Hieff Unicon^® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit 一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)

Hieff Unicon^® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒，已经添加了冻干保护剂，可用于冻干。

 

产品组分

组分编号	组分名称	13667ES60 (100 T)	13667ES80 (1000 T)	13667ES92 (10000 T)
13667-A	4×Hifair® V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13667-B	MgCl2（25 mM）	500 μL	5 mL	50 mL
13667-C	10×Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix	10 μL	100 μL	1 mL
13667-D	冻干保护剂	700 μL	7 mL	70 mL

【注】10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

运输与保存方式

1.运输方式：冰袋运输。

2.保存方式：Part 1：13667-A【4×Hifair^® V Lyo-Buffer】-20℃保存，有效期1年。

13667-D【冻干保护剂】-20℃保存，有效期1年。

Part 2：13667-B【MgCl₂（25 mM）】 4℃保存，有效期3年。

13667-C【10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存，有效期6个月。

3.本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair® V Lyo-Buffer	6	1×
Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix	0.1	-
MgCl2 (25 mM)	2.5
冻干保护剂	7 μL
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.1 μM
模板 RNA	1-5 μL	-
RNase Free H2O	to 25 μL	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

参考扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
		60℃b	30 secc

【注】                                                          
a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

1.辅料配方发生微量的变化，需重新测定冻干参数，并做相应调整。

2.冻干设备要求：

冷阱盘管表面温度≤-60℃

板层温度≤-45℃，温度均一性±1℃（性能详细说明及验证方案咨询翌圣生物技术人员）

可做压升测试（冻干生产前，做泄漏率测试）

3.环境要求：

溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行，环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核，影响溶液的结晶的过冷度，导致产品质量不一致性。

4.真空控制

掺气方式：建议掺入气体为高纯氮气

5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考（冻干设备升华效率≥1mm/小时）

		温度	斜率时间	时间	真空 Pa	备注
预冻	1	-45℃	——	2 h	——	常温最快速率降温
	2	-45℃	——		——	保持，根据包材验证保持时间
真空	3	-45℃	——		15
升华阶段	4	-40℃		10 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
	5	0℃	2 h	0 h	15
	6	25℃	2 h	4 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
解析干燥	7	30℃		2 h	0
含水量控制	8	压升测试重试时间：30 min				压升测试：2 min<5 Pa

6.实验过程中请使用RNase free耗材。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

8.本产品仅作科研用途！

 

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产品名称	货号	规格
10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2)	13168ES60	100 T
	13168ES80	1000 T
	13168ES92	10000 T
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）	11301ES12	12 KU
	11301ES75	300 KU
Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 50 U/μL	10724ES01	100 μL
	10724ES94	1 mL
	10724ES95	25 mL
	10724ES96	100 mL
Murine RNase Inhibitor (40 U/µL, Glycerol-free)	10701ES05	2 KU
	10701ES10	10 KU
	10701ES20	20 KU
	10701ES60	100 KU

 

HB210715