酶联免疫吸附法（ELISA）检测霉菌毒素

霉菌毒素主要是指霉菌在其所污染的食品或是饲料中产生的有毒代谢产物，在饲料的加工、运输和贮存过程中都可能会产生。据统计，已知的霉菌毒素有300多种，常见的毒素有：黄曲霉毒素，玉米赤霉烯酮/F2毒素，，T2毒素，烟曲霉毒素，赭曲霉毒素，呕吐毒素，麦角毒素等。

霉菌毒素污染多为复合型，饲料中大多存在3种以上的霉菌毒素污染。霉菌毒素通过饲料或食品进入人和动物体内，引起人和动物的急性或慢性毒性，损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、造血组织及皮肤组织等。因此，霉菌毒素的检测必须引起重视，防患于未然。

1 霉菌毒素检测方法

饲料中霉菌毒素检测方法主要有目测法，薄层色谱法（TLC），GX液相色谱法（HPLC），酶联免疫吸附法（ELISA），放射免疫法（KIA）及快速试纸检测法。

其中酶联免疫吸附法（ELISA）此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。经过三四十年发展，ELISA技术已经作为一个成熟的快速筛选方法，应用于不同的行业，美国USDA，EPA将众多ELISA的方法作为官方快速筛选方法。

2 酶联免疫吸附法（ELISA）

酶联免疫吸附法（ELISA）的基本原理是，在合适的载体上，酶标记抗体或抗原与相应的抗原或抗体结合成酶标记抗体抗原复合物，在酶底物的参与下，复合物上的酶催化底物使其水解成为另一种带色物质，其核心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色深浅来进行分析。

该法优点突出，1）灵敏度高，干扰小：抗体抗原的免疫反应特异性很强，结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小。2）操作简便快捷：由于特异性强，简化了样品的预处理和提取纯化过程，同时测定时间短。3）安全性高，污染少，成本低廉：不需要昂贵的测定仪器，且所用试剂也相对较少，毒素标准品的浓度可以很低，减少了对检测人员和环境的潜在危害和污染。尤其适用于大批量样品的快速测定。

3试剂盒

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。根据待测物的情况及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。如：双抗体夹心测抗原、双抗体夹心测抗体、间接法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗原、竞争法测抗体等，目前的试剂盒大多属于抗体包被直接竞争ELISA法。

目前国际上比较认可的霉菌毒素检测模式是，试剂盒筛选加大型仪器确证方法配合使用。试剂盒应用于样品的实验室快速筛选，结果准确性比较高，对于大批量的样品测定分析可有效节约成本，缩短分析时间。

4 试剂盒实验示例

1，称粉碎好的样品5g

2，加入0.5gNaCl

3，加入25mL70%甲醇/水

4，超声萃取5min

5，4000转离心5min

6，离心后的样品取上清液过玻璃纤维滤纸过滤

7，加入100ul的酶标记物到混合孔，再加入50ul的标准品及样品到相应混合孔，混匀后转移100ul到相应的测试孔中。加入50ul抗体到对应的每一个测试孔。

8，震荡5s，20-28℃孵育10min

9，清洗液洗板4次

10，加入100ul显色液,显色8min

11，显色8min后

12，加入100ul停止液，读板。

根据与标准品的颜色比对来进行快速筛选，对于霉菌毒素处于国家规定限量范围左右的样品可再通过大型仪器进行更极ng准的定量分析。

Beacon试剂盒

Casco试剂盒和免疫亲和柱

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