肿瘤坏死因子试剂盒格，超好质量，进口分装/原装试剂盒，保证质量，欢迎您来电选购，期待与您合作！[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 鸡（IL-1β）Elisa试剂盒使用说明书下载

  Elisa试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存C0129,双重酯酶染液/Esterasestain,染色,5毫升×4,2～8℃GRP2133,TTC-沙堡氏琼脂平板,BR9CMChickenInterleukin3,IL-3ELISA试剂盒鸡（IL-3）kit说明书,白介素3Elisa试剂盒小鼠抗心肌抗体（AMA）ELISA试剂盒MouseAnti-myocardialantibody,AMAELISA试剂盒兔子白介素8（IL-8/CXCL8）ELISA试剂盒rabbitInterleukin8,IL-8ELISA试剂盒MouseEpithelialneutrophilactivatingpeptide78,ENA-78ELISAKitPoFAineplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit,猪elisa试剂盒,猪纤溶酶原激活物YZ因子1试剂盒,（PAI-猪1）Elisa试剂盒磷酸氯喹,标准品,HPLC含量测定,100mg,常温,避光小鼠高灵敏度促甲状腺激素（U-TSH）ELISA试剂盒Mouseultrasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISA试剂盒CAS号:120-92-3,环戊酮,≥99.5%（GC）HumanHexokinase,HKELISA试剂盒人（HK）kit说明书,己糖激酶Elisa试剂盒Rhesusmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/RhLAELISAKit人Elisa试剂盒,人SRB/CD36Elisa试剂盒，HumanscavengerreceptorB,SRBELISA试剂盒[详细]

  2018-10-23 10:31

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• 鸡肿瘤坏死因子(TNF-)ELISA试剂盒

  鸡肿瘤坏死因子(TNF-)ELISA试剂盒[详细]

  2024-09-28 00:53

  专利

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• 犬肿瘤坏死因子α酶联免疫分析试剂盒使用说明书下载

  犬肿瘤坏死因子α酶联免疫分析试剂盒使用说明书下载[详细]

  2015-04-28 00:00

  实验操作

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• 大鼠肿瘤坏死因子试剂盒使用说明书

  大鼠肿瘤坏死因子酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。实验原理大鼠肿瘤坏死因子试剂盒使用说明书应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。试剂盒组成120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶2酶标试剂3ml×1瓶8标准品（720ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。360ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液180ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液90ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液45ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液22.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算大鼠肿瘤坏死因子试剂盒使用说明书以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-14 10:00

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• 肿瘤坏死因子αElisa试剂盒使用说明书

  猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：20ng/L-400ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-10-23 10:31

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• 豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4　　　　豚鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：TNF-Α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-Α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-Α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-Α的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：600pg/ml1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗TNF-Α抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备材料：1.蒸馏水。2.加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振荡器及磁力搅拌器等。样品收集、处理及保存方法：1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒操作注意事项：●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。●使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。●使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。●底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。●加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。●按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。安全性：1.避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2.实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。试剂的准备：1.标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：600pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul300pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液150pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液75pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液37.5pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液18.7pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0pg/ml（空白对照）原倍浓度不用稀释直接加入50ul2.洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒性能：1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒操作步骤：1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断与分析：1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TNF-Α标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的TNF-Α含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。3、检测值范围：0-600pg/ml4、敏感度:1.0pg/ml[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 鸡血糖（blood glucose）试剂盒，鸡说明书

  本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，组织及相关液体样本中血糖(bloodglucose)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡血糖(bloodglucose)水平。用纯化的鸡血糖(bloodglucose)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血糖(bloodglucose)，再与HRP标记的血糖(bloodglucose)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的血糖(bloodglucose)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡血糖(bloodglucose)浓度。[详细]

  2018-09-03 10:00

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• 猴肿瘤坏死因子a说明书

  猴（Monkey）肿瘤坏死因子a本试剂仅供研究使用标本：血清一、试剂组成1、精密度微孔板MicrotestPlates96wells2、酶标偶合液EnzymeConjugate12.0ml3、标准品Standard　5x1.0ml4、呈色剂A、SubstrateA6.0ml5、呈色剂B、SubstrateB6.0ml6、终止液StopSolution6.0ml7、浓缩洗涤液（1：20）RinsingBuffer60.0ml8、5倍样品稀释液dilution15.0m二、注意事项此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。保存于2-8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟三、操作步骤每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。将板置于37℃温育30分钟。甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。每孔加入酶标偶合液100ul。将板置于37℃温育30分钟。甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。每孔加底物A、底物B各50ul，置37℃恒温箱反应15分钟。8．每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。四、结果判断仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。检测值范围：010ng/ml敏感度：0.01ng/ml[详细]

  2018-10-31 10:00

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• 鸡ELISA 检测试剂盒说明书

  鸡ELISA 检测试剂盒说明书[详细]

  2016-03-16 00:00

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• 鸡褪黑素试剂盒使用说明书

  上海广锐生物科技有限公司专业经销众多国际生命科学领域的知名品牌ELISA试剂盒，生物试剂，抗体，培养基，血清。为ZG科研试剂权威供应商之一，质量被全国各大院校科研机构认可，并指定为进口Elisa试剂盒/国产Elisa试剂盒长期供应商，作为战略合作伙伴。更多Elisa试剂盒、试剂优惠请登录本公司网站：http://www.shgrsw.com鸡褪黑素（melatonin）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，组织及相关液体样本中褪黑素（melatonin）的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡褪黑素（melatonin）水平。用纯化的鸡褪黑素（melatonin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入褪黑素（melatonin），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的褪黑素（melatonin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡褪黑素（melatonin）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：54ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为36ng/L，24ng/L，12ng/L，6ng/L，3ng/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：1ng/L-40ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-10-23 10:31

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