褪黑激素硫酸盐ELISA Kit使用说明书

本文由 深圳市科润达生物工程有限公司 整理汇编

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  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4褪黑激素硫酸盐ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE54031）1、应用范围此试剂盒可用于人尿液中褪黑激素硫酸盐（又叫6-羟基褪黑激素硫酸盐和6-硫酸褪黑激素）的体外定量检测。2、前言说明松果体因其在光周期现象中的重要作用，已经被人们认为是神经内分泌的传感器。松果体主要分泌的激素是：N-乙酰-5-甲氧色胺和褪黑激素，褪黑激素一般是由色氨酸合成而来的。血浆褪黑激素的浓度可在夜间达到**。褪黑激素特有的波动变化可以反映出一些关于时间变化的信息，如夜晚的长短。褪黑激素的分泌会受到神经系统的调节。交感神经系统在调节褪黑激素分泌方面发挥有重要作用，它主要是通过释放去甲肾上腺素来调节的。据报道，褪黑激素分泌方式和水平的变化与人的一些生理状态一致，如：失眠、时差感、情绪低落、压力大、精神分裂症、丘脑下部性闭经、妊娠、神经想食欲缺乏、某些癌症、免疫系统紊乱和青春期性成熟的影响。大多数循环褪黑激素都可在肝内代谢成6-羟基褪黑激素，之后变成6-硫酸褪黑激素而随尿液排除。尿液中6-羟基褪黑激素硫酸盐的浓度与血液中褪黑激素的总水平有很好的相关性。3、实验原理此ELISA试剂盒利用的是竞争法的原理。样品中未知量的抗原和一定量的酶标抗原竞争性结合到包被在微孔中的抗体结合位点上。温育后洗板以终止竞争反应。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成反比。样品的实验结果可以从标准曲线上直接获取。4、储存与稳定性试剂盒必须在2-8℃的环境下运输和储存，避免太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂准备将在相关章节中阐述。如果将包被板密封并储存于2-8℃的环境下时，试剂在有效期内稳定。5、样品的采集与储存尿液实验必须使用自然产生的尿液，也可使用24小时内产生的尿液。收集病人24小时内产生的尿液，将它加入到含10-15ml6NHCl防腐剂的容器中。为了计算结果，请确定尿液的总体积。实验开始前请先将样品离心。储存2-8℃2-8℃避免太阳直射，避免反复冻融稳定性4天15年6、试剂盒成分数量标记成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，多克隆）。1×5mlANTISERUM褪黑激素硫酸盐抗血清，即用，内含：兔抗血清、Tris缓冲液和0.01%的硫柳汞1×0.2mlENZCONJCONC酶联物，40倍浓缩，内含过氧酶标记的褪黑激素硫酸盐、Tris缓冲液和1%的硫柳汞。1×7×0.1mlCALA-G标准品A-G，0;1.7;5.2;15.6;46.7;140;420ng/mL0;5.2;15.9;47.6;142;427;1281nmol/L。即用，内含褪黑激素硫酸盐、Tris缓冲液和0.01%的硫柳汞。1×2×0.1mlCONTROL1+2质控品1+2，即用，内含0.02%的；硫柳汞。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。1×60mlASSAYBUFCONC检测缓冲液，红色，即用，内含Tris缓冲液、BSA和0.01%的硫柳汞。1×50mlWASHBUFCONC洗涤液，20倍浓缩，内含磷酸缓冲液、吐温和0.1%的硫柳汞。1×0.9mlTMBSUBSCONCTMB底物液，31倍浓缩，内含TMB、缓冲液和稳定剂。1×27mlTMB缓冲液TMB底物缓冲液，储存时避免太阳直射，即用，内含H2O2、柠檬酸盐缓冲液和稳定剂。1×12mlTMBSTOPTMB终止液，即用，1M的H2SO4。3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材但试剂盒不提供1）移液器，体积：10;50;100;1000ul2）试管（12×75mm）3）试管架4）振荡器（500rpm）5）旋涡混合器（500rpm）6）带储器的8道移液器7）洗涤瓶，自动或半自动洗板机8）酶标仪（参考波长：600-650nm）9）蒸馏水或去离子水10）吸水纸、取样吸头和计时器8、实验前的准备说明8.1冻干或浓缩成分的准备稀释/溶解成分稀释剂比例备注储存稳定性15ml洗涤液300ml双蒸水1：2018-25℃将晶体溶解掉2-8℃4周50ul酶联物2ml检测缓冲液1:41临时配置,只能使用一次18-25℃30min300ulTMB底物液9mlTMB底物缓冲液1：31临时配置,只能使用一次18-25℃10min8.2标准品、质控品和病人尿液样品的稀释1将标准品、质控品和病人尿液样品分别10ul加入到聚苯乙烯或聚丙烯或玻璃试管中，避免太阳直射。2在每一试管中加入500ul检测缓冲液，旋涡混合。褪黑激素硫酸盐浓度高于Z高标准品浓度的样品必须用检测缓冲液进行进一步的稀释。9、实验步骤1将已稀释好的标准品、质控品和病人样品分别50ul加入到相应的微孔中。2在每一微孔中加入50ul临时配置好的酶联物。3在每一微孔内加入50ul褪黑激素硫酸盐抗血清。4盖板，室温（18-25℃）包被板振荡器（500rpm）温育2小时。5在温育快要结束的10分钟前，请将TMB底物液准备好。6移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板4次，吸水纸上拍干以除出残余液体。7如果可以的话，请用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用8在每一微孔中加入200ulTMB底物液。9室温（18-25℃）包被板振荡器（500rpm）温育30min。10在每一微孔中加入100ulTMB终止液，轻请振板以混合溶液。11加终止液后60min内在450nm处读取OD值。10、期望值实验结果不能当作确定ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下为明显正常人群褪黑激素硫酸盐的正常值：年龄数目褪黑激素硫酸盐24小时尿液（ug）夜间尿液（ug/h）平均值90%的比例平均值90%的比例20-352636.815.6-58.12.80.9-5.636-501729.69.9-52.92.10.6-3.651-651620.412.3-32.81.50.9-2.5＞1615.87.5-32.71.00.3-2.3建议每个实验室读确定自己的正常值范围本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口太子路18号海景广场11C研发ZX：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

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  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4褪黑激素ELISAELISAKit使用说明书（德国IBL：RE54021）1、应用范围此试剂盒可用于人血清和血浆中褪黑激素的体外定量检测。2、前言说明松果体因其在光周期现象中的重要作用，已经被人们认为是神经内分泌的传感器。松果体主要分泌的激素是：N-乙酰-5-甲氧色胺和褪黑激素，褪黑激素一般是由色氨酸合成而来的。血浆褪黑激素的浓度可在夜间达到Z高。褪黑激素特有的波动变化可以反映出一些关于时间变化的信息，如夜晚的长短。褪黑激素的分泌会受到神经系统的调节。交感神经系统在调节褪黑激素分泌方面发挥有重要作用，它主要是通过释放去甲肾上腺素来调节的。据报道，褪黑激素分泌方式和水平的变化与人的一些生理状态一致，如：失眠、时差感、情绪低落、压力大、精神分裂症、丘脑下部性闭经、妊娠、神经想食欲缺乏、某些癌症、免疫系统紊乱和青春期性成熟的影响。大多数循环褪黑激素都可在肝内代谢成6-羟基褪黑激素，之后变成6-硫酸褪黑激素而随尿液排除。尿液中6-羟基褪黑激素硫酸盐的浓度与血液中褪黑激素的总水平有很好的相关性。3、实验原理此ELISA试剂盒利用的是竞争法的原理。生物素和非生物素标记的抗原竞争性结合包被板上有限的抗体结合位点。生物素抗原结合到抗体上的量与样品中抗原的量成反比。系统达到平衡后，洗板除去游离的生物素抗原，结合到抗体上的生物素抗原可以用抗生物素碱性磷酸酶标记物和对硝基苯磷酸底物检测出来。用已知的标准品数据做一条标准曲线，将未知样品的酶活性与标准曲线进行比较就可以定量出未知样品的量。4、储存与稳定性试剂盒必须在2-8℃的环境下运输和储存，避免太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂准备将在相关章节中阐述,如果将包被板密封并储存于2-8℃的环境下时,试剂在有效期内稳定。用甲醇洗提后的提取柱可用于其它样品的提取或储存于2-8℃的环境下。提取柱可重复使用4次。5、样品的采集与储存血清，血浆（EDTA，肝素）按照静脉穿刺的常规注意事项采集样品，血液样品自采集到实验时都必须保证其化学完整性。不要使用明显溶血、黄疸和脂血样品。混浊的样品应当在实验开始前离心以除去所有的颗粒性物质。储存2-8℃≤-20℃≤-70℃避免太阳直射，避免反复冻融。稳定性24小时3个月1年6、试剂盒成分数量标记成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，多克隆）。3×2mlBIOTINLYO褪黑激素生物素，冻干，内含稳定剂。3×2mlANTISERUMLYO褪黑激素硫酸盐抗血清，冻干粉，内含抗血清（兔，多克隆）和稳定剂。1×250ulENZCONJCONC酶联物，80倍浓缩，内含碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体（羊）、Tris缓冲液和稳定剂。1×6×2mlCALA-FLYO标准品A-F，冻干粉，内含稳定剂，提取浓度请见试剂瓶标签或QC质控品。1×2×2mlCONTROL1+2LYO质控品1+2，冻干粉，内含稳定剂，浓度/可接受范围请见试剂瓶标签。1×50mlASSAYBUFCONC检测缓冲液，10倍浓缩，内含磷酸缓冲液、吐温和稳定剂。1×9×PNPPSUBSPNPP底物片，密封于铝铂金属袋中，内含对硝基苯硫酸盐。1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液，即用，内含二乙醇氨和水。1×15mlPNPPSTOPPNPP终止液，即用，内含1M的NaOH和0.25M的EDTA。2×10EXTRCOL提取柱，即用，C18RP，1m3/100mg。另需提取柱可从IBL定够（编号：KEME761）3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材但试剂盒不提供1）移液器，体积：50;500ul2）试管（12×75mm）3）轨道振荡器（400-600rpm）4）旋涡混合器5）带储器的8道移液器6）洗涤瓶，自动或半自动洗板机7）离心机（冷冻离心机更适宜）：200-500×g，也可选用多头抽真空装置（例如：Mallinekrodt-Baker或Waters）。8）甲醇（HPLC级）9）蒸发离心机10）可在405nm处读数的酶标仪（参考波长600-650nm）11）蒸馏水或去离子水12）吸水纸、取样吸头和计时器8、实验前的准备说明注意用于96人份检测色试剂盒成分可分成3次进行。下列所述体积为检测32人份时所需要的量。8.1冻干或浓缩成分的准备稀释/溶解成分稀释剂比例备注储存稳定性15ml检测缓冲液150ml双蒸水1：102-8℃4周标准品和质控品2.0ml双蒸水静置15min，混合时避免气泡≤-20℃直至有效期褪黑激素生物素2.0ml蒸馏水静置15min，混合时避免气泡临时配置,只能使用一次褪黑激素抗血清2.0ml蒸馏水静置15min，混合时避免气泡70ul酶联物5.6ml已稀释的检测缓冲液1:813PNPP底物片8mlPNPP底物缓冲液10ml未稀释甲醇100ml蒸馏水10%（v/v）如果溶液的需要量比较大,应该将试管内的溶液混合.避免反复冻融。8.2样品的稀释如果怀疑样品中的褪黑激素浓度比Z高标准品的高，必须将样品在提取步骤前用检测缓冲液进行进一步的稀释。8.3样品、标准品和质控品的提取（提取柱）按照此步骤进行提取，提取量大约为90-1**%。为了避免柱子堵塞，提取样品前将样品过滤或离心一下。注意每份样品、标准品和质控品都必须提取，提取必须提前进行。干燥的提取物（甲醇蒸发后）可在2-8℃或-20℃下储存24个小时。用甲醇洗提后，提取柱就可以用于下一份样品的提取或是存放到2-8℃的环境下。提取柱可以反复使用4次。如果是重复使用，在再次从A.1开始（柱的调制）。A、标准版本：离心与蒸发离心步骤1.柱的调制1将提取柱放到聚苯乙烯或玻璃试管中（12×75mm）。2在提取柱中加入2×1ml的甲醇（未稀释的），200g离心1min使溶剂通过提取柱，弃取洗出液。3向提取柱中加入2×1ml的蒸馏水，200g离心1min使溶剂通过提取柱，弃取洗出液。4为了避免柱子变干，请立即提取样品。2.样品提取5将提取柱放到相应的标记聚苯乙烯或玻璃试管中（12×75mm）。6向提取柱中加入0.5ml标准品、质控品和样品，200g离心1min使溶剂通过提取柱，弃取洗出液。3、洗涤7向提取柱中加入2×1ml的10%甲醇（蒸馏水稀释），500g离心1min使溶剂通过提取柱，弃取洗出液。4、提取物的洗脱8将提取柱放到新的标记聚苯乙烯或玻璃试管中（12×75mm）9向提取柱中加入1ml未稀释的甲醇，200g离心1min使溶剂通过提取柱。10将提取柱从试管中移出，避免液滴还停留在柱子中。将柱子用于下一份样品的提取或存放于2-8℃的环境下。提取柱可重复使用四次。5.提取物的蒸发和重新配置11用蒸发离心机将甲醇蒸发掉。12用0.15ml的蒸馏水重新稀释配置样品13旋涡混和1分钟，并立即检测样品。B、选择性版本：用多头抽真空装置代替离心机提取步骤仍然按照A1-5进行，柱子不变。用真空和≤5ml/min的流速使溶剂通过柱子。样品和提取物用≤2ml/min的流速。用蒸发离心机或氮气蒸发干燥溶剂。9、实验步骤1将提取好的标准品、质控品和样品分别50ul加入到相应的微孔中。2在每一微孔中加入50ul褪黑激素生物素。3在每一微孔内加入50ul褪黑激素抗血清。4盖板，轻轻震板，2-8℃下温育14-20小时。5移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的检测缓冲液洗板3次，吸水纸上拍干以除出残余液体。6在每一微孔中加入150ul临时配置好的酶联物。7盖板，室温（18-25℃）轨道振荡器上（500rpm）温育120min。8大约在温育结束10分钟前准备好PNPP底物液。9移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的检测缓冲液洗板3次，吸水纸上拍干以除出残余液体。10如果有8道移液器，请用8道移液器加底物液和终止液，加底物液和终止液的时间间隔应当相同。使用主动置换型移液器并避免气泡产生。11在每一微孔中加入200ul临时配置好的PNPP底物液。12室温（18-25℃）轨道振荡器上（500rpm）温育20-40min。13在每一微孔中加入50ulPNPP终止液，轻轻震板以使溶液混合均匀。14加终止液后60min内在405nm处读取OD值。（参考波长：600-650nm）10、结果计算在半对数坐标纸上或自动计算的方法，以标准品的OD值（Y轴，线性）对其浓度（X轴，对数）做一条标准曲线。使用三次回归、四参数或双对数曲线方程可以得到更好的标准曲线。在推算标准曲线时，应当充分利用好每一个标准品数值（明显逸出的数值应当被忽略，再使用更加合理的数值代替它）。样品的浓度可以从标准曲线上直接读取。从坐标纸上读取结果时应当把起始的稀释倍数考虑进去。将稀释了的样品结果乘以稀释因子即可得到其相应的结果。样品中抗体浓度高于Z高标准品的样品，应当按实验前准备说明所述的方法进行稀释，并重新检测。转换系数：褪黑激素（pg/ml）×4.30=pmol/l典型标准曲线（例子：不能用来定量）标准品褪黑激素（pg/ml）平均OD值OD/ODmax（%）A0.01.517100B3.01.38391.1C101.21480.1D300.86757.1E1000.43428.6F3000.26017.111、期望值实验结果不能当作确定ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。对明显健康的一组人群进行研究发现，人体内的褪黑激素水平有着明显的生理周期变化，褪黑激素白天的水平很低，而晚上的水平则很高，而且个体之间的差异也很大。此外，褪黑激素的水平也与年龄有关系，其Z高浓度是在婴儿（3岁）样品中发现的。对6个明显健康献血者的褪黑激素生理周期进行研究。褪黑激素大概在白天下午四点Zdi，其平均值是4.6pg/ml；早晨4点达到**，平均值为77.5pg/ml。健康个体之间的褪黑激素Z高值差异很大，建议每个实验室都确定自己实验室的正常值范围。本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口太子路18号海景广场11C研发ZX：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 供应鱼褪黑激素（melatonin）ELISA 试剂盒使用说明书

