实验室“老友记”篇——乐小斐带你精准规避PCR实验的隐藏雷区

演变

始于1990年的人类基因组计划（HGP）在2001年完成草图里程碑后终于在今年4月的Science杂志上发表了最 新的成果——由100余名科学家完成了之前遗留下的8%的序列。

说起HGP，其中不得不提到经典的Sanger测序法。Sanger测序法从原理上来说并不复杂，在反应体系中加入正常合成DNA序列需要的四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）外，还会在每个反应系统加入四种不同的双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP)，这样在DNA延伸过程中在遇到ddNTP时就会终止反应，最 后就能够得到一系列不同长度的DNA片段，并通过毛细管电泳的方法来获得这些片段的信息。当把这些信息放在一起以后就形成了完整的DNA序列信息，也正是有了Sanger测序法，我们才能够在HGP的年代获得那么高的成就。

Frederick Sanger本人也因为这项伟大的成就在诺贝尔的领奖台上梅开二度。

那么如何在实验中判断

测序结果是否理想呢？

在测序反应中，电泳图直观地显示了

测序的质量，良好的实验结果应该是：

1.合适的读长，以获得最 大信息

2.峰值分辨率高，一致的峰间距和峰高，背景噪音低

3.实验批次的可重复性，即实验批次内和批次间一致性佳

而PCR反应是成功测序的基础。网上有许多复杂的故障排除指南，全面涵盖了PCR的各个方面，如模板，引物等；其中PCR仪和PCR耗材同样有助于测序反应的成功或失败。

敲黑板：小乐带你避坑

PCR反应结果的影响因素和解决方案

蒸发

影响因素

解决方案

Lavibe耗材优势

• 单管、八连排管采用带管盖设计，密封性好，可有效减少样品蒸发，蒸发率≤3%

• 96孔板孔边缘加高的特别设计，可适用于密封垫、薄膜、铝膜、热封膜等多种密封方式

PCR耗材中的传热不均

影响因素

解决方案

Lavibe耗材优势

• 薄壁设计，确保高效均匀传热

PCR抑 制剂

影响因素

解决方案

Lavibe耗材优势

• 采用优质材料，不含DNA酶、无RNA酶及无热原

受污染的PCR耗材

影响因素 

外源DNA会对测序结果造成干扰 

解决方案

选用洁净的PCR耗材，不含DNA 

Lavibe耗材优势

• 采用优质材料，单管、八连排管经灭菌处理，无污染

  
  

 活动来袭，参与有礼

通过上述内容是不是对PCR实验、PCR仪器和耗材有了更多的了解~在我们日常实验室的实际操作中，从最初接触各种实验器材到熟练操作是有一个自我探索和吸取他人经验的过程的。

9月正值开学季，又有一批崭新的实验小白进入这个领域。作为这个行业的前辈们，欢迎在评论区分享PCR实验操作中的一些自身经历和实用小技巧。

评论区点赞前5的小伙伴可以获得LAVIBE 乐小斐毛绒玩具一个。

         活动时间：9月22日--30日

※活动最 终解释权归Lavibe所有