ELISA实验稀释血清具体步骤

　　ELISA实验稀释血清具体步骤

　　在生物医学研究中，ELISA(酶联免疫吸附测定)实验是一种极为重要且广泛应用的技术，它利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过酶促反应显色来定量或定性检测样品中的特定蛋白、激素、抗体等生物分子。在进行ELISA实验时，稀释血清是至关重要的一步，它不仅关系到实验结果的准确性，还直接影响到实验的可重复性和灵敏度。下面，BUNSEN本生小编将详细阐述ELISA实验中稀释血清的具体步骤及注意事项。

　　一、实验前准备

　　1 材料准备 -

　　ELISA试剂盒：确保试剂盒在有效期内，并按照说明书要求储存。

　　- 血清样本：新鲜或冷冻保存的血清样本，避免反复冻融。

　　- 稀释液：试剂盒提供的专用稀释液或PBS(磷酸盐缓冲液)等适宜的稀释介质。

　　- 移液器及枪头：确保干净无污染，枪头规格根据需要转移的体积选择。

　　- EP管或96孔板：用于稀释血清及后续实验步骤。

　　- 振荡器：用于混合稀释后的血清，确保均匀。

　　2 环境准备 - 实验区域应整洁、无尘，避免交叉污染。

　　- 温度控制在适宜范围内，通常室温即可，但某些特定实验需遵循试剂盒要求。

　　二、稀释血清的步骤

　　1 确定稀释比例 - 根据实验目的和试剂盒说明书，确定血清的稀释比例。通常，ELISA试剂盒会提供推荐的稀释范围或具体稀释倍数。

　　若无明确说明，可先进行预实验，通过不同稀释比例的血清检测，确定稀释度。

　　2 稀释操作

　　1. 标记EP管或孔板：清晰标记每个EP管或孔板上的样本编号、稀释比例及日期等信息。

　　2. 加入稀释液：首先，向每个EP管或孔板中按需要量加入稀释液。例如，若计划进行1:100稀释，先加入99μL稀释液。

　　3. 加入血清样本：使用移液器准确吸取1μL血清样本，缓慢加入已含有稀释液的EP管或孔板中，同时轻轻吹打或振荡混匀，避免产生气泡。

　　4. 重复稀释：若需进一步稀释，可从上一步骤的稀释液中再取适量加入新的稀释液中，重复上述操作，直至达到所需的稀释比例。

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