  供应鱼褪黑激素（melatonin）ELISA 试剂盒使用说明书[详细]

  2015-03-25 00:00

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• 鸡褪黑激素 （MT）酶联免疫分析

  www.biokanu.com鸡褪黑激素(MT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，组织及相关液体样本中褪黑激素(MT)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡褪黑激素(MT)水平。用纯化的鸡褪黑激素(MT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入褪黑激素(MT)，再与HRP标记的褪黑激素(MT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的褪黑激素(MT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡褪黑激素(MT)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：54ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为36ng/L，24ng/L，12ng/L，6ng/L，3ng/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。2.批内与批见应分别小于9%和15%检测范围：1ng/L-40ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-22 10:00

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  2018-10-01 10:00

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• 人甲状旁腺激素(PTH)ELISA Kit说明书

  人甲状旁腺激素(PTH)ELISA Kit说明书[详细]

  2014-09-02 00:00

  期刊论文

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• 人激素敏感性脂肪酶(HSL)ELISA Kit说明书

  人激素敏感性脂肪酶(HSL)ELISA Kit说明书[详细]

  2014-08-25 00:00

  标准

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• 人黑色素浓缩激素(MCH)ELISA kit说明书

  人黑色素浓缩激素(MCH)ELISA kit说明书[详细]

  2014-08-21 00:00

  操作手册

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• 组胺ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4组胺ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59221）1、应用范围此试剂盒可用于人血浆和尿液中组胺的体外定量检测。深化此实验可用于细胞培养上清液的研究。2、前言说明组胺（β-咪唑乙胺）是人体中Z重要的介质，它主要存在于过敏反应的起始阶段（速发型过敏）。组胺是由组胺酸经脱氨基作用产生的。组胺几乎存在于机体的所有组织中，主要储存于柱状细胞和嗜碱性粒细胞的异染性颗粒中。组胺通常都是以无活性的复合体性存在，只有当需要的时候才会释放。像其它的介质一样，组胺不仅能调节过敏反应的各种临床症状，也可以调节终止过敏反应的一系列效应。组胺在组织中的生物活性是通过三种受体来完成的，它们分别是H1，H2和H3受体。临床检测组胺的方法有：定量检测各种速发型过敏反应中嗜碱性白细胞释放组胺的量，也可以检测过敏药物ZL后各种体液（血浆，尿液，细胞培养上清）中组胺的量。3、实验原理此ELISA试剂盒利用的是竞争法的原理。样品中未知量的抗原和一定量的酶标抗原竞争性结合到包被在微孔中的抗体结合位点上。温育后洗板以终止竞争反应。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成反比。样品的实验结果可以从标准曲线上直接获取。4、储存与稳定性试剂盒必须在2-8℃的环境下运输和储存，避免太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂准备将在相关章节中阐述。如果将包被板密封并储存于2-8℃的环境下时，试剂在有效期内稳定。5、样品的采集与储存血浆（EDTA，肝素）按照静脉穿刺的常规注意事项采集样品，血液样品自采集到实验时都必须保证其化学完整性。不要使用明显溶血、黄疸和脂血样品。混浊的样品应当在实验开始前离心以除去所有的颗粒性物质。储存2-8℃≤-20℃≤-70℃避免太阳直射，避免反复冻融。稳定性5小时3个月2年尿液实验必须使用自然产生的尿液，也可使用24小时内产生的尿液。收集病人24小时内产生的尿液，并混合于含10-15ml6NHCl防腐剂的容器中。为了计算结果，请确定尿液的总体积。实验开始前请先将样品离心。自然的尿液酸化尿液避免太阳直射，避免反复冻融。储存2-8℃2-8℃≤-20℃稳定性8小时3天6个月细胞培养上清使用细胞培养上清作样品，一般没特殊注意事项细胞培养基内的组胺浓度可能稍微要高些。全血全血中组胺释放量的检测必须用肝素化全血，具体信息请见相应的说明书（RE95000）6、试剂盒成分注意：试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分数量标记成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清。1×5mlANTISERUM组胺抗血清，蓝色，即用，内含：兔抗血清、Tris缓冲液和0.01%的硫柳汞1×75ulENZCONJCONC酶联物，200倍浓缩，内含辣根过氧酶标记的组胺。7×0.4mlCALPA-GLYO血浆标准品A-G，冻干，用于血浆样品的定标。内含：组胺、人血浆。具体浓度请见试剂瓶标签或质控单。2×0.4mlCONTROLP1+2LYO血浆质控1+2，冻干，内含：组胺、人血清。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。1×2.0ml5×0.25mlCALU/CA-F尿液/细胞培养标准品A-F，0;2.7;8.1;24.3;73;219ng/ml,即用，用于尿液和细胞培养样品的定标。内含：组胺和0.1M的HCl。2×0.25mlCONTROLU/C1+2尿液质控1+2，即用，内含：组胺、人尿液（酸化的）。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。1×2.25mlACYLREAG酰化试剂，即用，内含：DMF1×60mlASSAYBUFCONC检测缓冲液，5倍浓缩，内含Tris缓冲液、吐温、BSA和0.05%的硫柳汞。1×50mlWASHBUFCONC洗涤液，20倍浓缩，内含磷酸缓冲液、吐温和0.1%的硫柳汞。1×10mlINDICATORBUF指示缓冲液，紫色，即用，内含：Tris缓冲液、苯酚（pH＜7.5时颜色会发生改变＝和0.1%的硫柳汞。1×12mlTMBSUBSTMB底物液，即用，内含TMB、缓冲液和稳定剂。1×12mlTMBSTOPTMB终止液，即用，1M的H2SO4。3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材但试剂盒不提供1）移液器，体积：10;20;50;100;1000ul2）试管（12×75mm）3）试管架4）振荡器5）旋涡混合器（500rpm）6）带储器的8道移液器7）洗涤瓶，自动或半自动洗板机8）酶标仪（参考波长：600-650nm）9）蒸馏水或去离子水10）吸水纸、取样吸头和计时器8、实验前的准备说明注意96人份的试剂盒可分成三份分别进行检测，下述体积为检测32人份时所需要的体积。8.1冻干或浓缩成分的准备稀释/溶解成分稀释剂比例备注储存稳定性20ml检测缓冲液100ml蒸馏水1：52-8℃2周15ml洗涤液300ml蒸馏水1：2018-25℃将晶体溶解掉2-8℃4周血浆标准品0.4ml蒸馏水静置15min,混合时无泡沫-20℃1个月血浆质控品0.4ml蒸馏水静置15min,混合时无泡沫-20℃1个月10ul（*）酶联物2ml检测缓冲液1:200临时配置,只能使用一次18-25℃30分钟（*）在稀释前,确保塞子内无残留液体.8.2样品的稀释样品中组胺浓度高于Z高标准品的样品,应当在酰化前用相应的稀释液稀释,尿液样品用0.1M的HCl,血浆样品用样品稀释液（Cat.no.KEHP711）,试剂盒内未提供。8.3样品的酰化用试管准备样品注意不能血浆标准曲线确定酰化尿液或细胞培养样品中组胺的浓度,也不能用U/C标准曲线确定酰化血浆样品中组胺的浓度.8.3.1血浆1将血浆标准品、血浆质控品和病人样品分别100ul加入到相应的试管中。2在每一试管中加入100ul指示缓冲液，旋涡混合。3在每一试管中加入20ul酰化试剂，加入酰化试剂后立即旋涡混合。4将试管盖好，室温（18-25℃）温育30分钟。5在每一试管中加入750ul已稀释好的检测缓冲液，旋涡混合。8.3.2尿液，细胞培养上清1将U/C标准品、尿液质控品和病人尿液或细胞培养上清分别50ul加入到相应的试管中。2在每一试管中加入50ul指示缓冲液，旋涡混合。如果指示剂变成无色，说明溶液的pH值很低，样品中含有很多酸性物质。在这种情况下，再向试管中加入50ul指示缓冲液直至溶液略带微红。3在每一试管中加入10ul酰化试剂，加入酰化试剂后立即旋涡混合。4将试管盖好，室温（18-25℃）温育30分钟。5在每一试管中加入2000ul已稀释好的检测缓冲液，旋涡混合。注意：酰化处理好的样品可在2-8℃下存放一晚，-20℃环境下可存放2天。9、实验步骤1将酰化处理过的标准品、质控品和病人样品分别50ul加入到相应的微孔中。2在每一微孔中加入50ul临时配置好的酶联物。3在每一微孔中加入50ul组胺抗血清。4盖板，振荡器（500rpm）上室温温育3小时。5移去粘性金属板，弃取孔内反应物，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板4次，吸水纸上拍干以除去残余液体。6如果有条件的话，可以用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液时，每孔的时间间隔应当相同。使用主动置换型移液器并避免气泡产生。7在每一微孔中加入100ulTMB底物液。8血浆：振荡器（500rpm）上室温温育40min。尿液/细胞培养上清：振荡器（500rpm）上室温温育20min。9在每一微孔中加入100ulTMB终止液以终止底物反应。轻轻振板使溶液混合均匀。10加终止液后15min内450nm处读取OD值。（参考波长：600-650nm）10、期望值实验结果不能当作任何ZL结果的**原因，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%），建议每个实验室读确定自己的正常值范围：血浆尿液24小时尿液自然产生的尿液ng/mlug/dug/g肌酐酸0.2-1.05-568-53本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口太子路18号海景广场11C研发ZX：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 肾上腺素ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4肾上腺素ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59251）1、应用范围此试剂盒可用于人血清和尿液中肾上腺素的体外定量检测。2、临床意义儿茶酚胺类激素肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺主要由肾上腺髓质、交感神经系统和大脑产生。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。在许多疾病中，儿茶酚胺激素及其代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素的分泌量都会增加，因而这些激素可用于疾病的诊断。所以，这些激素的检测对于疾病的诊断及神经系统肿瘤疾病的具有重要意义。它主要用于嗜铬细胞瘤的诊断，当然也用于成神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断。因为在实验一开始时有提取步骤，用户可使用各种动物材料进行实验。所有动物的儿茶酚胺的化学结构相同，因此此试剂盒可用于测大鼠、小鼠或其它动物。3、实验原理此固相ELISA试剂盒利用的夹心法原理。微孔中包被了羊抗兔抗体。之后加入的液态抗体可以结合到抗原分子的一个抗原决定簇上，而抗原分子可在温育期内结合到固相抗体上。样品中的抗原与酶标二抗一起在微孔内温育，此酶标二抗可结合到抗原分子上的另一不同表位上。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接从标准曲线上读取。4、贮存与稳定性试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。5、样品的采集与储存注意人体内的儿茶酚氨和间甲肾上腺素的释放会受到一些食品和药物的影响。因此在样品采集前72小时内病人应禁止服用下列食物和药品：维生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMTYZ剂，还有降血压类药物。血浆（EDTA）注意血液采集后两小时内，将血液样品冷藏于2-8℃的环境下直致离心获取血浆。注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸的和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。贮存2-8℃≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6h1个月尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。将病人24h内的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml6N的HCl防腐剂的试剂瓶中。贮存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6个月6、试剂盒成分注意：试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分数量标志成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，单克隆）。1×6×2.5mlCALA-F标准品A-F，即用肾上腺素:0;1.5;15;50;150ng/ml（0;8;27;82;273;819nmol/L）去甲肾上素:0;5;15;50;150;500ng/mL（0;30;89;296;887;2955nmol/L）多巴胺:0;12;35;115;450;2250ng/mL（0;78;228;750;2938;14688nmol/L）内含[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺（有生物活性）,0.1M的HCl1×2×2.5mlCONTROL1+2质控品1+2即用,内含[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl,具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签.1×250μLENZCONJCONC酶联物浓缩型（100×）内含：碱性磷酸酶标记的抗体，Tris缓冲液，HCl，0.01%的NaN32×EXTRPLATE提取板（微孔板）每板24孔，包被了硼酸亲和凝胶。1×60mlEXTRBUF提取缓冲液粉红色，即用，内含：0.016%的NaN3。2×1.25mlCOMTLYOCOMT冻干粉内含：儿茶酚-氧位-甲基转移酶（猪肝），NaN31×2mlCOMTADDCOMT添加剂内含：人血浆，稳定剂，0.01%硫柳汞。1×7mlANTISERUMDO肾上腺素抗血清紫罗兰色，即用，内含：抗肾上腺素抗体（兔），缓冲液，稳定剂。2×1.25mlCOENZ酶联复合物即用，内含：S-腺苷-L-蛋白酸，稳定剂。1×3mlENZBUF酶缓冲液即用，内含：Tris缓冲液，HCl，稳定剂。1×17mlRELEASEBUFRelease缓冲液黄色，即用，内含：0.1M的HCl，指示剂。1×3mlACYLREAG酰化试剂即用，内含：二甲基甲酰胺，乙醇。注意：有毒，高可燃性。1×50mlWASHBURCONC洗涤液浓缩型（10×）内含：Tris缓冲液，HCl，吐温，0.2%的NaN31×9×PNPPSUBSPNPP底物片内含：对硝基苯磷酸（PNPP）1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液即用，内含：二乙醇胺，水，0.05%的NaN31×15mlPNPPSTOPPNPP终止液即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材（但试剂盒不提供）1）移液器（10；10-100；100-1000μL）2）轨道摇床（200-900rpm）3）旋涡混合器4）带储器的8通道移液器5）洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统6）酶标仪7）双蒸水或去离子水8）吸水纸，取样吸头，计时器8、实验前说明注意用于96人份检测色试剂盒成分可分成两次进行。，下列所述体积为做48人份时所需要的量。8.1样品的稀释如果样品中肾上腺素浓度高于Z高标准品的应按照下列所述进行稀释：样品待稀释稀释液备注血浆肾上腺素浓度高于Z高标准品中肾上腺素的浓度双蒸水提取步骤前尿液肾上腺素浓度高于Z高标准品中肾上腺素的浓度0.1N的HCl提取步骤前8.2样品、标准品和质控品的提取（提取板）1）将标准品、已稀释好的质控品、已稀释好的尿液样品各20μL和500μL血浆样品加入到提取板相应的微孔中。