如何运用单克隆-多克隆抗体进行细胞染色

在细胞染色实验中，常用单克隆或多克隆抗体。一般而言，多抗能够提供较强的信号，而单抗的背景清晰。只要注意其特点，2种抗体都可以有效地利用。

（一）用多克隆抗体进行细胞染色
良好的多抗血清包含多种针对抗原不同表位的抗体，虽然空间竞争阻止大量抗体与抗原分子结合，但数个抗体分子的结合往往得到较强的信号。能够产生信号强信号是用多抗进行细胞染色的主要优点。
多抗血清中除了含有特异性抗体外，还含有较高浓度的无关抗体，这些抗体包括动物血清中所有的抗体成分。这些抗体是细胞染色的Zda。用多克隆抗体可以带来令人满意的结果，但必须仔细设立对照。这包括仔细滴定一抗，尽量减低无关抗体产生的信号，仔细比较对照血清的染色结果。
即使血清来自未经免疫的动物，在高浓度情况下，也能引起较强的背景色。部分原因是由于抗体的非特异性附着在经固定后的细胞上，部分是由于血清中抗体特异性结合所致。由于这些抗体在血清中并非主要活性成分，因此可以通过稀释抗体使其信号降低至不被检测出的程度。第二种降低这些背景信号的方法是用丙酮干燥粉预先吸收多抗血清。第三种方法是去除血清中的非特异性抗体，利用免疫亲和纯化的方法可以得到适用于细胞染色的良好的抗体来源。在某些情况下，利用免疫亲和法纯化抗体是得到清晰染色结果的基本步骤之一。
由于多抗血清包含的抗体通常是针对抗原的多种表位，包括不易变性的表位，因此这些抗血清在用于经过彻底固定的标本染色时效果较好，尤其是用于经甲醛固定标本的染色。

（二）用单克隆抗体进行细胞染色
用单克隆抗体进行细胞染色往往得到良好结果，因为单抗纯度高、特异性强，在较宽的浓度范围内染色的背景色清晰。对经有机溶剂或甲醛固定的细胞，大部分单抗可以得到较好的染色结果，尽管如此，部分单抗的染色结果不理想。这可能由下列两个原因造成：抗原表位被覆盖在细胞结构之内；或者在固定过程中被破坏。
用单克隆抗体进行细胞染色时偶尔也出现交叉反应。这种交叉反应是特异性的，可能是因为在不同的细胞组分中存在共同表位。单抗与细胞内高浓度多聚体蛋白，如细胞骨架蛋白所致的交叉反应是常见的。这种交叉反应一般较弱，但如果抗原浓度较高且双价连接，将使交叉反应信号增强。应尽可能应用一系列针对同一抗原不同表位的单克隆抗体来确定抗原的位置。

（三）用混合的单克隆抗体进行细胞染色
应用混合单抗进行细胞染色能够增强染色信号，只要混合的单抗没有竞争作用，增强信号强度意味着实验成功。但应注意，在混合抗体前，每一种单抗应分别经过测试。

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