士锋生物酶联免疫吸附试验（ELISA）操作要点

本文由 上海士锋生物科技有限公司 整理汇编

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  1原理包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的YZ，是一种竞争性YZ试验。为避免标本中内源C1q的干扰，应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。2材料（1）聚苯乙烯反应板，酶联免疫检测仪。（2）免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素（5%，pH值105）与溴化*一起室温反应10min，用01mol/L碳酸氢钠缓冲液（pH值80）充分洗涤。再与IgG一起于4℃下作用18h（20ml缓冲液中含3g纤维素和100mgIgG）。制备物用27mol/L甘氨酸缓冲液（pH值80）配成20%（W/V）悬液，贮于4℃。（3）酶联C1q用戊二醛法将辣根过氧化物酶标记C1q，再经超滤AmiconXM200滤膜）分离贮于－20℃。（4）其他试剂002mol/LTrisHCl缓冲液（pH值90）；02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值7.4），以及含005%Tween20的同一缓冲液；02mol/LEDTA（pH值76）；酶底物溶液和中止液。3方法（1）包被凝聚IgG取经002mol/LTrisHCl缓冲液（pH值90）透析过夜的凝聚IgG（100μg/ml），加入聚苯乙烯板孔内，每孔100μl，37℃包被30min后，用缓冲液洗3次（第1次、第3次用02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值74）；第2次用含005%Tween20的同一缓冲液）,真空干燥，贮于4℃。（2）取血清标本50μl，加入02mol/LEDTA（pH值76）50μl，室温作用10min，使内源C1q游离，然后加入IgG免疫吸附剂500μl，室温振荡20min，再以500r/min离心5min，得到1∶10稀释的上清液。（3）取已包被凝聚IgG的塑料反应板，每孔中加入上述上清液90μl，酶联C1q10μl（1∶100～200稀释液），室温下反应20min，然后用含02mol/LNaCl，005%Tween20的02mol/LTrisHCl缓冲液（pH值74）洗3次，再加入100μl底物溶液（pH值60、01mol/L磷酸盐枸橼酸盐缓冲液50ml中，加入邻苯二胺20mg，30%（W/V）过氧化氢10μl），室温放30min，加入2mol/L硫酸50μl中止反应，于492nm读取吸光值。如果定量，可用凝聚IgG制作标准曲线，测出免疫复合物的相对含量。上海恒远主营产品/服务:ELISA试剂盒,免疫组化试剂盒，放免试剂盒，标准品，血清，抗体，培养基，细胞，生物试剂，实验耗材等欢迎联系，联系电话：021-60515410,18221290082！[详细]

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  ELISA技术的-操作要点：优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点.本文将叙述板式注意要点,要详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果.在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物.加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡.常见elisa试剂盒：1、细胞因子检测试剂盒：如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等2、心肌梗塞检测试剂盒：如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等3、内分泌检测试剂盒：如甲状腺,,性激素,孕酮,睾酮,生长激素,生长抑素,内皮素,皮质醇,骨钙素,催乳素,促肾上腺皮质激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇等等4、肝纤维化检测试剂盒：如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶YZ因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等5、自身免疫检测试剂盒：如甲状腺,抗核抗体,类风湿因子,循环免疫复合物,抗胰岛细胞抗体等等6、肿瘤标志物检测试剂盒：如肿瘤标志物，组织多肽抗原，肿瘤相关因子等等7、优生优育检测试剂盒：8、传染病检测试剂盒如百日咳,EB病毒,A族链球菌等等9、特种蛋白检测试剂盒如免疫球蛋白,抗链O-aso,类风湿因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂.ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液应用pH计测量较正.从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存.[详细]

  2024-10-05 18:10

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  2010-08-23 00:00

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  铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响Zda的是展开剂的配制和展开系统的饱和。[详细]

  2018-08-10 10:58

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• 人ELISA试剂盒操作步骤的注意要点

  我司将在本章中正确讲解人ELISA试剂盒各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球兔ELSIA试剂盒，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，必能得出。Z后将人ELISA试剂盒板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，人ELISA试剂盒操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据的要求控制温育。人ELISA试剂盒原材料批量进口与自配的特殊配方稀释剂（预包被微孔板的批内和批间变异系数均小于10％），经过严格交叉反应和干扰测试及稳定性试验，明确了其高灵敏度对检测的样本达到好的性能。ELISA(酶联免疫吸附分析)通常用于定性和定量评估细胞因子、趋化因子、生长因子、磷酸化后目标、免疫球蛋白和其他免疫标记，保证了产品的高品质性能的同时兼顾成本。欢迎来电咨询我司人Elisa试剂盒产品：人腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)ELISA试剂盒人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒人血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)ELISA试剂盒人细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒人胃泌素释放多肽(GRP)ELISA试剂盒人复制蛋白A(RPA-70)ELISA试剂盒人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1ELISA试剂盒人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒人视网膜母细胞瘤YZ蛋白(pRB)ELISA试剂盒人生长激素结合蛋白(GHBP)ELISA试剂盒人神经激肽B(NKB)ELISA试剂盒人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)ELISA试剂盒人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒人强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA试剂盒[详细]