除血浆样品孔外，在所有的微孔中加入500μL双蒸水以消除体积差别。2）在每一微孔中加入1000μL提取缓冲液3）盖板。在轨道摇床（600-900rpm）上18-25℃的环境下提取30min。在提取过程中，液体的表面应该会浸湿粘性金属板，但液体的量不能超过微孔的2/3。液体是否溅出并不会影响实验结果。4）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。5）每孔加入2ml双蒸水6）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。7）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。8）每孔加入150μL提取缓冲液，再向每孔中加入50μL酰化试剂，立即混合均匀。9）在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下提取20min。（无需盖板）10）快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。11）每孔加入2ml双蒸水。12）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。13）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。14）每孔加入300μLRelease缓冲液。15）在轨道摇床（400-500rpm）上18-25℃的环境下振荡30min。（无需盖板）已准备好的样品应当在当天就进行检测。如果不行的话，您可将提取板用粘性金属板盖好，在2-8℃的环境下可存放一夜。9、实验步骤9.1COMT酶溶液的准备注意：COMT酶溶液应在使用前直接临时配置。在COMT冻干粉中加入1.25ml双蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶联溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40mlCOMT添加剂以充分混合溶解的COMT试剂*，COMT酶溶液Z后的体积为每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋涡混合器混合，但要避免气泡产生，配置好的COMT溶液可在室温下稳定存放1小时。*如果只需要一定量的COMT溶液，则剩余的COMT溶液应立即冻存于-20℃的环境下。COMT溶液可在此环境下稳定存放1-2个月。9.2样品、标准品和质控品的酶分化注意如果要检测肾上腺素和去甲肾上腺素，我们建议您先检测肾上腺素。如果使用自动置换型衣液器加样，请将取样吸头内的残余液体加入到提取板的相应微孔内，否则剩余的提取液不够去甲肾上腺素检测用。将提取板放到有一定坡度的位置上。实验开始前，确定好肾上腺素和去甲肾上腺素的检测孔并标记好。9.3尿液与血浆中的甲肾上腺素1在每一微孔内加入25ul临时配制的COMT酶溶液，轻轻振板以使溶液混合均匀。2将提取好的标准品、质控品和样品分别25ul加入到相应的微孔内。在此步骤中，我们可以将取样吸头直接深入到COMT溶液里。加样后，溶液颜色变成粉色，轻轻振板以使溶液混合均匀。3向每一微孔中加入50ul甲肾上腺素抗血清（绿色）。4盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育120min。8.4冻干粉或浓缩成分的准备稀释成分稀释液比例备注贮存稳定性20ml洗涤液180ml双蒸水1：10充分混合2-8℃4W60μL酶联物6ml洗涤缓冲液（已稀释好）1：101临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生18-25℃30min4PNPP底物片10.7mlPNPP底物缓冲液临时配置，仅能使用一次18-25℃10min9.5ELISA实验步骤1）移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300ul稀释好的洗涤液洗板4次。Z后在吸水纸上拍干以除去残余液体。2）在每一微孔中加入100ul临时配置好的酶联物。3）盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育60min。4）移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300ul稀释好的洗涤液洗板4次。Z后在吸水纸上拍干一除去残余液体。5）如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。6）在每一微孔中加入200ul底物液。7）不要盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育60min。8）在每一微孔内加入50ulPNPP终止液以终止酶反应。轻轻振板以使溶液混合均匀。9）加终止液后60min内405nm处读取OD值。10、期望值实验结果不能当作判断任何ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%），建议每个实验室读确定自己的正常值范围：尿液血浆μg/dnmol/dpg/mLnmol/L去甲肾上腺素＜20＜110＜125＜0.68本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口工业区太子路18号海景广场11C研发基地：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 去甲肾上腺素ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4去甲肾上腺素ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59261）1、应用范围此试剂盒可用于人血清和尿液中去甲肾上腺素的体外定量检测。2、临床意义儿茶酚胺类激素肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺主要由肾上腺髓质、交感神经系统和大脑产生。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。在许多疾病中，儿茶酚胺激素及其代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素的分泌量都会增加，因而这些激素可用于疾病的诊断。所以，这些激素的检测对于疾病的诊断及神经系统肿瘤疾病的具有重要意义。它主要用于嗜铬细胞瘤的诊断，当然也用于成神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断。因为在实验一开始时有提取步骤，用户可使用各种动物材料进行实验。所有动物的儿茶酚胺的化学结构相同，因此此试剂盒可用于测大鼠、小鼠或其它动物。3、实验原理此固相ELISA试剂盒利用的夹心法原理。微孔中包被了羊抗兔抗体。之后加入的液态抗体可以结合到抗原分子的一个抗原决定簇上，而抗原分子可在温育期内结合到固相抗体上。样品中的抗原与酶标二抗一起在微孔内温育，此酶标二抗可结合到抗原分子上的另一不同表位上。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接从标准曲线上读取。4、贮存与稳定性试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。5、样品的采集与储存注意人体内的儿茶酚氨和间甲肾上腺素的释放会受到一些食品和药物的影响。因此在样品采集前72小时内病人应禁止服用下列食物和药品：维生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMTYZ剂，还有降血压类药物。血浆（EDTA）注意血液采集后两小时内，将血液样品冷藏于2-8℃的环境下直致离心获取血浆。注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸的和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。贮存2-8℃≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6h1个月尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。将病人24h内的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml6N的HCl防腐剂的试剂瓶中。贮存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6个月6、试剂盒成分注意：试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分数量标志成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，单克隆）。1×6×2.5mlCALA-F标准品A-F，即用肾上腺素:0;1.5;15;50;150ng/ml（0;8;27;82;273;819nmol/L）去甲肾上素:0;5;15;50;150;500ng/mL（0;30;89;296;887;2955nmol/L）多巴胺:0;12;35;115;450;2250ng/mL（0;78;228;750;2938;14688nmol/L）内含[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺（有生物活性）,0.1M的HCl1×2×2.5mlCONTROL1+2质控品1+2即用,含:[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl,具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签.1×250μLENZCONJCONC酶联物浓缩型（100×）内含：碱性磷酸酶标记的抗体，Tris缓冲液，HCl，0.01%的NaN32×EXTRPLATE提取板（微孔板）每板24孔，包被了硼酸亲和凝胶。1×60mlEXTRBUF提取缓冲液粉红色，即用，内含：0.016%的NaN32×1.25mlCOMTLYOCOMT冻干粉内含：儿茶酚-氧位-甲基转移酶（猪肝），NaN31×2mlCOMTADDCOMT添加剂内含：人血浆，稳定剂，0.01%硫柳汞。1×7mlANTISERUMDO去甲肾上腺素抗血清紫罗兰色，即用，内含：抗去甲肾上腺素抗体（兔），缓冲液，稳定剂。2×1.25mlCOENZ酶联复合物即用，内含：S-腺苷-L-蛋白酸，稳定剂。1×3mlENZBUF酶缓冲液即用，内含：Tris缓冲液，HCl，稳定剂。1×17mlRELEASEBUFRelease缓冲液黄色，即用，内含：0.1M的HCl，指示剂。1×3mlACYLREAG酰化试剂即用，内含：二甲基甲酰胺，乙醇。注意：有毒，高可燃性。1×50mlWASHBURCONC洗涤液浓缩型（10×）内含：Tris缓冲液，HCl，吐温，0.2%的NaN31×9×PNPPSUBSPNPP底物片内含：对硝基苯磷酸（PNPP）1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液即用，内含：二乙醇胺，水，0.05%的NaN31×15mlPNPPSTOPPNPP终止液即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材（但试剂盒不提供）1）移液器（10；10-100；100-1000μL）2）轨道摇床（200-900rpm）3）旋涡混合器4）带储器的8通道移液器5）洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统6）酶标仪7）双蒸水或去离子水8）吸水纸，取样吸头，计时器8、实验前说明注意用于96人份检测色试剂盒成分可分成两次进行。，下列所述体积为做48人份时所需要的量。8.1样品的稀释如果样品中去甲肾上腺素浓度高于Z高标准品的应按照下列所述进行稀释：样品待稀释稀释液备注血浆去甲肾上腺素浓度高于Z高标准品中去甲肾上腺素的浓度双蒸水提取步骤前尿液去甲肾上腺素浓度高于Z高标准品中去甲肾上腺素的浓度0.1N的HCl提取步骤前8.2样品、标准品和质控品的提取（提取板，手动操作版）1）将标准品、已稀释好的质控品、已稀释好的尿液样品各20μL和500μL血浆样品加入到提取板相应的微孔中。除血浆样品孔外，在所有的微孔中加入500μL双蒸水以消除体积差别。2）在每一微孔中加入1000μL提取缓冲液3）盖板。在轨道摇床（600-900rpm）上18-25℃的环境下提取30min。在提取过程中，液体的表面应该会浸湿粘性金属板，但液体的量不能超过微孔的2/3。液体是否溅出并不会影响实验结果。4）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。5）每孔加入2ml双蒸水6）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。7）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。8）每孔加入150μL提取缓冲液，再向每孔中加入50μL酰化试剂，立即混合均匀。9）在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下提取20min。（无需盖板）10）快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。11）每孔加入2ml双蒸水。12）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。13）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。14）每孔加入300μLRelease缓冲液。15）在轨道摇床（400-500rpm）上18-25℃的环境下振荡30min。（无需盖板）已准备好的样品应当在当天就进行检测。如果不行的话，您可将提取板用粘性金属板盖好，在2-8℃的环境下可存放一夜。9、实验步骤9.1COMT酶溶液的准备注意：COMT酶溶液应在使用前直接临时配置。在COMT冻干粉中加入1.25ml双蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶联溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40mlCOMT添加剂以充分混合溶解的COMT试剂*，COMT酶溶液Z后的体积为每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋涡混合器混合，但要避免气泡产生，配置好的COMT溶液可在室温下稳定存放1小时。*如果只需要一定量的COMT溶液，则剩余的COMT溶液应立即冻存于-20℃的环境下。COMT溶液可在此环境下稳定存放1-2个月。9.2样品、标准品和质控品的酶分化注意如果要检测肾上腺素和去甲肾上腺素，我们建议您先检测肾上腺素。如果使用自动置换型衣液器加样，请将取样吸头内的残余液体加入到提取板的相应微孔内，否则剩余的提取液不够去甲肾上腺素检测用。将提取板放到有一定坡度的位置上。实验开始前，确定好肾上腺素和去甲肾上腺素的检测孔并标记好。9.3尿液与血浆中的去甲肾上腺素1在每一微孔内加入25ul临时配制的COMT酶溶液，轻轻振板以使溶液混合均匀。2将提取好的标准品、质控品和样品分别25ul加入到相应的微孔内。在此步骤中，我们可以将取样吸头直接深入到COMT溶液里。加样后，溶液颜色变成粉色，轻轻振板以使溶液混合均匀。3向每一微孔中加入50ul去甲肾上腺素抗血清（蓝色）。4盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育120min。8.4冻干粉或浓缩成分的准备稀释成分稀释液比例备注贮存稳定性20ml洗涤液180ml双蒸水1：10充分混合2-8℃4W60μL酶联物6ml洗涤缓冲液（已稀释好）1：101临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生18-25℃30min4PNPP底物片10.7mlPNPP底物缓冲液临时配置，仅能使用一次18-25℃10min9.5ELISA实验步骤1）移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300ul稀释好的洗涤液洗板4次。Z后在吸水纸上拍干以除去残余液体。2）在每一微孔中加入100ul临时配置好的酶联物。3）盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育60min。4）移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300ul稀释好的洗涤液洗板4次。Z后在吸水纸上拍干一除去残余液体。5）如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。6）在每一微孔中加入200ul底物液。7）不要盖板，在轨道摇床上（400-600rpm）18-25℃的环境下孵育60min。8）在每一微孔内加入50ulPNPP终止液以终止酶反应。轻轻振板以使溶液混合均匀。9）加终止液后60min内405nm处读取OD值。10、期望值实验结果不能当作判断任何ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%），建议每个实验室读确定自己的正常值范围：尿液血浆μg/dnmol/dpg/mLnmol/L去甲肾上腺素＜90＜535＜600＜3.55本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口工业区太子路18号海景广场11C研发基地：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 多巴胺ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4多巴胺ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59161）1、应用范围此试剂盒可用于人血浆和尿液中多巴胺的体外定量检测，可手动操作，也可自动操作。