酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量

本文由 研域（上海）化学试剂有限公司 整理汇编

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• 酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量

  酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。A.固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体（Mab）与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体（RAMIG）结合，然后加入激素标准品或待测样品，使其与固相化的Mab结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记激素（酶标激素）。通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。B.固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）包被于固相载体，加入待测激素（样品或标准品）和抗IAA多克隆抗体（Pab）反应，进行竞争反应。然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体（HRP-GARIG）与结合在固相上的Pab反应，通过测定与固相结合的酶量，换算出未知样品中激素的含量。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：高等植物、真菌、藻类等组织或器官。（二）仪器设备：1.酶联免疫检测仪；2.高速冷冻离心机；3.恒温箱；4.连续进样器；5.涡旋仪；6.96孔微孔板；7.离心管；8.研钵或匀浆器；9.试管。（三）试剂1.洗涤缓冲液：0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液（PBS），含0.05％Tween-0；2.RAMIG溶液，或“激素-蛋白”复合物；3.0.1％封闭蛋白（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）；4.抗激素Mab，或Pab；5.激素标准品母液，及参比系列溶液（按双倍或四倍系列稀释）；6.HRP标记激素，或HRP-GARIG；7.邻苯二胺（OPD）基质液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/LpH5.0PBS，用前加入30％H2O212.5μl。三、实验步骤固相抗体型elisa。1.用方阵法滴定选择各反应物Z适工作浓度；2.将100μlRAMIG溶液包被聚苯乙烯反应板微孔，4℃湿盒，12h；3.弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；4.加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；[详细]

  2018-09-14 10:01

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• 酶联免疫吸附法（ELISA）检测霉菌毒素

  酶联免疫吸附法（ELISA）检测霉菌毒素[详细]

  2024-09-15 13:40

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• 白介素6（IL6）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）

  白介素6（IL6）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）[详细]

  2018-10-01 10:01

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• 白介素8（IL8）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）

  白介素8（IL8）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）[详细]

  2018-10-01 10:01

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• 植物激素脱落酸（ABA）ELISA 检测试剂盒说明书

  植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒ABA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ABA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ABA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ABA的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制：植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：40nmol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗ABA抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项:植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法:植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：40nmol/L（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。20nmol/L（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液10nmol/L（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液5.0nmol/L（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液2.5nmol/L（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液1.25nmol/L（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0nmol/L（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤:植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案:植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒标准品浓度（nmol/L）A4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F1.251.25样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能：植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析:植物激素脱落酸（ABA）ELISA检测试剂盒1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ABA标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ABA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-40nmol/L4、敏感度：0.1nmol/L[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 酶联免疫吸附实验（ELISA） 全套解决方案

  酶联免疫吸附实验（ELISA） 全套解决方案[详细]

  2024-09-16 12:05

  专利

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• 植物激素脱落酸(ABA)ELISA试剂盒

  植物激素脱落酸(ABA)ELISA试剂盒[详细]

  2015-04-22 00:00

  应用文章

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• 植物激素脱落酸(ABA)ELISA Kit

  植物激素脱落酸(ABA)ELISA Kit[详细]

  2024-09-30 18:00

  应用文章

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• GBT 17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法

  本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法。本标准适用于各种饲料原料、配合饲料及浓缩饲料中黄曲霉毒素B1的测定。本标准检出限为0.1μg/kg。新光智源AIC80基于液相色谱法，采用目前国际Zxian极n的黄曲霉毒素专用荧光检测器，可准确检测粮油、食品、酒水、油脂等产品中黄曲霉毒素B1,B2，G1，G2，M1含量，具有准确、可靠、快速、易操作等优点。[详细]

  2018-08-17 10:00

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• 士锋生物酶联免疫吸附试验（ELISA）操作要点

  士锋生物酶联免疫吸附试验（ELISA）操作要点[详细]

