独家专利Taq酶双封闭抗体Hieff^® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody

分别用翌圣双封闭抗体以及T公司抗体对Taq 酶封闭后通过ARMS-PCR技术检测阳性样本，发现翌圣双封闭抗体封闭的Taq酶在ARMS-PCR扩增中分型准确，灵敏度更高。

图3.ARMS-PCR扩增曲线图

用传统封闭抗体与双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶，配置成含引物探针的全预混液，在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天，扩增10000拷贝ASF质粒，发现扩增曲线和Ct值无明显变化。 

图4.4℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图

图5.37℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图

某些引物配合特定buffer和仪器时，会出现基线上漂的情况，但双封闭抗体能解决基线上漂问题，更有利于基线平稳。

图6.N基因(A)、ACT基因(B)扩增曲线图

用双封闭抗体封闭的反应液扩增100000、10000、1000、100拷贝ASFV/ACT双质粒，制作标准曲线。由图7可以看到，两者线性均良好。

图7. 双封闭反应液制作ASFV基因、ACT基因标准曲线图

分别用进口T公司抗体和翌圣双封闭抗体（Cat#31303）封闭Taq酶，并在95℃下热激20 s，检测酶活。可以看到95℃热激20 s后，31303可释放95%以上的酶活，与T公司抗体相当。

表1.95℃下热激20 s酶

翌圣双封闭抗体（Cat#31303）分别封闭三种类型Taq酶（野生型+2种突变型），封闭比例为1μg : 5U，测量荧光值以及封闭效率。发现对于不同类型的Taq酶，翌圣双封闭抗体（Cat#31303）封闭效果均较好。

表2.不同类型Taq酶的封闭效率

以水为模板作为阴性对照，小鼠基因组为模板作为阳性对照，扩增不同批次的31303，观察条带，发现样品未扩增出目的片段，说明抗体不存在小鼠基因组残留。

图8 小鼠基因组残留检测图

注：-为阴性对照，+为阳性对照，1-5为31303不同批次样品

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