进一步的研究表明：此试剂盒还可用于组织匀浆和细胞培养上清液的研究。2、前言说明儿茶酚氨类激素肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺主要由肾上腺髓质、交感神经系统和大脑产生。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。在许多疾病中，儿茶酚氨激素及其代谢产物间甲肾上腺素和去甲变肾上腺素的分泌量都会增加，因而这些激素可用于疾病的诊断。所以，这些激素的检测对于疾病的诊断及神经系统肿瘤疾病的具有重要意义。它主要用于嗜铬细胞瘤的诊断，当然也用于成神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断。因为在实验一开始时有提取步骤，所以用户可使用各种各样的动物材料进行实验。如果用此试剂盒测大鼠、小鼠或其它动物，则儿茶酚氨的化学结构与动物的相同。3、实验原理此固相酶联免疫吸附实验利用的是ELISA的夹心法。微孔中包被了羊抗兔抗体。在温育时间之内，加入的溶液抗在体可直接与抗原分子上的一个表位结合。样品中的抗原与酶标二抗（可与抗原分子上的不同表位结合）在包被孔中温育。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接用标准曲线确定。4、贮存与稳定性试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。5、样品的采集与储存注意人体内的儿茶酚氨和间甲肾上腺素的释放会受到一些食品和药物的影响。因此在样品采集前72小时内病人应禁止服用下列食物和药品：维生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMTYZ剂，还有降血压类药物。血浆（EDTA）注意血液采集后两小时内，将血液样品冷藏于2-8℃的环境下直致离心获取血浆。注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸血和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。贮存2-8℃≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6h1个月尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。收集病人24h内的所有尿液，之后将其加入到10-15ml6N的HCl防腐剂中。贮存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6个月6、试剂盒成分注意试剂盒所提供的试剂足够做96孔单孔检测或48孔双份检测。注意此包被板也可用于检测肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺。数量标志成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，单克隆）。1×6×2.5mlCALA-F标准品A-F肾上腺素:0;1.5;15;50;150ng/ml（0;8;27;82;273;819nmol/L）去甲肾上素:0;5.0;15;50;150;500ng/mL（0;30;89;296;887;2955nmol/L）多巴胺:0;12;35;115;450;2250ng/mL（0;78;228;750;2938;14688nmol/L）即用,内含:肾上腺素-去甲肾上腺素-多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl1×2×2.5mlCONTROL1+2质控品1+2即用,含:肾上腺素-去甲肾上腺素-多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl,具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签.1×250μLENZCONJCONC酶联物浓缩型（100×）内含：碱性磷酸酶标记的抗体，Tris缓冲液，HCl，0.01%的NaN34×EXTRPLATE提取板（微孔板）每板24孔，包被了硼酸亲和凝胶。2×60mlEXTRBUF提取缓冲液粉红色，即用，内含：0.016%的NaN31×1.25mlCOMTLYOCOMT冻干粉内含：儿茶酚-氧位-甲基转移酶（猪肝），NaN31×2mlCOMTADDCOMT添加剂内含：人血浆，稳定剂，0.01%硫柳汞。1×7mlANTISERUMDO多巴胺抗血清紫罗兰色，即用，内含：抗多巴胺抗体（兔），缓冲液，稳定剂。2×1.25mlCOENZ酶联复合物即用，内含：S-腺苷-L-蛋白酸，稳定剂。1×3mlENZBUF酶缓冲液即用，内含：Tris缓冲液，HCl，稳定剂。4×13mlRELEASEBUFRelease缓冲液黄色，即用，内含：0.1M的HCl，指示剂。2×3mlACYLREAG酰化试剂即用，内含：二甲基甲酰胺，乙醇。注意：有毒，高可燃性。2×50mlWASHBURCONC洗涤液浓缩型（10×）内含：Tris缓冲液，HCl，吐温，0.2%的NaN31×9×PNPPSUBSPNPP底物片内含：对硝基苯磷酸（PNPP）1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液即用，内含：二乙醇胺，水，0.05%的NaN31×15mlPNPPSTOPPNPP终止液即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA1×20mlHClHCl即用，内含：0.1M的HCl3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材（但试剂盒不提供）1）移液器（10；10-100；100-1000μL）2）轨道摇床（200-900rpm）3）旋涡混合器4）带储器的8通道移液器5）洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统6）酶标仪7）双蒸水或去离子水8）吸水纸，取样吸头，计时器9）样品稀释用试管。8、手动操作8.1实验前说明注意用于96人份检测色试剂盒成分可分成两次进行。下列所述体积为做48人份时所需要的量。注意试剂盒中的质控品和所有尿液样品在使用前都必须在试管中用0.1M的HCl按1：5的比例进行稀释（例如：20μL尿液+80μL0.1M的HCl）。标准品无需稀释。8.2样品的稀释如果样品中多巴胺浓度高于Z高标准品的应按照下列所述进行稀释：样品待稀释稀释液备注血浆多巴胺浓度高于Z高标准品中多巴胺的浓度双蒸水提取步骤前尿液多巴胺浓度高于Z高标准品中多巴胺的浓度0.1N的HCl提取步骤前8.3样品、标准品和质控品的提取（提取板）1）将标准品、已稀释好的质控品、已稀释好的尿液样品各20μL和500μL血浆样品加入到提取板相应的微孔中。除血浆样品孔外，在所有的微孔中加入500μL双蒸水以消除体积差别。2）在每一微孔中加入1000μL提取缓冲液3）盖板。在轨道摇床（600-900rpm）上18-25℃的环境下提取30min。在提取过程中，液体的表面应该会浸湿粘性金属板，但液体的量不能超过微孔的2/3。液体是否溅出并不会影响实验结果。4）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。5）每孔加入2ml双蒸水6）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。7）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。8）每孔加入150μL提取缓冲液，再向每孔中加入50μL酰化试剂，立即混合均匀。9）在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下提取20min。（无需盖板）10）快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。11）每孔加入2ml双蒸水。12）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。13）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。14）每孔加入300μLRelease缓冲液。15）在轨道摇床（400-500rpm）上18-25℃的环境下振荡30min。（无需盖板）已准备好的样品应当在当天就进行检测。如果不行的话，您可将提取板用粘性金属板盖好，在2-8℃的环境下可存放一夜。8.4冻干粉或浓缩成分的准备稀释成分稀释液比例备注贮存稳定性25ml洗涤液225ml双蒸水1：10充分混合2-8℃4W60μL酶联物6ml洗涤缓冲液（已稀释好）1：101临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生18-25℃5h4PNPP底物片10.7mlPNPP底物液临时配置，仅能使用一次18-25℃5h9、实验步骤（手动操作）9.1COMT酶溶液的准备注意：COMT酶溶液应在使用前直接临时配置在COMT冻干粉中加入1.25ml双蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶联溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40mlCOMT添加剂以充分混合溶解的COMT试剂*，COMT酶溶液Z后的体积为每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋涡混合器混合，但要避免气泡产生，配置好的COMT溶液可在室温下稳定存放1小时。*如果只需要一定量的COMT溶液，则剩余的COMT溶液应立即冻存于-20℃的环境下。COMT溶液可在此环境下稳定存放1-2个月。9.2样品、标准品和质控品的酶化注意如果使用自动置换型移液器，请将取样吸头内的残余液体加回到提取板相应的微孔内。将提取板置于一斜坡位置比较适当。科研用组织匀浆和细胞培养上清可按如下建议处理：细胞培养上清必须根据其培养基及其相应浓度进行处理：根据尿液样品的操作说明（至少提取20ul上清液），未稀释样品的灵敏度大概为1.0ng/ml。如果基质内添加了血清（FCS），血浆（至少提取500ul上清）操作的灵敏度可以是5pg/ml。无高氯酸的组织匀浆可用做匀浆样品，具体信息请咨询IBL汉堡公司。9.3检测尿液和血浆中的多巴氨1在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的COMT酶溶液，轻轻振荡。2在尿液样品、标准品和质控品的微孔中加入90μLRelease缓冲液（血浆样品孔除外）。将已提取好的标准品、质控品和尿液样品分别10μL加入到相应的微孔中。将100ul提取好的血浆样品加入到相应的微孔中。在此加样步骤中，可直接将取样吸头伸入到COMT溶液中。溶液颜色变成粉色，轻轻振荡。3在每一微孔中加入50ul多巴胺抗血清（紫色）。4盖板，在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育120min5移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。吸水纸上拍干以除去残余液体。6在每一微孔中加入100ul临时配置好的酶联物。7盖板，在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育60min8移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。吸水纸上拍干以除去残余液体。9如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。10在每一微孔中加入200ul底物液。11在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育40min12在每一微孔中加入50ulPNPP终止液，轻轻振板以使溶液混合均匀。13加终止液后60min内405nm处读取OD值。（参考波长：620-650nm）10、自动操作步骤10.1实验前说明注意用于96人份检测色试剂盒成分可分成两次进行。下列所述体积为做48人份时所需要的量。注意试剂盒中的质控品和所有尿液样品在使用前都必须在试管中用0.1M的HCl按1：5的比例进行稀释（例如：20μL尿液+80μL0.1M的HCl）。标准品无需稀释。10.2样品的稀释如果样品中多巴胺浓度高于Z高标准品的应按照下列所述进行稀释：样品待稀释稀释液备注血浆多巴胺浓度高于Z高标准品中多巴胺的浓度双蒸水提取步骤前尿液多巴胺浓度高于Z高标准品中多巴胺的浓度0.1N的HCl提取步骤前10.3样品、标准品和质控品的提取（提取板）1）将标准品、已稀释好的质控品、已稀释好的尿液样品各30μL和750μL血浆样品加入到提取板相应的微孔中。除血浆样品孔外，在所有的微孔中加入750μL双蒸水以消除体积差别。2）在每一微孔中加入1000μL提取缓冲液3）盖板。在轨道摇床（600-900rpm）上18-25℃的环境下提取30min。在提取过程中，液体的表面应该会浸湿粘性金属板，但液体的量不能超过微孔的2/3。液体是否溅出并不会影响实验结果。4）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。5）每孔加入2ml双蒸水6）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。7）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。8）每孔加入150μL提取缓冲液，再向每孔中加入50μL酰化试剂，立即混合均匀。9）在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下提取20min。（无需盖板）10）快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。11）每孔加入2ml双蒸水。12）用新的粘性金属板盖板。在轨道摇床上（600-900rpm）18-25℃的环境下振荡5min。液体是否溅出并不会影响实验结果。13）移去粘性金属板，快速弃取孔内反应液，在吸水纸上拍干。14）每孔加入450μLRelease缓冲液。15）在轨道摇床（400-500rpm）上18-25℃的环境下振荡30min。（无需盖板）已准备好的样品应当在当天就进行检测。如果不行的话，您可将提取板用粘性金属板盖好，在2-8℃的环境下可存放一夜。10.4冻干粉或浓缩成分的准备稀释成分稀释液比例备注贮存稳定性25ml洗涤液450ml双蒸水1：10充分混合2-8℃4W150μL酶联物15ml洗涤缓冲液（已稀释好）1：101临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生18-25℃5h4PNPP底物片10.7mlPNPP底物液临时配置，仅能使用一次18-25℃5h11、实验步骤（自动操作）11.1COMT酶溶液的准备注意：COMT酶溶液应在使用前直接临时配置在COMT冻干粉中加入1.25ml双蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶联溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40mlCOMT添加剂以充分混合溶解的COMT试剂*，COMT酶溶液Z后的体积为每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋涡混合器混合，但要避免气泡产生，配置好的COMT溶液可在室温下稳定存放1小时。*如果只需要一定量的COMT溶液，则剩余的COMT溶液应立即冻存于-20℃的环境下。COMT溶液可在此环境下稳定存放1-2个月。11.2实验步骤在使用自动方法做实验时，我们建议按1：10的比例预先稀释提取好的标准品、质控品和尿液样品（如果是手动操作则用Release缓冲液进行稀释）。如果稀释了，第二个步骤可简化为：将已提取好的血浆样品、已提取好的标准品（按1：10的比例预先稀释）、质控品和尿液样品各100μL加入到微孔中。在进行预稀释时，应当考虑到自动操作的死容积。1）在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的COMT酶溶液，轻轻振荡。2）在尿液样品、标准品和质控品的微孔中加入90μLRelease缓冲液（血浆样品孔除外）。将已提取好的标准品、质控品和尿液样品分别10μL加入到相应的微孔中。在此加样步骤中，可直接将取样吸头伸入到COMT溶液中。溶液颜色变成粉色，轻轻振荡。3）每孔中加入50μL多巴胺抗血清。4）盖板。在振荡器（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育120min5）弃取孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。6）每孔加入100μL酶联物7）盖板。在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育60min8）弃取孔内反应液，用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。9）加底物液和终止液时，其时间间隔应相同10）每孔加入200μL底物液11）在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育40min。如果自动操作时的温度超过25℃时，则应相应的将温育时间缩短至30min。12）每孔加入50μLPNPP终止液以终止底物反应，轻轻振荡包被板以充分混合试剂成分。13）加终止液后60min之内405nm处读取OD值。（参考波长：620-650nm）12、期望值实验结果不能当作判断任何ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%），建议每个实验室读确定自己的正常值范围：尿液血浆μg/dnmol/dpg/mLnmol/L多巴胺＜600＜3917＜100＜0.65本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口工业区太子路18号海景广场11C研发基地：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA Kit说明书