  2014-01-14 00:00

  其它

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• 酶联免疫吸附试验C1q测定法

  1原理包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的YZ，是一种竞争性YZ试验。为避免标本中内源C1q的干扰，应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。2材料（1）聚苯乙烯反应板，酶联免疫检测仪。（2）免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素（5%，pH值105）与溴化*一起室温反应10min，用01mol/L碳酸氢钠缓冲液（pH值80）充分洗涤。再与IgG一起于4℃下作用18h（20ml缓冲液中含3g纤维素和100mgIgG）。制备物用27mol/L甘氨酸缓冲液（pH值80）配成20%（W/V）悬液，贮于4℃。（3）酶联C1q用戊二醛法将辣根过氧化物酶标记C1q，再经超滤AmiconXM200滤膜）分离贮于－20℃。（4）其他试剂002mol/LTrisHCl缓冲液（pH值90）；02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值7.4），以及含005%Tween20的同一缓冲液；02mol/LEDTA（pH值76）；酶底物溶液和中止液。3方法（1）包被凝聚IgG取经002mol/LTrisHCl缓冲液（pH值90）透析过夜的凝聚IgG（100μg/ml），加入聚苯乙烯板孔内，每孔100μl，37℃包被30min后，用缓冲液洗3次（第1次、第3次用02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值74）；第2次用含005%Tween20的同一缓冲液）,真空干燥，贮于4℃。（2）取血清标本50μl，加入02mol/LEDTA（pH值76）50μl，室温作用10min，使内源C1q游离，然后加入IgG免疫吸附剂500μl，室温振荡20min，再以500r/min离心5min，得到1∶10稀释的上清液。（3）取已包被凝聚IgG的塑料反应板，每孔中加入上述上清液90μl，酶联C1q10μl（1∶100～200稀释液），室温下反应20min，然后用含02mol/LNaCl，005%Tween20的02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值74）洗3次，再加入100μl底物溶液（pH值60、01mol/L磷酸盐枸橼酸盐缓冲液50ml中，加入邻苯二胺20mg，30%（W/V）过氧化氢10μl），室温放30min，加入2mol/L硫酸50μl中止反应，于492nm读取吸光值。如果定量，可用凝聚IgG制作标准曲线，测出免疫复合物的相对含量。上海恒远主营产品/服务:ELISA试剂盒,免疫组化试剂盒，放免试剂盒，标准品，血清，抗体，培养基，细胞，生物试剂，实验耗材等欢迎联系，联系电话：021-60515410,18221290082！[详细]

  2018-11-15 10:03

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• Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量

  Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量[详细]

  2024-09-28 11:58

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• ELISA法检测丝虫抗体

  上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]

  2024-09-29 23:29

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• 铁合金-碳含量的测定-气体容量法

  铁合金-碳含量的测定-气体容量法[详细]

  2024-09-20 21:10

  标准

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• 高效毛细管电泳-紫外检测法分离测定氮基酸的含量

  GX毛细管电泳-紫外检测法分离测定氮基酸的含量[详细]

  2024-09-12 18:28

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• 高效毛细管电泳_紫外检测法分离测定氮基酸的含量

  GX毛细管电泳_紫外检测法分离测定氮基酸的含量[详细]

  2024-10-01 11:26

  实验操作

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• 植物激素脱落酸（ABA）说明书.pdf

  植物激素脱落酸（ABA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T10μg/L-300μg/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织、细胞及相关液体样本中激素脱落酸（ABA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物激素脱落酸（ABA）水平。用纯化的植物激素脱落酸（ABA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物激素脱落酸（ABA），再与HRP标记的植物激素脱落酸（ABA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物激素脱落酸（ABA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物激素脱落酸（ABA）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（600μg/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。300μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液150μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液75μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液37.5μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液18.75μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月上海恒远生物科技有限公司，专业生产代理“植物激素脱落酸（ABA）试剂盒”，质量保证，值得信赖！如果你想了解更多关于该试剂盒的详细信息，欢迎来电来函！[详细]

  2018-11-15 10:03

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• 植物激素定量分析用标样

  植物激素定量分析用标样[详细]

  2024-09-20 15:39

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• 折光率法蜂蜜中水分的含量测定

  折光率法蜂蜜中水分的含量测定[详细]

  2014-05-05 00:00

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• 电位法快速测定制剂中安乃近含量

  本文通过瑞士万通电位滴定仪，报告了用电位法测定制剂中安乃近含量的方法。以铂作电极,用自动电位计滴定,RSD在0.09%～0.25%之间,与使用《中华人民共和国兽药典》2000年版中安乃近注射液含量测定方法的测定结果一致。此方法简单、快速、准确而且自动化程度高。[详细]

  2018-08-17 10:00

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