游泳池水中大肠菌群检验方法

　　游泳池水中大肠菌群检验方法：
　　一、大肠菌群多管发酵法测定
　　1定义
　　大肠菌群（coliform bacteria）系指一群在36±1℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
　　2 仪器
　　见《公共场茶具的大肠菌群测定方法》。
　　3培养基和试剂
　　3.1乳糖蛋白胨培养液
　　3.1.1成分：蛋白胨 10g，牛肉膏 2g，乳糖 5g，氯化钠 5g，1.6%（V/V）溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，蒸馏水 1000mL
　　三.倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
　　3.1.2配法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解，调pH到]7.2～7.4。再加入1ml 1.6%溴甲酚指示剂，充分混匀，分装到含有倒管的试管中，115℃高压灭菌15min。
　　3.2伊红美兰琼脂
　　见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
　　3.3革兰氏染色液
　　风《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
　　3.4染色法
　　见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
　　4推测性试验
　　4.1在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。
　　4.2在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10ml。
　　4.3轻摇试管，使液体充分混匀，置36±1℃培养箱中，培养24h。
　　4.4观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
　　5证实试验
　　5.1平板分离
　　自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
　　5.2复发酵试验
　　挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36±1℃培养箱中，培养24h。
　　5.3凡乳糖发酵管Z终产酸产气，革兰氏染色为阴性的Z大可能数（MPN）检索表得出1000ml水样中总大肠菌群的MPN值。

取一定的游泳池水，稀释，涂大肠杆菌培养基平板，37度培养一昼夜，统计菌落数，乘以稀释倍数即为取样水中大肠杆菌数。