  人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA Kit说明书[详细]

  2014-09-02 00:00

  实验操作

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• 5-羟色胺ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer45-羟色胺ELISAKit使用说明书（德国IBL:RE59121）1、应用范围此试剂盒可用于人血清、血浆、血小板和尿液中五羟色胺的体外定量检测。进一步的研究表明：此试剂盒还可用于组织匀浆和细胞培养上清液的研究。2、前言说明五羟色胺是色氨酸代谢的中间产物，它主要存在于肠嗜铬细胞、血清素激活的神经元和血小板中，它已被确定为是神经系统的一种神经递质。循环血液中的五羟色胺几乎都集中于血小板内。循环五羟色胺浓度的变化可反映出人体的一些病理变化，这些病理变化包括：慢性肌紧张性头痛、精神分裂症、高血压、舞蹈症、杜氏肌肉萎缩症和早期急性阑尾炎。血清五羟色胺的检测对类癌综合征的检测具有重要临床意义。人们预计：在不久的将来，人们对血小板内五羟色胺的研究兴趣（包括五羟胺的吸收及释放动力学研究）应该会不断增长。3、实验原理样品准备（将五羟色胺转变为N-乙酰五羟色胺）是样品的稀释的一部分，将每一份样品分别于酰化试剂一起温育就可以得到酰化的五羟色胺。此实验采用的是竞争性ELISA的原理，生物素标记的和非生物素标记的抗原竞争性结合到一定数量的抗体结合位点上。Z后，结合到抗体上的生物素标记抗原的量于样品中被分析物的浓度成反比。当反应系统达到平衡后，洗板除去未结合的生物素标记抗原，用抗生物素碱性磷酸酶做标记、对硝基苯磷酸做底物来检测结合到抗体上的生物素标记抗原的量。用已知标准品做一条标准曲线，将未知样品的酶活性在标准曲线上进行定标就可以得到未知样品中五羟色胺的浓度。4、贮存与稳定性试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。打开了的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。5、样品的采集与储存注意有些食物会含有一定量的五羟色胺，另外，有些药物也会刺激五羟色胺的释放，从而导致五羟色胺的浓度升高。病人应当禁食富含五羟色胺的食物，如：阿司匹林、促肾上腺皮质激素、MAOYZ剂、phenazetin、儿茶酚氨、利血平和烟碱。血清注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸血和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。贮存18-25℃2-8℃≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性2小时6小时3个月尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。收集病人24h内的所有尿液，之后将其加入到10-15ml6N的HCl防腐剂中。确定用于结果结算的总体积。使用前请将所有样品混合并离心。贮存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融。稳定性6个月血浆、血小板98%以上的循环五羟色胺都位于血小板内，在血液凝集时就可以释放出来。用静脉穿刺的方法将全血收集到含EDTA或柠檬酸的塑料试管中（如10mlMonovetteNC试管中加入1ml柠檬酸溶液）。室温下，将全血样品以200×g的速率离心10分钟得到富含血小板的血浆（PRP）。将PRP-上清转移到另一试管中。为了获得血小板乳糜微粒，我们将200ulPRP（350000～500000个血小板/ul）加入到800ul生理盐水中，之后4℃下以4500×g的速率离心10分钟（或4℃下10000×g的速率离心2分钟）。离心后弃取上清。在血小板乳糜微粒中加入200ul双蒸水，之后样品就可以在-20℃以下的环境下冻存数周了。将冻融的样品在室温下以1000×g的速率离心2分钟。整个实验需要使用20ul上清液（见酰化）。如果您想测无血小板血浆（PFP）中五羟色胺的浓度，我们可以将PRP在4℃以4500×g的速率离心10分钟（或4℃下10000×g的速率离心2分钟）就可以获得无血小板血浆（PFP）。游离五羟色胺的ELISA实验要使用50ul上清液（见酰化）。注意：PRP中五羟色胺的直接检测实验表明：大约10%的PRP样品可以检测到不可预知的高浓度五羟色胺（结果用GX液相层析和流氏细胞术获得）。为了避免这种差异性，我们建议您即检测血小板中五羟色胺，也检测无血小板血浆中的五羟色胺。无血小板血浆血小板微粒（从血浆中分离得到）避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。储存≤-20℃≤-20℃≤-80℃稳定性2周4周1年组织匀浆和细胞培养上清使用组织匀浆和细胞培养上清作样品，一般无特殊注意事项注意：细胞培养基可能含有一定量的五羟色胺！储存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融。稳定性6个月6、试剂盒成分注意试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分。数量标记成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清。1×5mlANTISERUM组胺抗血清，蓝色，即用，内含：兔抗血清、Tris缓冲液和0.01%的NaN3。1×5mlBIOTIN五羟色胺生物素，黄色，即用，内含0.1%的NaN3。1×0.2mlENZCONJCONC酶联物，10倍浓缩，内含碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体、Tris缓冲液、HCl和0.01%的NaN3。1×7×0.5mlCALA-G标准品A-G，0;0.08;0.24;0.73;2.2;6.6;19.8ng/ml,0;0.45;1.4;4.1;12.5;37.4;112.3nmol/l,即用，内含酰化的五羟色胺、磷酸盐缓冲液和0.1%的NaN3。1×2×0.5mlCONTROL1+2LYO质控品1+2，冻干，内含人血清和0.02%的NaN3。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。1×3mlACYLREAG酰化试剂内含乙酸酐和丙酮，即用1×50mlASSAYBUFCONC检测缓冲液，10倍浓缩，内含磷酸缓冲液、BSA和1%的NaN3。1×50mlWASHBUFCONC洗涤液，20倍浓缩，内含磷酸缓冲液、吐温和0.1%的硫柳汞。1×9×PNPPSUBSPNPP底物片，密封于铝铂金属袋内，内含对硝基苯酚磷酸盐。1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液，即用，内含二乙醇胺、水和0.05%的NaN3。1×15mlPNPPSTOPPNPP终止液，即用，内含1M的NaOH和0.25M的EDTA。3×FOIL粘性金属板7、实验所需器材但试剂盒不提供1）移液器，体积：20;25;50;100;1000ul2）玻璃试管（12×75mm）3）试管架4）振荡器（500rpm）5）旋涡混合器6）水浴箱，37℃7）带储器的8道移液器8）洗涤瓶，自动或半自动洗板机9）离心机：≥1500×g10）可在405nm处读数的酶标仪（参考波长：600-650nm）11）双蒸水或去离子水12）吸水纸、取样吸头和计时器8、实验前的准备说明供手动和自动操作参考用注意用于96孔检测的试剂成分可分成3次用。下述体积是使用4条（32孔）时所需要的体积。如果客户想将标准品从7支减为6支的话，我们可以省掉标准品G。则检测范围相应的减少到155ug/l（血浆）或706ug/l（血清，尿液，组织匀浆和细胞培养上清）。血清、尿液、组织匀浆和细胞培养上清样品可以选择简短操作步骤进行，只需温育3.5个小时（但血浆样品不能采用简短操作步骤进行），以上样品也可以选择可选操作步骤进行检测（将样品温育一整夜），血浆样品必须按照温育一整夜进行检测。8.1冻干或浓缩成分的准备稀释/溶解成分加入稀释剂比例备注储存稳定性15ml检测缓冲液150ml双蒸水1：10出现黄褐色并不会影响实验结果2-8℃2周15ml洗涤液300ml双蒸水1：202-8℃4周质控品0.5ml双蒸水静置15min,混合时无泡沫≤-20℃有效期内稳定60ul酶联物6ml稀释的检测缓冲液1:101临时配置,只能使用一次18-25℃2小时3PNPP底物片8mlPNPP底物缓冲液临时配置，只能使用一次18-25℃5小时8.2样品的稀释样品五羟色胺浓度高于Z高标准品的必须用检测缓冲液进行进一步的稀释。8.3样品和质控品的酰化样品A：血清，尿液，血小板提取物，组织匀浆和质控品样品B：无血小板血浆注意请不要酰化标准品，标准品已经酰化了。样品准备可使血清、尿液、血小板乳糜微粒、组织匀浆和细胞培养上清被稀释107倍，而血浆样品则被稀释23.5倍。结果计算时必须将此稀释因子考虑进去。8.3.1样品A：血清、尿液、血小板提取物、组织匀浆和质控品1将质控品和样品A分别20ul加入到玻璃试管中。2在每一试管中加入100ul稀释好的检测缓冲液，旋涡混合。3在每一试管中加入25ul酰化试剂1（3%），加入后立即旋涡混合。4将试管盖好，将试管放到37℃水浴箱内温育15分钟。5在每一试管中加入2ml已稀释好的检测缓冲液，旋涡混合61500×g下离心10分钟注意准备好的样品必须立即检测。其上清可在18-25℃下稳定存放1小时。8.3.2样品B：无血小板血浆1将50ul样品B加入到玻璃试管中。2在每一试管中加入100ul稀释好的检测缓冲液，旋涡混合。3在每一试管中加入25ul酰化试剂，加入后立即旋涡混合。4将试管盖好，将试管放到37℃水浴箱内温育15分钟。5在每一试管中加入1ml已稀释好的检测缓冲液，旋涡混合61500×g下离心10分钟注意准备好的样品必须立即检测。其上清可在18-25℃下稳定存放1小时。9、实验步骤9.1简短操作步骤（仅供样品A使用，不能应用于血浆）1将标准品、酰化好的质控品和酰化好的样品各50ul加入到相应的微孔中。2在每一微孔中加入50ul五羟色胺生物素。3在每一微孔中加入50ul五羟色胺抗血清。4盖板，室温（18-25℃）下振荡（500rpm）温育90min。5移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板3次,吸水纸上拍干以除去残余液体。6在每一微孔中加入150ul临时准备好的酶联物。7盖板，室温（18-25℃）下振荡（500rpm）温育60min。8移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板3次,吸水纸上拍干以除去残余液体。9如果有条件的话，可以用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液时，每孔间的时间间隔应当相同。使用主动置换型移液器并避免气泡产生。10在每一微孔中加入200ul临时配置好的PNPP底物液。11室温（18-25℃）下振荡（500rpm）温育60min。12在每一微孔中加入50ulPNPP终止液以终止底物反应，轻轻振板以使溶液混合均匀。13加终止液后60min内405nm处读取OD值。9.2可选操作步骤（温育一整夜，样品A和样品B均适用）9.2.1**天1将标准品、酰化好的质控品和样品分别50ul加入到相应的微孔中。2在每一微孔中加入50ul五羟色胺生物素。3在每一微孔中加入50ul五羟色胺抗血清。4盖板，轻轻振板，2-8℃下温育16-20小时（一整夜）。9.2.2第二天1移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干以除去参与液体。2在每一微孔中加入150ul临时配置好的酶联物。3盖板，室温振荡器上（500rpm）温育60分钟。4移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250ul稀释好的洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干以除去残余液体。5如果有条件的话，可以用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液时，每孔间的时间间隔应当相同。使用主动置换型移液器并避免气泡产生。6在每一微孔中加入200ul临时配置好的PNPP底物液。7室温振荡器上（500rpm）温育30分钟。8在每一微孔中加入50ulPNPP终止液，振板以混合孔内成分。9加终止液后60min内405nm处读取OD值。（参考波长：600-650nm）10、结果计算将所有标准品、质控品和样品的OD值减去空白孔的OD值。在半对数坐标纸上，以标准品的OD值（Y轴，线性）对其浓度（X轴，对数）绘制出一条标准曲线，或采用自动计算的方法绘制出一条标准曲线。用Cubicspline、4参数或双对数可以得到较好的曲线图。在计算标准曲线时，应当应用到每一个标准品数值（两个数值中，明显逸出的数值应当被忽略掉，采用更加合理的一个数值用）。