  2018-09-19 10:00

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• 基恩士传感器故障诊断要点

  基恩士传感器故障诊断要点1、计算机电源线故障会使汽车发动机的性能变差，经济性下降，所以在进行汽车电脑的更换作业之前应该首先检查计算机的电源线。（电源线中应该是包括了地线才算是完整的电源线）。2、如果氧传感器的电压信号高于标准值，有可能是传感器被污染，很多时候在这种情况下它会使空燃比变浓的。3、如果氧传感器的电压信号低于标准值，则可能是传感器出现故障，它会导致发动机的空燃比变稀。4、在检查氧传感器时必须用数字式万用表，或是示波器。5、如果氧传感的加热器有故障，它有可能会延长发动机的开环工作时间，使油耗量升高。6、发动机冷却液温度传感器可以用数字表或是模拟表来检查它的性能。7、某些计算机的ECT电路中，在发动机的某一温度时会控制一个内部电阻器，改变传感器上的电压，在测量中如果遇见这时的电压异常，并不能说明传感器有故障。8、测试发动机冷却液温度传感器和进气温度传感器可以使用完全相同的操作程序，**需要注意的是它们的温度变化曲线不同，所以在相同的温度时不会有相同的电压信号。9、在节气门打开，检查节气门位置传感器电压信号时，可以通过适当力度的震动来检查传感器的稳定性，某些电路虚接的故障用这种方法很有效。基恩士传感器故障诊断要点10、许多四线式节气门位置传感器中包含一个怠速位置开关，用来在节气门处于怠速位置时向发动机控制单元提供发动机的工作状态信息。11、有些情况下，可以松开节气门位置传感器的固定螺丝，转动传感器的壳体来调节节气门处于怠速位置时的电压信号。12、如果进气岐管压力传感器输出的是频率信号，就不能用普通的万用表来测试它了。13、许多进气岐管压力传感器输出的都是由大气压力转换成的电压信号，这类信号可以用接通点火开关的方法来检查它的好坏。（这种方法只能证明传感器还能工作，如果是输出精度下降用这种方法是检查不出来的。）14、在检查进气岐管压力传感器的输出电压信号时，传感器内应该有一定的真空度。大多数情况下每隔10千帕检测一次它的输出信号就能做出判断。15、测量翼板式进气流量传感器的电压信号时可以在传感器的翼板从全关转到全开的过程中进行检查，观察输出信号的电压值和连续性。16、有些热阻式或是热线式的进气流量传感器由发动机电脑提供频率变化的电压信号，这类的传感器只能用可以测试频率的万用表来检查它的电压。17、排气再循环阀位置传感器的电压信号将在阀关闭时的0.8V到阀全开时的4.5V之间变化。18、计算机用车速传感器的信号来控制变矩器的离合器、行使时的换档、以及行车电脑的数据采集。周小姐电话：零二一五六一八二零九六基恩士传感器故障诊断要点质量保证一年假一罚十原装进口[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 白介素8（IL8）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）

  白介素8（IL8）检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）[详细]

  2018-10-01 10:01

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• 电热恒温培养箱操作要点

  电热恒温培养箱操作要点[详细]

  2012-01-06 00:00

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• 高效液相色谱仪操作三要点

  GX液相色谱仪操作三要点[详细]

  2024-09-29 14:09

  专利

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• 酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量

  酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。A.固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体（Mab）与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体（RAMIG）结合，然后加入激素标准品或待测样品，使其与固相化的Mab结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记激素（酶标激素）。通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。B.固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）包被于固相载体，加入待测激素（样品或标准品）和抗IAA多克隆抗体（Pab）反应，进行竞争反应。然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体（HRP-GARIG）与结合在固相上的Pab反应，通过测定与固相结合的酶量，换算出未知样品中激素的含量。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：高等植物、真菌、藻类等组织或器官。（二）仪器设备：1.酶联免疫检测仪；2.高速冷冻离心机；3.恒温箱；4.连续进样器；5.涡旋仪；6.96孔微孔板；7.离心管；8.研钵或匀浆器；9.试管。（三）试剂1.洗涤缓冲液：0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液（PBS），含0.05％Tween-0；2.RAMIG溶液，或“激素-蛋白”复合物；3.0.1％封闭蛋白（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）；4.抗激素Mab，或Pab；5.激素标准品母液，及参比系列溶液（按双倍或四倍系列稀释）；6.HRP标记激素，或HRP-GARIG；7.邻苯二胺（OPD）基质液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/LpH5.0PBS，用前加入30％H2O212.5μl。三、实验步骤固相抗体型elisa。1.用方阵法滴定选择各反应物Z适工作浓度；2.将100μlRAMIG溶液包被聚苯乙烯反应板微孔，4℃湿盒，12h；3.弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；4.加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；[详细]

  2018-09-14 10:01

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