ELISA试剂盒抗原抗体包被的方式

本文由 上海恒远ELISA试剂盒供应商 整理汇编

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• ELISA试剂盒抗原抗体包被的方式

  ELISA试剂盒抗原抗体包被的方式上海恒远生物科技有限公司专业Elisa生产商，dai理商，欢迎广大客户前来咨询订购。　　将抗原或抗体固定在固相载体上的过程称为包被(coating)。换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法，试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12小时），以增加其吸附性能。固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。也可用亲和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。　　脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱隔夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般采用这种包被方式。[详细]

  2018-11-16 10:02

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  大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-10 00:00

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  鱼增殖细胞核抗原抗体（PCNA）ELISA试剂盒说明书[详细]

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  专利

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  2013-12-17 00:00

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  2015-03-12 00:00

  安装说明

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• 小鼠ELISA试剂盒操作方法以及保存方式

  小鼠ELISA试剂盒操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。小鼠ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。[详细]

  2018-09-19 10:00

  产品样册

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• 人抗肝可溶性抗原抗体(SLA)检测试剂盒

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  2015-03-12 00:00

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  2015-03-12 00:00

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  绿色化学聚合物-环境友好的包被应用的亲水聚合物[详细]

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• 探索微观世界的方式

  俗话说“耳听为虚，眼见为实”。然而，人眼的分辨率是存在极限的，一般情况下指在正常光线条件下肉眼可以分辨的Z近物点的距离。通常认为在 250 mm 的距离上，分辨率为 0.2 mm。为了能够更好地探索微观世界奥秘，人们开始借助工具来实现这一目的。 [详细]

  2024-09-28 12:04

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• 超纯水系统的消毒方式

  超纯水系统需要定期进行消毒来消除系统内的细菌与微生物，使设备能够正常的产水，那么超纯水系统有哪几种消毒方式呢?[详细]

  2018-03-20 11:40

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• 显微镜的七种观察方式

  一．明视野观察（Brightfield）二．暗视野观察（Darkfield）三．相差镜检法（Phasecontrast）四．微分干涉称镜检术（DifferentialinterferencecontrastDIC）五.偏光显微镜（Polarizingmicroscope）六.浮雕相衬显微镜（RC）七：荧光显微镜（FluorescenceMicroscopy）[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 可燃气体报警器的安装方式

  可燃气体报警器的安装分两部分，一是探测器的安装，再一个就是控制器的安装。探测器的安装固定式探测器一经安装就位安装,其位置就不易更改，所以在安装探测器之前要考虑以下几个问题[详细]

  2018-10-23 10:31

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• 恒温恒湿箱的应用方式是什么

  恒温恒湿箱的应用方式是什么[详细]

  2024-09-26 01:46

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• 在线微波水分仪的安装方式

  发射探头安装在输送带的下端，接收探头和超声波质量波长探头安装在输送带的正上方。 水分仪可以安装在不同的应用环境,例如管道中(没有金属),容器中，漏斗和输送带。 在一般情况下，微波水分仪需要配置一个非接[详细]

  2025-03-04 14:46

  安装说明

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• ELISA试剂盒的保温

  在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有Z贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成Z多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA试剂盒中一般不予采用。保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，Z后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。[详细]

  2018-09-27 10:00

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• Elisa试剂盒的质控

  Elisa试剂盒的质控，室内质控点的选择，以需要设置质控的点，设置质控物进行质控为原则。病毒性肝炎酶免疫检验中，有高值、中值、低值的质控物，我们认为其中以低值的质控物为Z重要，设置临界于cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是室内质控的关键。ZD抓住低值弱阳性-临界值血清的室内质控检测，是室内质控精密度观测的Z敏感的窗口，也是揭示试验成功与否的重要标志。临界值血清是室内质控血清，不是判断阴、阳性的标准，判断样品不是判断阴、阳性结果的标准是以试剂盒说明书提供的cutoff值为标准。任何人不能随意更改试剂盒说明书中提供的判断阴、阳性结果的公式。１、cutoff（CO）值又称临界值或阳性与阴性界限值CO值计算实例：（以夹心法为例）1）依据试剂盒说明书规定S/N≥2.1为阳性.（S:样品，N：阴性对照）因为S≥N×2.1判断为阳性,所以S=N×2.1为阴阳性结果分界点，即CO值.CO（cutoff）值=N×2.1当S≥CO值时，判为阳性；S2）样品结果表示法：S/CO值S/CO=样品A值÷CO值当S/CO≥1时，判为阳性；S/CO<1时判为阴性。CO值计算实例：ELISA-抗HBc（竞争YZ试验）依据试剂盒说明书规定：（1）S/N≥2.1为阳性.（S:样本，N：阴性对照）所以S≤N÷2.1，判断为阳性,当S=N÷2.1为阴阳性结果分界点，即CO值.CO（cutoff）值=N÷2.1当S≤CO值时，判为阳性；S>CO值时，判为阴性（2）样品结果新表示法：S/CO值当S/CO≤1时，判为阳性；，S/CO>1时，判为阴性。２、试剂盒的质检每块版放置临界CO值血清做试剂盒质检是十分简便可行的事。[详细]

  2024-09-11 17:56

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• 冷水机的冷凝压力控制方式

  冷水机的冷凝压力控制方式[详细]

  2015-08-12 00:00

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