样品的浓度可以从标准曲线上定量得到。由于样品被稀释了，所以Z终样品结果必须乘以相应的稀释因子，单位为ng/ml。血清、尿液、血小板、组织匀浆、细胞培养上清、质控品：×107无血小板血浆：×23.5进行了进一步稀释的样品结果应当乘以相应的稀释因子。实验必须满足如下标准才符合要求：50%OD/Odmax（）：0.60-1.00ng/ml（平均0.8ng/ml）△OD标准品A-标准品G≥0.80OD转换系数：五羟色胺（ng/ml）×5.67=nmol/l如果样品中五羟色胺浓度高于Z高标准品，则此样品必须按照实验前准备说明进行稀释并重新检测。11、期望值实验结果不能当作任何ZL结果的**原因，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（97.5%）：样品数量单位平均值建议每个实验室读确定自己的正常值范围范围血清99ng/ml88.630-200无血小板血浆35ng/ml3.71.8-7.5血小板35ng/109血小板490217-86124小时尿液49μg/d83.1≤200本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口太子路18号海景广场11C研发ZX：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 去甲变肾上腺素ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4去甲变肾上腺素ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59171）前言说明儿茶酚胺类肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺都是在肾上腺髓质、交感神经系统和脑中合成的。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。因为儿茶酚胺类物质以及它们的代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素在许多疾病中的分泌都会增加，因此对它们进行检测可用于这些疾病的诊断。在这一实验中，诊断和神经系统的续发性肿瘤都具有特殊的重要性。这一技术主要用于嗜铬细胞瘤、神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断检测。10%的嗜铬细胞瘤表现为恶性增长。而在良性肿瘤中可发现儿茶酚胺类物质及它们的代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素都会增加。1、应用范围此酶免试剂盒可用于人体尿液中去甲变肾上腺素的体外定量检测,可手动操作也可自动操作.2、实验原理此ELISA试剂盒利用的是竞争法原理，生物素标记抗原和未用生物素标记抗原竞争结合一定量的抗体结合位点。结合到抗体上生物素标记抗原的量与样品中被分析物的浓度成反比。反应系统达到平衡后，未结合的生物素标记的抗原用洗涤液洗去。以抗生物素碱性磷酸酶作为标记物，以PNPP（对硝基苯酚磷酸盐）作为底物液来检测结合到抗体上的生物素抗原的量。将未知物的酶反应活性和已知标准品的反应曲线相比较，可以得到未知物的量。3、意事项和预防措施1）此试剂盒仅用于体外诊断和专业人士使用。2）在检测开始之前，仔细和完整的阅读说明书，使用试剂盒提供的包装插件的有效版本，确保所有的程序都清楚。寻求更多信息（比如：临床背景，检测操作，自动化操作说明，可选择的软件，文献等等），请查看IBL公司主页。3）如果试剂盒有破坏的请与IBL公司联系或是提交你的申请，但自您拿到试剂盒后Z迟不超过一个星期。检测时请不要使用已被损害的试剂，以确保自身安全。4）按照批号和有效期，不混合使用不同批号的试剂，也不要使用过期的试剂。5）遵守好的实验准则和安全指南。穿实验服，带橡皮手套，有必要时请戴护目镜。6）此试剂盒中含有会伤害眼睛和皮肤的有害试剂。请阅读材料来源和标签获取详细信息。产品的材料安全数据单能够从IBL公司主页上下载，也可直接咨询IBL公司获取。7）根据国家生物有害物质及安全条例，所有化学药品和准备或使用过的试剂都应当做有害物质进行处理。8）不要接触终止液，以免造成皮肤损伤或着烧。4、存与稳定性试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。5、样品的采集与贮存注意人体内的儿茶酚氨和间甲肾上腺素的释放会受到一些食品和药物的影响。因此在样品采集前72小时内病人应禁止服用下列食物和药品：维生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMTYZ剂，还有降血压类药物。尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。将病人24h内的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml6N的HCl防腐剂的试剂瓶中。贮存≤-20℃避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。稳定性6个月6、试剂盒成分注意试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测或间甲肾上腺素和去甲变肾上腺素共同检测时所需的试剂成分数量标记成分1×50mLASSAYBUFCONC检测缓冲液，10倍浓缩，内含磷酸缓冲液，BSA（牛血清白蛋白），1%的NaN31×2.25mLACYLREAG酰化试剂，即用，内含二甲基甲酰胺1×10mLINDICATIORBUF指示剂缓冲液，紫色，即用，内含Tris缓冲液和苯酚红（pH小于7.5时颜色会发生变化）。2×50×HYDRTUB水解试管，可处理的聚苯乙烯试管1×20mLHClHCl，即用，内含0.1MHCl1×12×8MTP包被板，可拆分，包被有抗兔IgG（羊，多克隆）1×7×0.35mLCALA-G标准品，A-G含去甲变肾上腺素和0.1M的HCl0;77;192;480;1200;3000;7500μmol/L0;0.42;1.05;2.63;6.56;16.4;41.0μmol/L1×2×0.5mLCONTROL1+2质控1+2，即用，浓度及允许范围请见标签3×BIOTINLYO去甲变肾上腺素生物素（冻干品），内含去变甲状腺生物素,Tris缓冲液,<0.1%NaN3（可再生）1×7mLANTISERUM去甲变肾上腺素抗血清，内含含抗血清（兔）,磷酸缓冲液,0.1%NaN31×250μlENZCONJCONC酶联物（100×），含抗生物素抗体,并联结到碱性磷酸酶上,Tris缓冲液,0.01%NaN39×PNPPSUBSPNPP底物片，含PNPP1×27mLPNPPBUFPNPP底物缓冲液，含二乙醇胺、水和0.05%NaN31×15mLPNPPSTOPPNPP终止液，即用，内含1M的NaOH和0.25M的EDTA。1×50mLWASHBUFCONC洗涤液（10×），含Tris缓冲液,HCL,吐温,0.2%NaN33×FOIL粘性金属板7、实验所需器材（但试剂盒不提供）1）移液器，体积：10;50;100;1000ul2）玻璃试管（12×75mm）3）振荡器（200-900rpm）4）旋涡混合器5）水浴箱，90℃6）带试剂储器的8孔移液器7）洗涤瓶，自动或半自动包被板洗涤系统。8）可在405nm处读数的酶标仪（参考波长：600-650nm）9）双蒸水或去离子水10）吸水纸，取样吸头和计时器8、注意事项1）样品的不合理处理及实验操作的任何改动都将影响实验结果。取样体积、温育时间、欲处理步骤都必须严格按说明进行。只能使用标准移液器和标准设备。2）一旦实验开始，所有的步骤都必须完整的进行下去，切勿中断。确保所有试剂、材料和设备都已准备好。把所有试剂和样品都平衡至18-25℃，在使用前，轻轻摇动液体试剂和样品，试剂混合过程时要避免产生气泡。3）请勿接触试剂、移液器、微孔/试管。加试剂和样本时，请使用新的吸头，以避免交叉污染。不用的试剂应用盖子盖好，以免重复使用。4）我们建议对样品进行双份检测，以便能纠正潜在的滴定错误5）用定标仪对反应板进行校准。6）温育时间会影响实验结果。微孔加样的顺序和时间都必须一致。建议使用8孔移液器加样。7）包被板的清洗很重要，清洗不合理将会导致错误的实验结果。建议使用多孔移液器或自动包被板清洗系统进行清洗。温育期间避免微孔干燥，清洗和吸液时不要碰到包被板微孔。清洗时，确保所有的微孔都充满蒸馏水，并且无残留物。8）湿度会对包被孔产生影响，所以包被板未平衡到室温时不要打开包装。不使用的微孔应立即装入含干燥剂的包装袋中。9、实验前的准备说明手动或自动操作参考说明注意这种96人份的试剂盒可分成3份独立进行，以下体积为4条（32人份）一次检测所需体积。如果想把标准品从7份减到6份，可以把标准品G弃取。而允许范围相应的减少到3000μg/l。如果检测是用了很多板条，则体积应相应改变。9.1冻干成分或浓缩成分的准备特别注意如果你使用甲状腺ELISA试剂盒来同时检测间甲肾上腺素和去甲变肾上腺素，请勿混合间甲肾上腺素和去甲变肾上腺素酶联物。稀释/溶解成分稀释比例备注贮存稳定性15mL检测用缓冲液150mL双蒸水1:102-8°C2周15mL洗涤液150mL双蒸水1:102-8°C4周1瓶去甲变肾上腺素生物素2mL稀释的检测缓冲液临时配制,仅使用一次,静置5min,混合时避免气泡.≤-20°C2个月60μl酶联物6mL稀释的检测缓冲液1:101临时配制,仅使用一次18-25°C5小时3PNPP底物片8mLPNPP底物缓冲液临时配制,仅使用一次18-25°C5小时9.2总去甲变肾上腺素检测用的尿液样品、标准品和质控品的水解（在水解试管中）注意水解这一步骤在总去甲变肾上腺素和总间甲肾上腺素的检测中是必备的。而在游离去甲变肾上腺素和变肾上腺素的检测中则无须水解。样品被怀疑高于Z高标准的样品必须在水解步骤前用0.1MHCL进行稀释。9.2.1水解试管中样品的准备1）将标准品、质控品和尿液样品各10μL加入到相应的水解试管中2）在每一试管中加入40μL0.1M的HCl。3）盖好试管，90°C下水解1h（用温度计测温度）。之后平衡至室温，旋涡混合。4）在每一试管中加入100μL指示剂缓冲液，旋涡混合。5）在每一试管中加入20μL的酰化作用试剂，加入指示剂后立即震荡，确保加入的酰化试剂和试管内物质完全混合。6）盖好试管，室温下温育15min。7）在每一试管中加入1mL稀释的检测缓冲液。10、实验步骤手动和自动操作1）将酰化标准品、酰化质控品和酰化病人样品分别50μL加入到相应的微孔中。2）在每一微孔中加入50μL去甲变肾上腺素生物素。3）在每一微孔中加入50μL去甲变肾上腺素抗血清。4）盖板，小心振荡包被板。振荡器（500rpm）上室温温育1h（500rpm）5）移去粘性金属板。弃取孔内反应液，每孔用250μL洗涤液洗板6次（洗板机洗）,（人工清洗则洗3次即可），吸水纸上拍干。6）在每一微孔中加入150μL临时配制的酶联物。7）盖上一新的粘性金属板。振荡器（500rpm）上室温（18-25℃）温育30min。8）移去粘性金属板。弃取孔内反应液，每孔用250μL洗涤液洗板6次（洗板机洗）,（人工清洗则洗3次即可），吸水纸上拍干。9）如果有条件的话，使用8孔微量移液器加底物液和终止液时。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用自动置换型移液器并避免气泡产生。10）在每一微孔中加入100μL临时配制的PNPP底物液。11）振荡器（500rpm）上室温（18-25℃）温育20min。12）在每一微孔中加入100μLPNPP终止液以终止底物反应，轻轻振板以混合溶液。13）加入终止液后60min之内在405nm处测OD值（参考波长：600-650nm）11、结果计算在半对数坐标纸上或用自动的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一条标准曲线。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须删除掉，应使用更加合理的单值）。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了，就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于Z高标准，则应根据实验前准备说明所述对样品进行稀释，并重新检测。计算每一尿液样品的24小时的排泄量：μg/24h=μg/L×L/24h转换：1ng/mL=1μmol/L去甲变肾上腺素（μg/L）×5.46×10-3=μmol/L12、期望值实验结果不能当作判断任何ZL结果的**因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%）：平均值：230ug/d范围：35-445ug/d（95%）建议每个实验室都确定自己实验室的正常值范围。本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口太子路18号海景广场11C研发ZX：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA） ELISA Kit使用说明书

