ER-Tracker Blue-White DPX,for live-cell imaging 内质网蓝色荧光探针(活细胞)

产品描述

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，蓝色荧光，属于DapoxylTM(DPX)家族成员之一。DPX系列染料均具有长发射波长、高吸光系数、高量子产量、较大斯托克司频移等特点。但这些染料具有环境敏感性，会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。

本品为溶于DMSO的1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液，推荐工作浓度为100 nM-1 μM。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反复冻融。

注意事项

1）避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。

2）DMSO有毒，请小心操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1. 试剂准备

使用前将ER-Tracker Blue-White DPX回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2. 细胞样品处理及染色

2.1 将1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度100 nM-1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
        注：由于ER-Tracker Blue-White DPX探针具有较高光敏感性，会产生波动较大的发射吸收峰值，使用长通DAPI滤光片效果最理想。 另，操作过程中需尽量避光。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3． 细胞固定及透化处理

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞10-20 min。

注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Blue-White DPX留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 （可选）透化处理：若细胞还需进行后续染色，需对细胞利用0.2% TritonX-100 透化10 min。

3.3 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5 min，共2次。镜检即可。

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