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Gokben Yildirir

副研究员

Paragon Gene Therapy

SDS-PAGE 方法 ( 基于 SDS 缓冲液体系的聚丙烯酰胺凝胶电泳 ) 在制药领域经常用来监测生物制品的纯度和及其稳定性，然而，该方法耗时耗力， 对检测结果的判断有较强的人为主观性。毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE）技术提供了一种能够替代 SDS-PAGE 解决方案，CE 的方法能够提高实验的通量以及更为准确和稳定的结果。

目前，越来越多的基因ZL产品获得了临床的审批，并且还在以飞快的速度发展。为了满足临床实验的需求，相关生物ZL的产品也在成比例的增加，与此同时，商业化的生产更需要专业的知识以及符合 GMP 法规要求的实验室。基于此，许多生产企业，包括小的生物制药公司以及规模较大的药物生产商，均选择将研发与生产的过程，外包给合同定制生产组织（Contract Development and Manufacturing Organization, CDMO）。

在位于美国马里兰州巴尔的摩市（Baltimore, Maryland）隶属于 Catalent Pharma Solutions, Inc. 的Paragon 基因ZL公司（Paragon  Gene Therapy）， 是一家专注于基因ZL、新一代疫苗和基于可扩展的腺病毒相关病毒（adenovirus associated virus, AAV） 载体的免疫疗法的 CDMO 平台。在 Paragon 的分析开发部门工作的副研究员 Gokben Yildirir 介绍说：“我们专注于类病毒颗粒和重组病毒载体的规模化生产。我们的合作用户十分广泛，用户主要以美国为主，也包含欧洲和世界其它各地的一些公司，共同来针对肿瘤和罕见疾病开发具有划时代意义的诊疗方案。

我们在重组腺相关病毒载体（rAAV）（由昆虫和哺乳动物的瞬时表达系统获得的）研发中有着丰富的经验，能够根据客户的个性化需求实现相关产品的规模化生产。

“在大多数的实例中，客户给到我们的产品一般均完成了实验室研发的阶段，处于预临床和临床测试阶段。我们的主要工作集中在制定一套合规化的生产工艺，使得该产品的规模化生产能够符合 GMP 法规的要求。生产过程中的分析以及 QC 测试阶段均包含在上述过程中，因此，分析开发部门几乎会涉及到该过程的各个阶段（从产品Z初的过程分析到ZZ产品的批间测试）以确保产品质量的稳定和安全。”

“我们主要考虑的是 rAAV 产品的纯度，异质性和稳定性。”Gokben 继续说到，“在工业中用的Z多的方法就是 SDS PAGE 技术，目前在我们实验室仍旧有一些研究在采用 SDS PAGE 的技术，但是随着越来越多的客户要求我们采用更为先进的新的解决方案，新的方案需要减少结果判断的主观性和降低人工操作带来的不确定性。我们的部门之前已经拥有SCIEX PA 800 Plus 药物分析系统，PA 800 Plus 之前主要用来进行毛细管等电聚焦（isoelectric focusing）实验，我们相信我们能够在 PA 800 Plus 上开发针对于rAAV 载体分析的 CE-SDS 方法。SCIEX 此前已经针对于生物制药领域研发了一些列的应用，我们能够基于这些已有的应用，较为轻松的开发出满足我们自己实验需求的方法。基于 PA 800 Plus 开发的 CE-SDS 方法的结果能够与 SDS PAGE 的方法直接进行比对，且 PA 800 Plus 的操作更为简单，由于两种方法采用相同的样品前处理过程，使得 PA 800 Plus 的 CE-SDS 方法能够很好的适配我们现有的工作流程。PA 800 Plus 的易用性使得我们能够基于样品的种类和浓度，更为直接的针对用户个性化的项目进行方法优化。”

相比于手动操作的 SDS-PAGE，自动化的 CE-SDS 方法具有很多优势，不论是在实验通量和重现性方面， 这两点在 GMP 的生产环境下，是十分注重的。自动化程度的提高可以明显的降低人力的操作；它可以完全避免在上样时需要一次将 15 个样品加在设备上并在同一个时间内完成分析。我们可以在 PA 800 Plus 上编辑序列，并且过夜运行，第二天一早来进行数据的积分处理。这样降低了不同操作者之间的操作时的差异所带来的的变化，配合上自动化的数据分析，能够进一步提高结果之间的一致性。CE-SDS 方法同样能够带来更高的分辨率，使得我们能够轻松的检测出样品中的杂质。

Gokben 总结说：

“ 

基因ZL领域虽然是一个全新的领域，但是发展十分迅速，我们正在积极的与制药生厂商和政府监管部门合作，针对新型ZL方案的产品的规模化生产和工序进行研发。SCIEX 正在与我们及其它公司进行紧密的合作，持续不断的研发和优化相关的方法，以提供更多的解决方案。

”

“相比于手动操作的 SDS-PAGE 方法，自动化的 CE-SDS 在分析通量和重现性方面有着诸多优势。”