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer45-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）ELISAKit使用说明书（德国IBL：RE59131）1、应用范围此ELISA试剂盒可用于人尿液中5-HIAA的体外定量检测。2、前言原发性类癌瘤通常都源自中肠的肠嗜铬细胞，并且大多情况都位于回肠末端中。类癌瘤通常都会分泌各种各样的吲哚，此类肿瘤的一般都明显的表现为尿液5-HIAA（五羟色胺的Z终代谢产物）的分泌量升高。5-HIAA传统的检测方法是通过亚硝基萘酚的重氮化作用产生紫色。然而，人们已证明很多存在于尿液中的其它物质会干扰此反应而出现假阳性结果。人们也尝试着通过将离子交换层析和荧光分析相结合的方法来克服此问题。但这些方法灵敏度低并且耗费时间。Z近，有人也介绍使用下列方法来检测5-HIAA：紫外区域5-HIAA的GX液相层析与荧光分析（或电化学分析）相结合的方法。因为尿液中存在着各种各样的干扰复合物，所以这两种方法都要求进行溶剂提取。而5-HIAA的酶联免疫检测是用于尿液中类肿瘤综合征标记物定量检测的一种全新的、简单的方法。3、实验原理此ELISA试剂盒利用的是竞争法原理，生物素标记抗原和未用生物素标记抗原竞争结合一定量的抗体结合位点。结合到抗体上生物素标记抗原的量与样品中被分析物的浓度成反比。反应系统达到平衡后，未结合的生物素标记的抗原用洗涤液洗去。结合了生物素标记抗原的抗体的量的测定是以抗生物素碱性磷酸酶作为标记物，以PNPP（对硝基苯酚磷酸盐）作为底物液。将未知物的酶反应活性和已知标准品的反应曲线相比较，可以得到未知物的量。4、试剂盒成分数量标志成分1×12×8MTP包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，单克隆）。1×5mlANTISERUM5-HIAA抗血清蓝色，即用，内含：抗血清（兔），磷酸缓冲液，稳定剂。1×5mlBIOTIN5-HIAA生物素即用，蓝色，内含：磷酸缓冲液，稳定剂。1×0.2mLENZCONJCONC酶联物浓缩型（100×）内含：碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体（羊），Tris缓冲液，稳定剂1×7×0.5mlCALA-G标准品A-G0;0.4;1.0;2.75;7.5;20;55mg/L0;2.1;5.25;14.4;39.4;105;288μmol/L即用,内含:5-HIAA（甲基化）,稳定剂。1×2×0.5mlCONTROL1+2LYO质控品1+2，冻干粉，内含：人尿液（正常与非正常人的尿液），具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签.1×2mlMETHYLRAGE甲基化试剂，黄色，即用，内含二氯甲烷1x1mLHCLHCl，即用，0.1M的HCl1x50mlASSAUBUFCONC检测缓冲液，浓缩（10x）内含：磷酸缓冲液，BSA，稳定剂1x4mlDILREAG稀释液，即用，内含：N,N-二甲基甲酰氨1x50mlWAHSBUFCONC洗涤液，浓缩（20x）内含：磷酸缓冲液，吐温，稳定剂1×9PNPPSUBSPNPP底物片，内含：对硝基苯磷酸（PNPP）1×27mlPNPPBUFPNPP底物缓冲液，即用，内含：二乙醇胺，水，1×15mlPNPPSTOPPNPP终止液，即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA3×FOIL粘性金属板5、实验所需器材（但试剂盒不提供）1）移液器（20；25；50；100；1000μL）2）玻璃检测用试管（12×75mm）3）旋涡混合器4）带储器的8通道移液器5）洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统6）酶标仪7）双蒸水或去离子水8）通风橱9）吸水纸，取样吸头，计时器6、实验前的准备说明供手动操作和自动操作用：注意此96人份的检测试剂可分成3次独立的实验进行。下列体积为用四条包被板（32人份）进行一次检测所需要的试剂的量。如果客户想将标准品的量由7个减为6个，您可去掉标准品G。则实验结果的报告范围相应的减少到3000μg/L6.1冻干粉或浓缩成分的制备稀释成分稀释液比例备注贮存稳定性15ml检测缓冲液150ml双蒸水1；10充分混合2-8℃2周炙控品0.5ml0.1M的HCl静置15min，混合时避免气泡≤-20℃8周15ml洗涤液300ml双蒸水1：20加热至37℃以溶解所有的晶体（如果有必要），充分溶解。2-8℃4周60μL酶联物60ml检测缓冲液（已稀释好）1：101临时配置，仅能使用一次，混合时避免气泡产生18-25℃30min3PNPP底物片8mlPNPP底物液缓冲液临时配置，仅能使用一次,混合时必免气泡产生18-25℃10min6.2样品的稀释样品中5-HIAA脓渡高于Z高标准品的应在甲基化后用检测缓冲液进行进一步的稀释。7、**天7.1质控品和病人样品的稀释（除标准外）样品的准备将导致255倍的稀释。但这已将此考虑到标准品浓渡中。注意不要甲基化标准品，它已经被甲基化了。1）将质控品和样品分别20μL加入到相应的玻璃试管中。2）完成次操作步骤后，请在通风橱内继续操作。3）在每一支试管中加入50μL稀释液。旋涡混合器上混合。4）在每一试管中加入25μL甲基化试剂。加入试剂后立即混合试管内溶液。注意：反应混合物的黄颜色应当持续稳定，如果颜色迅速消失说明样品中酸的量过大。在这种情况下在向试管中加20μL甲基化试剂。5）盖好试管，室温（18-25℃）下温育20min6）在每一试管中加入5ml已稀释好的检测缓冲液。用塞子盖好是试管并旋转几次。手动或用混合器上下混合Z少五次，以便液体能充分混合。7）完成此步骤后就可以不要才通风橱下操作了。8）吸取50μL上清液，立即进行ELISA实验。上清液室温下可稳定存放1h。8.2ELISA操作1）将标准品、甲基化质控品和甲基化病人样品分别50μL加入到相应的微孔。2）在每一微孔中加入50μL5-HIAA生物素。3）在每一微孔中加入50μL5-HIAA抗血清。4）盖板，小心振动包被板。2-8℃下温育一夜（16-20h）。8、第二天1）移去金属板，弃取孔内反应液，用250μL洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干。2）每孔加入150μL临时配置好的酶联物3）用一新的粘性金属盖板。室温环境（18-25℃）下，在轨道摇床（500rpm）上温育120min.4）在温育结属前大约10min的样子时，向微孔中加入酶联物。5）移去金属板，弃去孔内反应液，用250μL已稀释好的洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干。6）在加入底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8道移液器进行加液。加底物液和终止液必须按相同的时间间隔进行，避免气泡产生。7）在每一微孔中加入200μL临时配置好的PNPP底物液。8）室温（18-25℃）环境下，在轨道摇床上温育60min。9）在每一微孔中加入50μLPNPP终止液以终止反应。轻轻摇动包被板以混合各种成分。10）加入终止液后60min之内在405nm处测OD值（参考波长：600-650nm）。9、参考值实验结果不能当作进行YL诊断的**因素，YL诊断还与其它临床观察和其它诊断测试相关。以下为明显健康人群5-HIAA的正常值：（97.5%）我们建议每个实验室都设定自己的正常值范围。尿液mg/24hμmol/天5-HIAA6～1031.5～52.5本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司办公地址：深圳市蛇口工业区太子路18号海景广场11C研发基地：深圳市蛇口沿山路10号6层电话：0755-26814430,26680196邮政编码：518067免费电话：800-8306296传真：0755-26814431[详细]

  2018-11-14 10:00

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• 人（Human）白介素1α（IL-1α）ELISA Kit使用说明书

  人原钙黏素1（PCDH1）ELISAKit人白介素2受体（IL-2R）ELISAKit人皮肤T细胞虏获趋化因子（CTACK/CCL27）ELISAKit人胸肾表达趋化因子（BRAK/CXCL14）ELISAKit人B-淋巴细胞趋化因子1（BLC-1/CXCL13）ELISAKit人结缔组织活化肽Ⅲ（CTAPⅢ）ELISAKit人巨噬细胞集落刺激因子受体（M-CSFR）ELISAKit人免疫球蛋白AFc段受体Ⅰ（FcαRⅠ/CD89）ELISAKit人免疫球蛋白EFc段受体Ⅱ（FcεRⅡ/CD23）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅲ（FcγRⅢ/CD16）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅱ（FcγRⅡ/CD32）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅰ（FcγRⅠ/CD64）ELISAKitGFc段受体Ⅰ（FcγRⅠ/CD64）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅲ（FcγRⅢ/CD16）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅱ（FcγRⅡ/CD32）ELISAKit人免疫球蛋白GFc段受体Ⅰ（FcγRⅠ/CD64）ELISAKit人粒细胞趋化蛋白-2（GCP-2/CXCL6）ELISAKit人ω干扰素（IFN-ω）ELISAKit人糖基化依赖的细胞黏附分子（GlyCAM-1）ELISAKit人干扰素调节因子（IRF）ELISAKit人淋巴毒素β（LTB）ELISAKit人淋巴毒素α（LTA）ELISAKit人CC趋化因子受体1（CCR1）ELISAKit人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISAKit人肺部活化调节趋化因子（PARC/CCL18）ELISAKit人黏膜地址素细胞黏附分子（MAdCAM-1）ELISAKit人β干扰素（IFN-β/IFNB）ELISAKit人可溶性CD38（sCD38）ELISAKit人可溶性CD21（CR2/sCD21）ELISAKit人可溶性瘦素受体（sLR）ELISAKit人Toll样受体9（TLR-9/CD289）ELISAkit人转化生长因子β2（TGFβ2）ELISAKit人单核细胞趋化蛋白4（MCP-4/CCL13）ELISAKit人白三烯D4（LTD4）ELISAKit人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白（N-Cad）ELISAKit人肝素结合性表皮生长因子（HB-EGF）ELISAKit人红细胞刺激因子（ESF）ELISAKit人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子（TRANCE）ELISAKit人生长激素释放因子（GH-RF）ELISAKit人巨噬细胞趋化因子（MCF）ELISAKit人α/β干扰素受体（IFN-α/βR）ELISAKit人B细胞生长因子（BCGF）ELISAKit人B细胞分化因子（BCDF）ELISAKit人上皮细胞粘附分子（Ep-CAM/CD362）ELISAKit人可溶性粘附分子（Sam）ELISAKit人巨噬细胞替代激活相关化学因子1（AmAC-1）ELISAKit人可溶性血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2/sFLK-1）ELISAKit人胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）ELISAKit人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit人多效生长因子（PTN）ELISAKit人可溶性CD28（sCD28）ELISAKit人淋巴细胞因子ELISAKit人胸腺活化调节趋化因子（TARC/CCL17）ELISAKit人神经细胞粘附分子配体1（NCAM-L1/CD171）ELISAKit人神经保护因子（CVNPF）ELISAKit人可溶性肿瘤坏死因子α受体（sTNFαR）ELISAKit人可溶性细胞因子受体（sCKR）ELISAKit人可溶性凋亡相关因子配体（sFASL）ELISAKit人细胞凋亡YZ因子（IAP）ELISAKit人集落刺激因子（CSF）ELISAKit人γ干扰素诱导单核细胞因子（MIGF/CXCL9）ELISAKit人干扰素诱导T细胞趋化因子（ITAC/CXCL11）ELISAKit人CD14分子（CDl4）ELISAKit人凋亡诱导因子（AIF）ELISAKit人白细胞共同抗原（LCA/CD45）ELISAKit人CD4分子（CD4）ELISAKit人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白（P-cad）ELISAKit人角化细胞生长因子（KGF）ELISAKit人血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）ELISAKit人CXC趋化因子配体16（CXCL16）ELISAKit人CXC趋化因子受体3（CXCR3）ELISAKit人γ干扰素诱导蛋白16/p16（IFI16/p16）ELISAKit人基质细胞衍生因子1a（SDF-1a/CXCL12）ELISAKit人淋巴细胞趋化因子（Lptn/LTN/XCL1）ELISAKit人α干扰素（IFN-α）ELISAKit人可溶性CD86（B7-2/sCD86）ELISAKit人白介素27（IL-27）ELISAKit人白介素23（IL-23）ELISAKit人巨噬细胞移动YZ因子（MIF）ELISAKit人组织因子途径YZ物（TFPI）ELISAKit人干扰素诱导蛋白10（IP-10/CXCL10）ELISAKit人白介素1（IL-1）ELISAKit人白介素17（IL-17）ELISAKit人白介素1β（IL-1β）ELISAKit人表皮生长因子（EGF）ELISAKit人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）ELISAKit人巨噬细胞炎性蛋白5（MIP-5）ELISAKit人可溶性E选择素（sE-selectin）ELISAKit人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）ELISAKit人细胞间粘附分子2（ICAM-2/CD102）ELISAKit人细胞间粘附分子3（ICAM-3/CD50）ELISAKit人结缔组织生长因子（CTGF）ELISAKit人白介素18（IL-18）ELISAKit人粘膜相关上皮趋化因子（MEC/CCL28）ELISAKit人粘膜相关上皮趋化因子（MEC/CCL28）ELISAKit人B细胞活化因子受体（BAFF-R）ELISAKit人血管内皮细胞生长因子受体3（VEGFR-3/Flt-4）ELISAKit人血管内皮细胞生长因子受体1（VEGFR-1/Flt1）ELISAKit人血管内皮细胞生长因子D（VEGF-D）ELISAKit[详细]

  2024-09-30 09:18

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